АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Созревание in vitro (IVM) перед гинекологической операцией (OP-IVM) сочетает в себе IVM после извлечения ооцитов с обычной гинекологической хирургией и служит расширением обычных применений IVM для сохранения фертильности.

Аннотация

Использование созревания in vitro (IVM) перед гинекологической операцией (OP-IVM) является расширением обычного IVM, которое сочетает в себе IVM после извлечения ооцитов с обычной гинекологической хирургией. OP-IVM подходит для пациентов, перенесших доброкачественную гинекологическую хирургию, у которых есть потребность в сохранении фертильности (FP) или лечении бесплодия, таком как экстракорпоральное оплодотворение и перенос эмбрионов (IVF-ET). В операционной пациентки, перенесшие доброкачественную гинекологическую операцию, сначала обезболиваются и получают ультразвуковое лечение незрелой аспирации фолликула (IMFA). При проведении последующей гинекологической операции исследуют кучевые ооцитарные комплексы (КОК), а незрелые КОК переводят в среду IVM и культивируют в течение 28-32 часов в лаборатории ЭКО. После оценки зрелые ооциты на стадии MII будут отобраны и криоконсервированы в жидком азоте для FP или оплодотворены интрацитоплазматической инъекцией сперматозоидов (ICSI) для IVF-ET. Сочетая IVM с гинекологической хирургией, незрелые ооциты, которые были бы выброшены, могут быть сохранены и использованы для вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ). Процедура, значимость и критические аспекты ОП-IVM описаны в данной статье.

Введение

IVM - это АРТ, в которой человеческие незрелые ооциты культивируются in vitro до созревания для IVF-ET или FP. В IVM не используются индукционные препараты для овуляции, что уменьшает боль, финансовую нагрузку и осложнения, такие как синдром гиперстимуляции яичников (СГЯ)1,2. Кроме того, IVM особенно подходит для ФП больных раком и лечения бесплодия гормонально-чувствительных пациентов, которые могут быть не в состоянии или не иметь времени для получения индукционной терапии овуляции3. Поэтому, хотя количество извлеченных ооцитов, клиническая беременность (СЛР) и коэффициент живорождений (ЛБР) ниже, чем у ЭКО4,5,КБМ имеет свои уникальные преимущества.

Бесплодные пациенты с поражениями эндометрия, гидросальпинксом или кистами яичников обычно проходят гинекологическую операцию перед лечением АРТ, и их ооциты обычно незрелые. OP-IVM использует управляемое трансвагинальное ультразвуковое исследование для извлечения незрелых ооцитов и выращивания их in vitro до созревания для IVF-ET или FP. OP-IVM сочетает IVM после извлечения ооцитов и гинекологической хирургии, тем самым уменьшая осложнения, которые распространены в контролируемых циклах гиперстимуляции яичников и экономя время и деньги. Для фертильных пациентов OP-IVM может служить «страхованием фертильности» при прохождении обычной гинекологической хирургии.

Кроме того, повреждения, вызванные гинекологическими операциями, такими как электрокоагрия6,7 и резекция опухоли яичника, могут быть уменьшены путем извлечения ооцитов перед гинекологической операцией. Поэтому, по сравнению с обычной гинекологической хирургией, ОП-IVM может уменьшить количество операций во время лечения бесплодия и предотвратить потерю функциональных ооцитов во время операции на яичниках.

Предыдущее исследование показало, что дополнительная процедура извлечения ооцитов не увеличит хирургические осложнения и неблагоприятные исходы беременности, а также не продлит пребывание в больнице8. Некоторые пациентки давали живорождение через ОП-IVM8,что указывает на целесообразность применения данного метода. В этой статье описываются характеристики пациентов, которые могут извлечь выгоду из OP-IVM, а также процедуры и критические точки OP-IVM и обсуждается оценка зрелости ооцитов человека.

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Исследования, связанные с методом OP-IVM, были одобрены институциональным наблюдательным советом (IRB) Третьей больницы Пекинского университета и Комитетом по этике Пекинского университета (2014S2004). Сводка OP-IVM показана на рисунке 1. Пошаговая процедура будет представлена в следующем разделе.

1. Введение ОП-IVM соответствующим пациентам

  1. Выявление потенциальных пациентов, которые могут извлечь выгоду из ОП-IVM, таких как те, которые описаны в шагах 1.1.1-1.1.3:
    1. Пациенты с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ) с резистентностью к кломифену, которым требуется лапароскопическая операция по сверлению яичников.
    2. Бесплодные пациенты, которые нуждаются в доброкачественных гинекологических операциях, таких как гистероскопическая миомэктомия, полипэктомия, трансцервикальная резекция перегородки и лапароскопическая трубная хирургия, а также оофороцистэктомия, перед лечением АРТ.
    3. Пациенты с онкологическими или гематологическими заболеваниями, которые получают химиолучевую или лучевую терапию.

2. Информированное согласие

  1. Предоставьте пациентам полную информацию, в том числе о том, почему OP-IVM может быть полезным, его процедура, использование ооцитов IVM (IVF-ET или криоконсервация), оценочные CR и LБР и возможные осложнения. Попросите пациентов дать информированное согласие, подписав форму согласия.

3. Подготовьте этикетки и IVM ооцитарную среду

  1. Печать идентификационных (ID) этикеток с именем пациента и датами для культуры посуды и тюбиков.
  2. Добавьте 0,5 мл среды IVM с добавлением 0,075 МЕ/мл фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) и 0,075 МЕ/мл лютеинизирующего гормона (ЛГ) к каждой лунки 4-луночной пластины. Накройте среду маслом.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выполняйте все эти процедуры в ламинарной потоке чистых скамеек.
  3. Предварительно прогреть 4-х скважинную пластину с IVM-средой ооцитов при 37 °C в увлажненном воздухе, содержащем 5% CO2 и 5% O2, не менее чем за 6 ч до применения.

4. Введение анестезии в операционной

  1. Проверьте имя пациента перед введением анестезии.
  2. Внутривенно обезболивают пациента анестезиологом.

5. Выполните извлечение ооцитов

  1. Пометьте этикетки именем, датой и идентификатором на посуде и тюбиках культуры.
  2. Поместите пациента в положение литотомии мочевого пузыря; постоянно дезинфицировать, драпировать и скрабировать влагалище теплым физиологическим раствором.
  3. Поместите ультразвуковой зонд внутрь влагалища; сканировать и записывать количество фолликулов в обоих яичниках. Найдите место, ближайшее к яичнику в качестве места пункции, и избегайте кишечника, мочевого пузыря и крупных кровеносных сосудов.
  4. Аспират фолликулярной жидкости.
    1. Промыть иглу с pH-стабильной средой перед проколом (см. Таблицу материалов).
    2. Вводят однопросветную аспирационную иглу 19 Г в яичники под руководством ультразвука.
    3. Пункция более крупных фолликулов с четкими границами, ближайшими к зонду. В низком положении быстро вводят раствор для полоскания, дополненный 25 Ед/мл гепарина. Аспирировать фолликулярную жидкость иглой под давлением 80-90 мм рт.ст., слегка вращая иглу, чтобы аспирировать как можно больше фолликулярной жидкости. Пункция других фолликулов с ближней на дальнюю сторону на этой плоскости.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Во время аспирации фолликулярная жидкость, содержащая ооциты, будет течь в стерильную пробирку 10 мл под отрицательным давлением. Гепарин может снижать вязкость фолликулярной жидкости, облегчая процесс аспирации.
    4. Удалите иглу из яичницы (держите иглу в стенке влагалища). Отрегулируйте направление ультразвукового зонда и проколйте оставшиеся фолликулы на других плоскостях. Попробуйте аспирировать все фолликулы диаметром ~5-9 мм.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Отрегулируйте положение зонда, чтобы он всегда был ближе всего к яичникам. Надавить на влагалищную форниксу с соответствующей силой, чтобы уменьшить травмы и кровотечения.
    5. Вытащите иглу после финиша в одном яичнике, промойте иглу с помощью погрузочной среды и проколите другую сторону тем же методом.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Полная аспирация фолликула в течение 25-30 мин.
  5. Перенесите фолликулярную жидкость из операционной в лабораторию ЭКО в течение нескольких минут после подтверждения имени и удостоверения личности пациента.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Перенесите аспирированную фолликулярную жидкость на лабораторный стенд ЭКО как можно скорее, чтобы предотвратить коагуляцию.
  6. Обнаружить активное кровоизлияние в полости малого таза с помощью УЗИ В-режима после прокола всех фолликулов. Вставьте зеркало и наведите кончик на заднюю форниксу, чтобы обнаружить активное кровотечение в месте прокола.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В месте пункции влагалища не должно наблюдаться активного кровотечения, если положение яичников нормальное и извлечение ооцитов выполняется осторожно. При легком кровотечении, которое продолжается даже после компрессии, держите стерильный марлевый компресс во влагалище в течение 2-4 ч. Контролировать чрезмерное кровотечение из мелких артерий с помощью зажимов с сосудистыми щипцами в течение 2-4 ч. Кровотечение в полости малого таза или яичнике, которое случается редко, должно контролироваться электрокоагуляцией с помощью лапароскопической хирургии.

6. Гинекологическая хирургия

  1. Исходя из необходимости и состояния пациентки, проводят соответствующую гинекологическую операцию после извлечения ооцитов.
    1. Выполнение лапароскопической операции по сверлению яичников пациентам с синдромом поликистозных яичников (СПКЯ) с резистентностью к кломифену.
    2. Выполнять доброкачественные гинекологические операции для бесплодных пациенток перед лечением АРТ, такие как гистероскопическая миомэктомия, полипэктомия, трансцервикальная резекция перегородки и лапароскопическая трубная хирургия, а также овариоцистэктомия.
    3. Выполняют овариэктомию для криоконсервации фертильности пациентов с онкологическими или гематологическими заболеваниями, которым необходимо получить химиолучевую терапию.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Эти гинекологические операции являются основными и стандартизированными клиническими операциями. Руководство по эксплуатации в различных странах и больницах должно быть относительно похожим.

7. Выполните IVM

ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните весь процесс IVM на гомотермической плоскости с 37 °C.

  1. Фильтруйте аспирированную фолликулную жидкость с помощью ситечка нейлоновых клеток 70 мкм. Многократно промывайте культурную трубку и ситечко предварительно нагретой pH-стабильной средой для обработки. Убедитесь, что все незрелые КОК полностью перенесены в культурную посуду. Соберите отфильтрованную жидкость, промойте и культивируем в чашку Петри размером 100 х 15 мм.
  2. Исследуйте КОК(рисунок 2)под стереоскопом с 40-кратным увеличением. Быстро переносите незрелые в предварительно подогретую IVM-среду ооцитов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Выберите подходящее увеличение в зависимости от привычки оператора.
  3. Запишите количество культивированных незрелых КОК.
  4. Сообщите пациенту о количестве культивируемых КОК. Обсудите сбор спермы с пациентами и их партнерами. Выполните извлечение спермы в соответствии с обычной процедурой.
  5. Культивировали незрелые КОК при 37 °С в увлажненный воздух, содержащий 5% CO2 и 5%O2 в течение 28-32 ч.
  6. Оцените зрелость ооцитов.
    1. Обнажение кучевых клеток путем повторного пипетирования с использованием стеклянной пипетки Пастера под стереоскопом с 40-кратным увеличением. Исследуют экструзию полярного тела (ПБ) для выявления стадии развития ооцитов. См. Рисунок 2 для репрезентативных изображений ооцитов в КОК, метафазе II (MII), метафазе I (MI) и зародышовых везикулах (GV) с четкими морфологическими характеристиками.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте вертикальное пламя (например, горелки Бунзена), чтобы отрегулировать диаметр стеклянной пипетки Пастера до размера ооцита.
    2. Подсчитайте ооциты МИИ и запишите их количество.
    3. Выбирайте зрелые ооциты для ЭКО или витрификации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Соберите сперму в день созревания ооцитов для ЭКО, но не для витрификации ооцитов.
    4. Культивирует незрелые ооциты в стадии ГВ и ИМ в исходной культуральная среда IVM с кучевыми клетками еще 10-14 ч. Повторите шаги 7.6.2-7.6.3.

8. Выполните ИКСИ или витрификацию ооцитов

  1. Следуйте стандартной процедуре репродуктивного центра8.

9. Культивирование эмбрионов и криоконсервация эмбрионов

  1. Следуйте стандартной процедуре репродуктивного центра8.

Результаты

До декабря 2019 года ОП-IVM использовался для сохранения фертильности 274 пациенток. Эмбриологические и репродуктивные результаты 158 пациентов в период с 2014 по 2016 год были опубликованы в предыдущей статье8. В следующем примере обсуждается процедура, соблюдаем?...

Обсуждение

Метод OP-IVM, описанный в этой статье, распространяется на обычные применения IVM и сочетает в себе IVM после извлечения ооцитов с обычной гинекологической хирургией. Ооциты, которые были бы потеряны в гинекологической хирургии, теперь могут быть использованы для ЭКО-ЭТ или ФП без дополнител...

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами Китайской национальной ключевой программы исследований и разработок (No 2017YFC1002000, 2018YFC1004001, 2019YFA0801400), Национального научного фонда Китая (No 81571386, 81730038), Инновационного фонда медицинских наук CAMS (2019-I2M-5-001) и Специального исследовательского проекта развития здоровья китайского капитала (2018-2-4095).

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
19 G single-lumen aspiration needlesCook, AustraliaK-OPS-7035-REH-ET
4-well plateCorning
70 μm nylon cell strainerFalcon, USA352350
CO2 IncubatorThermo
Culture oilVitrolife, Sweden10029,OVOIL Step 3.2.
FSH & LHFerring Reproductive Health, GermanyMENOPUR®
Glass Pasteur pipetteHilgenberg GmbH, Germany3154102-26
G-MOPS mediumpH-stable handling medium for washing the needle before puncturing
IVM mediumOrigio, DenmarkART-1600-B
Laminar Flow Clean BenchesESCO
Petri dishThermo Fisher Scientific, Denmark263991
pH stable handing media designed to support the handling and manipulation of oocytes and embryos outside the incubatorVitrolife, Sweden10130, G-MOPS PLUSStep 7.1.
Rinse solutionCook, AustraliaK-SIFB-100
StereoscopeNikon

Ссылки

  1. Ho, V. N. A., Braam, S. C., Pham, T. D., Mol, B. W., Vuong, L. N. The effectiveness and safety of in vitro maturation of oocytes versus in vitro fertilization in women with a high antral follicle count. Human Reproduction. 34 (6), 1055-1064 (2019).
  2. Yang, Z. Y., Chian, R. C. Development of in vitro maturation techniques for clinical applications. Fertility and Sterility. 108 (4), 577-584 (2017).
  3. Hatirnaz, S., et al. Oocyte in vitro maturation: A sytematic review. Turkish Journal of Obstetrics and Gynecology. 15 (2), 112-125 (2018).
  4. Gremeau, A. S., et al. In vitro maturation or in vitro fertilization for women with polycystic ovaries? A case-control study of 194 treatment cycles. Fertility and Sterility. 98 (2), 355-360 (2012).
  5. Ho, V. N. A., Braam, S. C., Pham, T. D., Mol, B. W., Vuong, L. N. The effectiveness and safety of in vitro maturation of oocytes versus in vitro fertilization in women with a high antral follicle count. Human Reproduction. 34 (6), 1055-1064 (2019).
  6. Sahin, C., et al. Which should be the preferred technique during laparoscopic ovarian cystectomy. Reproductive Sciences. 24 (3), 393-399 (2017).
  7. Xiao, J., et al. Impact of hemostatic methods on ovarian reserve and fertility in laparoscopic ovarian cystectomy. Experimental and Therapeutic. 17 (4), 2689-2693 (2019).
  8. Song, X. -. L., et al. Enhancing the scope of in vitro maturation for fertility preservation: transvaginal retrieval of immature oocytes during endoscopic gynaecological procedures. Human Reproduction. 35 (4), 837-846 (2020).
  9. Magnusson, &. #. 1. 9. 7. ;., Källen, K., Thurin-Kjellberg, A., Bergh, C. The number of oocytes retrieved during IVF: a balance between efficacy and safety. Human Reproduction. 33 (1), 58-64 (2018).
  10. Larose, H., et al., Wellik, D. M., et al. Gametogenesis: A journey from inception to conception. Current Topics in Developmental Biology. 132, 257-310 (2019).
  11. Broer, S. L., Broekmans, F. J. M., Laven, J. S. E., Fauser, B. C. J. M. Anti-Müllerian hormone: ovarian reserve testing and its potential clinical implications. Human Reproduction Update. 20 (5), 688-701 (2014).
  12. Arce, J. C., La Marca, A., Mirner Klein, B., Nyboe Andersen, A., Fleming, R. Antimüllerian hormone in gonadotropin releasing-hormone antagonist cycles: prediction of ovarian response and cumulative treatment outcome in good-prognosis patients. Fertility and Sterility. 99 (6), 1644-1653 (2013).
  13. Katayama, K. P., et al. Ultrasound-guided transvaginal needle aspiration of follicles for in vitro fertilization. Obstetrics and Gynecology. 72 (2), 271-274 (1988).
  14. Dellenbach, P., et al. Transvaginal sonographically controlled follicle puncture for oocyte retrieval. Fertility and Sterility. 44 (5), 656-662 (1985).
  15. Hirata, T., et al. Concomitant ovarian drilling and oocyte retrieval by laparoendoscopic single-site surgery led to live birth using in vitro maturation of oocyte and transfer of frozen-thawed blastocyst in woman with polycystic ovary syndrome. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 40 (5), 1431-1435 (2014).
  16. Deutinger, J., et al. Follicular aspiration for in vitro fertilization: sonographically guided transvaginal versus laparoscopic approach. European Journal of Obstetrics, Gynecology, and Reproductive Biology. 26 (2), 127-133 (1987).
  17. Tanbo, T., Henriksen, T., Magnus, O., Abyholm, T. Oocyte retrieval in an IVF program. A comparison of laparoscopic and transvaginal ultrasound-guided follicular puncture. Acta Obstetricia et Gynecologica Scandinavica. 67 (3), 243-246 (1988).
  18. Nagy, Z. P., et al. Pregnancy and birth after intracytoplasmic sperm injection of in vitro matured germinal-vesicle stage oocytes: case report. Fertility and Sterility. 65 (5), 1047-1050 (1996).
  19. Söderström-Anttila, V., Mäkinen, S., Tuuri, T., Suikkari, A. -. M. Favourable pregnancy results with insemination of in vitro matured oocytes from unstimulated patients. Human Reproduction. 20 (6), 1534-1540 (2005).
  20. Hwang, J. L., Lin, Y. H., Tsai, Y. L. In vitro maturation and fertilization of immature oocytes: a comparative study of fertilization techniques. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 17 (1), 39-43 (2000).
  21. Walls, M., Junk, S., Ryan, J. P., Hart, R. IVF versus ICSI for the fertilization of in-vitro matured human oocytes. Reproductive Biomedicine Online. 25 (6), 603-607 (2012).
  22. Park, J. H., Jee, B. C., Kim, S. H. Comparison of normal and abnormal fertilization of in vitro-matured human oocyte according to insemination method. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research. 42 (4), 417-421 (2016).
  23. Ho, V. N. A., Pham, T. D., Le, A. H., Ho, T. M., Vuong, L. N. Live birth rate after human chorionic gonadotropin priming in vitro maturation in women with polycystic ovary syndrome. Journal of Ovarian Research. 11 (1), 70 (2018).
  24. Zheng, X., et al. Effect of hCG priming on embryonic development of immature oocytes collected from unstimulated women with polycystic ovarian syndrome. Reproductive Biology and Endocrinology. 10, 40 (2012).
  25. Tannus, S., et al. Predictive factors for live birth after in vitro maturation of oocytes in women with polycystic ovary syndrome. Archives of Gynecology and Obstetrics. 297 (1), 199-204 (2018).
  26. Cohen, Y., et al. Decreased pregnancy and live birth rates after vitrification of in vitro matured oocytes. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 35 (9), 1683-1689 (2018).
  27. Yazdanpanah, F., Khalili, M. A., Eftekhar, M., Karimi, H. The effect of vitrification on maturation and viability capacities of immature human oocytes. Archives of Gynecology and Obstetrics. 288 (2), 439-444 (2013).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

171IVM

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены