OP-IVM: 난소 회수 후 체외 성숙과 부인과 수술 결합

요약

부인과 수술 전 체외 성숙(IVM)은 난낭 처리 후 IVM을 일상적인 부인과 수술과 결합하고 불임 보존을 위한 기존의 IVM 응용 프로그램의 연장 역할을 합니다.

초록

부인과 수술 (OP-IVM) 전에 체외 성숙 (IVM)의 사용은 일상적인 부인과 수술과 난낭 성 검색 다음 IVM을 결합하는 기존의 IVM의 확장이다. OP-IVM은 불임 보존(FP) 또는 체외 수정 및 배아 전달(IVF-ET)과 같은 불임 치료가 필요한 양성 부인과 수술을 받는 환자에게 적합합니다. 수술실에서 양성 부인과 수술을 받은 환자는 먼저 마취되고 초음파 유도 미숙한 여포(IMFA) 치료를 받습니다. 후속 부인과 수술이 수행됨에 따라 적혈구-오낭 복합체(COC)를 검사하고 미숙한 COC가 IVM 배지로 옮겨져 IVF 실험실에서 28-32시간 동안 배양됩니다. 평가 후, MII 단계에서 성숙한 난모세포는 FP용 액체 질소로 선택및 냉동 보존되거나 IVF-ET를 위한 내트라피플라스혈 정자 주입(ICSI)에 의해 수정될 것이다. IVM과 부인과 수술을 결합함으로써 폐기된 미숙한 난모세포는 저장되어 보조 생식 기술(ART)에 사용될 수 있습니다. OP-IVM의 절차, 중요성 및 중요한 측면은 이 문서에서 설명되어 있습니다.

서문

IVM은 인간의 미숙한 난모세포가 IVF-ET 또는 FP를 위한 성숙을 시험에서 배양하는 ART입니다. IVM에서는 배란 유도 약물이 사용되지 않으므로 난소 과자극 증후군(OHSS)^1,2와같은 통증, 재정적 부담 및 합병증을 감소시킨다. 또한, IVM은 암 환자의 FP및 배란 유도^요법을받을 시간이 없거나 시간이 없는 호르몬에 민감한 환자의 불임 치료에 특히 적합하다. 따라서, 수온세포의 수가 회수되지만, 임상 임신율(CPR) 및 살아있는 출생률(LBR)은 IVF^4,5,IVM의 그 보다 낮지만, IVM은 그 자체로 고유한 장점을 갖는다.

자궁내막 병변, 하이드로살핀스 또는 난소 낭종을 가진 불임 환자는 일반적으로 ART 처리 의 앞에 부인과 수술을 하고, 그들의 난모세포는 일반적으로 미숙합니다. OP-IVM은 미숙한 난모세포를 회수하고 IVF-ET 또는 FP에 대한 성숙이 될 때까지 시험관 내에서 성장하기 위해 유도질 초음파를 사용합니다. OP-IVM은 난소 과잉 자극 주기에서 흔히 발생하는 합병증을 줄이고 시간과 비용을 절약합니다. 비옥한 환자를 위해, OP-IVM는 일상적인 부인과 수술을 하는 동안 "불임 보험"으로 봉사할 수 있었습니다.

더욱이, 전기카우터리^6,7 및 난소 종양 절제술과 같은 부인과 수술에 의한 손상은 부인과 수술 전에 난소 회수를 통해 감소될 수 있었습니다. 따라서 일상적인 부인과 수술과 비교하여 OP-IVM은 불임 치료 중 수술 횟수를 줄이고 난소 수술 중 기능성 난소 세포의 손실을 예방할 수 있습니다.

이전 연구는 난낭 처리의 추가 절차가 외과 합병증 및 불리한 임신 결과를 증가하지 않을 것이라는 점을 보여주었습니다, 또는 입원^8을연장합니다. 몇몇 환자는 OP-IVM^8를통해 살아있는 출생을 주었습니다, 이 방법의 타당성을 나타내는. 이 논문은 OP-IVM뿐만 아니라 OP-IVM의 절차 및 중요한 점뿐만 아니라 혜택을 누릴 수있는 환자의 특성을 설명하고 인간 oocyte 성숙의 평가를 논의합니다.

프로토콜

참고: OP-IVM 방법과 관련된 연구는 북경대학교 제3병원과 베이징대학교 윤리위원회(2014S2004)의 기관심사위원회(IRB)의 승인을 받았습니다. OP-IVM의 요약은 그림 1에표시됩니다. 단계별 절차는 다음 섹션에서 소개됩니다.

1. 적절한 환자에게 OP-IVM 도입

1. 단계 1.1.1-1.1.3.에 설명된 것과 같은 OP-IVM의 혜택을 받을 수 있는 잠재적인 환자를 확인하십시오.
   1. 복강경 난소 드릴링 수술이 필요한 클로미펜 저항 환자를 위한 다낭성 난소 증후군(PCOS) 환자.
   2. 자궁 내시경 근 종 절제술, 다결 절제술, 중격 및 복강경 관 수술의 경부 절제술, 그리고 OOphorocystectomy와 같은 양성 부인과 수술이 필요한 불임 환자는 ART 치료 전에.
   3. 화학 방사선 요법 또는 방사선 요법을 받고 있는 암 또는 혈액학 질환을 가진 환자.

2. 통보된 동의

1. OP-IVM이 유익한 이유, 절차, IVM 난소(IVF-ET 또는 냉동 보존), 추정 된 CR 및 LbR 및 가능한 합병증의 사용이 도움이 될 수 있는 이유를 포함하여 환자에게 전체 정보를 제공합니다. 환자에게 동의서에 서명하여 정보에 입각한 동의를 하도록 요청하십시오.

3. 라벨 및 IVM 오낭 매체 준비

1. 문화 접시 및 튜브에 대한 환자의 이름과 날짜가 있는 인쇄 식별(ID) 라벨.
2. 여포 자극 호르몬 (FSH)의 0.075 IU /mL과 0.075 IU /mL로 보충 된 IVM 배지의 0.5 mL을 추가 하여 4 웰 플레이트의 각 웰에 황체 호르몬 (LH)의 0.075 IU/mL을 추가합니다. 매체를 오일로 덮습니다.
   참고: 라미나르 흐름 클린 벤치에서 이러한 모든 절차를 수행합니다.
3. 사용 전에 5% CO₂ 및 5%_O2 이상을 함유한 가습 공기에서 37°C에서 IVM 난소성 배지로 4웰 플레이트를 예동한다.

4. 수술실에서 마취 관리

1. 마취를 투여하기 전에 환자의 이름을 확인하십시오.
2. 정맥 내 마취전문의에 의해 환자를 마취.

5. 오낭 검색 수행

1. 문화 권식 요리 및 튜브에 이름, 날짜 및 ID로 라벨을 태그합니다.
2. 환자를 방광 석상 절제술 위치에 놓는다; 지속적으로 소독, 드레이프, 따뜻한 식염수로 질을 문질러.
3. 초음파 프로브를 질 내부에 놓습니다. 두 난소에서 여포 수를 스캔하고 기록합니다. 천자 부위로 난소에 가장 가까운 위치를 찾아, 내장, 방광 및 큰 혈관을 피하십시오.
4. 흡인 여포 액.
   1. 구멍을 뚫기 전에 pH 안정 처리 매체로 바늘을씻으세요(재료표 참조).
   2. 초음파의 지도하에 난소에 19 G, 단일 루멘 포부 바늘을 주입하십시오.
   3. 프로브에 가장 가까운 명확한 경계가있는 더 큰 여포를 펑크. 낮은 위치에서, 신속하게 헤파린의 25 U / mL로 보충 헹구는 용액을 주입. 80-90 mmHg의 압력하에서 바늘로 여포액을 흡인하고 바늘을 살짝 회전하여 가능한 한 많은 여포 액을 흡인시합니다. 이 비행기의 근면에서 다른 여포를 뚫는다.
      참고: 포부 동안, 난모세포가 함유된 여포액은 음압하에서 멸균 10mL 시험관으로 흐르게 됩니다. 헤파린은 포부 과정을 용이하게하기 위해 여포 유체 점도를 줄일 수 있습니다.
   4. 난소에서 바늘을 제거 (질 벽에 바늘을 유지). 초음파 프로브의 방향을 조정하고 다른 평면에 남아있는 여포를 펑크. 직경 ~5-9mm의 모든 여포를 흡인하려고합니다.
      참고: 프로브의 위치를 조정하여 항상 난소에 가장 가깝게 유지합니다. 부상과 출혈을 줄이기 위해 적절한 힘으로 질 요새를 누릅니다.
   5. 하나의 난소로 마무리 한 후 바늘을 당겨, 핸들링 매체로 바늘을 씻고, 동일한 방법을 사용하여 다른 쪽에 구멍을 뚫는다.
      참고: 25-30분 이내에 완전한 여포 포부.
5. 환자의 이름과 ID를 확인한 후 몇 분 이내에 수술실에서 IVF 실험실로 여포액을 옮기십시오.
   참고: 응고를 방지하기 위해 가능한 한 빨리 IVF 실험실 벤치로 흡인 된 여포액을 전달합니다.
6. 모든 여포를 뚫은 후 B 모드 초음파로 골반 구멍에서 활성 출혈을 감지합니다. 스펙큘럼을 삽입하고, 천자 부위에서 활성 출혈을 감지하기 위해 후방 fornix의 팁을 가리킵니다.
   참고: 난소 위치가 정상이고 난소 검색이 신중하게 수행되는 경우 질 천자 부위에서 활성 출혈을 관찰해서는 안 됩니다. 압축 후에도 계속되는 가벼운 출혈의 경우 멸균 거즈를 질에 2-4 시간 동안 유지하십시오. 2-4 시간 동안 혈관 집게가있는 클램프를 사용하여 작은 동맥에서 과도한 출혈을 제어하십시오. 골반 구멍이나 난소에서 출혈, 거의 발생하지 않습니다, 복강경 수술에 의해 전기 응고에 의해 제어되어야한다.

6. 부인과 수술

1. 환자의 필요와 상태에 기초하여, 난소 리찰 후 적절한 부인과 수술을 수행.
   1. clomiphene 저항을 가진 다낭성 난소 증후군 (PCOS) 환자를 위한 복강경 난소 드릴링 수술을 수행하십시오.
   2. 자습성 근종 절제술, 다결절제술, 중격 및 복강경 관 수술의 경부 절제술 및 난수 증 절제술과 같은 ART 치료 전에 불임 환자를 위한 양성 부인과 수술을 수행하십시오.
   3. 화학 방사선 요법을 받아야하는 암 또는 혈액 학 질환을 가진 환자의 불임 냉동 보존을 위한 ovariectomy를 수행하십시오.
      참고: 이러한 부인과 수술은 기본적이고 표준화된 임상 작업입니다. 다양한 국가와 병원의 운영 지침은 비교적 유사해야 합니다.

7. IVM 수행

참고 : 37 °C 호모열 플랫에 IVM의 전체 과정을 수행합니다.

1. 흡인 된 여포 유체를 70 μm 나일론 세포 여과기를 필터링합니다. 배양 튜브와 스트레이너를 사전 따뜻하게 데운 pH 안정 처리 매체로 반복적으로 헹굽니다. 모든 미숙한 COC가 문화 요리로 완전히 전달되도록 하십시오. 100 x 15mm 페트리 접시에 여과 된 액체, 헹도 및 문화를 수집합니다.
2. 40배율로 입체범위 하에서 COC(그림2)를검사합니다. 미숙함을 미리 데운 IVM 난낭 매체로 빠르게 이송합니다.
   참고: 작업자의 습관에 따라 적절한 배율을 선택합니다.
3. 배양 미숙한 COC의 수를 기록합니다.
4. 배양 된 COC의 수에 대해 환자에게 알립니다. 환자 및 그 파트너와 정액의 수집을 토론하십시오. 정상적인 절차에 따라 정자 추출을 수행합니다.
5. 미숙한 COC를 37°C에서 가습공기로 배양하여 28-32h의 경우 5% CO2 및 5%_O2를 함유하고 있다.
6. 난피성 성숙도를 평가합니다.
   1. 40배 배율로 입체범위 아래 유리 파스퇴르 파이펫을 사용하여 피펫팅을 반복하여 적수 세포를 디누드합니다. 극체(PB)의 압출을 검사하여 난모세포의 발달 단계를 식별합니다. 명확한 형태학적 특성을 가진 COC, 메타위상 II(MII), 메타위상 I(MI), 발아 소포(GV)의 대표적인 이미지는 그림 2를 참조하십시오.
      참고: 수직 화염(예: 분젠 버너의)을 사용하여 유리 파스퇴르 파이펫의 직경을 오사이클의 크기로 조정합니다.
   2. MII 난마구를 계산하고 숫자를 기록합니다.
   3. IVF 또는 유리화에 대한 성숙한 난모세포를 선택합니다.
      참고 : 난모세포가 IVF를 위해 성숙한 날에 정자를 수집하지만 난모세포 진동은 하지 않습니다.
   4. 다른 10-14 h에 대한 적운 세포를 가진 원래 IVM 배양 배지에서 GV 및 MI 단계에서 미숙한 난모세포를 배양한다. 7.6.2-7.6.3 단계를 반복합니다.

8. ICSI 또는 난소 체증 을 수행

1. 생식^센터8의표준 절차를 따르십시오.

9. 배아 및 배아 냉동 보존 수행

1. 생식^센터8의표준 절차를 따르십시오.

결과

2019년 12월까지 OP-IVM은 274명의 환자를 불임 보존에 사용했습니다. 2014년에서 2016년 사이 158명의 환자의 배아 및 생식 결과는 이전 종이^8에서간행되었습니다. 다음 예제에서는 2016년에 OP-IVM을 수신하는 PCOS 환자를 위한 절차를 설명합니다. 환자는 1 차 불 모로 진단 된 28 세, 왼쪽 부전 낭종, 그리고 PCOS. 그녀는 2016년 9월^28일에복강경 낭포절제술과 OP...

토론

이 문서에 설명된 OP-IVM 방법은 기존의 IVM 응용 프로그램으로 확장되며 난낭처리 검색 후 IVM을 일상적인 부인과 수술과 결합합니다. 부인과 수술에서 분실되었을 난동체는 이제 추가 수술 위험없이 IVF-ET 또는 FP에 사용할 수 있습니다. OP-IVM은 PCOS 환자에서 난소 드릴링 전에 난소 시동을 회수하는 데 처음 사용되었습니다. 그것의 신청은 곧 화학 방사선 요법을 필요로 하는 양성 부인과 수술 및 암 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
19 G single-lumen aspiration needles	Cook, Australia	K-OPS-7035-REH-ET
4-well plate	Corning
70 μm nylon cell strainer	Falcon, USA	352350
CO2 Incubator	Thermo
Culture oil	Vitrolife, Sweden	10029,OVOIL	Step 3.2.
FSH & LH	Ferring Reproductive Health, Germany	MENOPUR®
Glass Pasteur pipette	Hilgenberg GmbH, Germany	3154102-26
G-MOPS medium			pH-stable handling medium for washing the needle before puncturing
IVM medium	Origio, Denmark	ART-1600-B
Laminar Flow Clean Benches	ESCO
Petri dish	Thermo Fisher Scientific, Denmark	263991
pH stable handing media designed to support the handling and manipulation of oocytes and embryos outside the incubator	Vitrolife, Sweden	10130, G-MOPS PLUS	Step 7.1.
Rinse solution	Cook, Australia	K-SIFB-100
Stereoscope	Nikon