A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول طريقة تستخدم مشبك رقعة لدراسة الاستجابات الكهربائية للخلايا العصبية الحركية لتحفيز الحبل الشوكي (SCS) بدقة زمانية مكانية عالية ، والتي يمكن أن تساعد الباحثين على تحسين مهاراتهم في فصل الحبل الشوكي والحفاظ على صلاحية الخلية في وقت واحد.
يمكن لتحفيز الحبل الشوكي (SCS) استعادة الوظيفة الحركية بشكل فعال بعد إصابة الحبل الشوكي (SCI). نظرا لأن الخلايا العصبية الحركية هي الوحدة الأخيرة لتنفيذ السلوكيات الحسية الحركية ، فإن الدراسة المباشرة للاستجابات الكهربائية للخلايا العصبية الحركية مع SCS يمكن أن تساعدنا في فهم المنطق الأساسي لتعديل الحركة الشوكية. لتسجيل خصائص التحفيز المتنوعة والاستجابات الخلوية في وقت واحد ، يعد مشبك التصحيح طريقة جيدة لدراسة الخصائص الفيزيولوجية الكهربية على نطاق خلية واحدة. ومع ذلك ، لا تزال هناك بعض الصعوبات المعقدة في تحقيق هذا الهدف ، بما في ذلك الحفاظ على صلاحية الخلية ، وفصل الحبل الشوكي بسرعة عن البنية العظمية ، واستخدام SCS لتحفيز جهود الفعل بنجاح. هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا باستخدام patch-clamp لدراسة الاستجابات الكهربائية للخلايا العصبية الحركية ل SCS بدقة زمانية مكانية عالية ، والتي يمكن أن تساعد الباحثين على تحسين مهاراتهم في فصل الحبل الشوكي والحفاظ على صلاحية الخلية في نفس الوقت لدراسة الآلية الكهربائية ل SCS بسلاسة على الخلايا العصبية الحركية وتجنب التجربة والخطأ غير الضروريين.
يمكن لتحفيز الحبل الشوكي (SCS) استعادة الوظيفة الحركية بشكل فعال بعد إصابة الحبل الشوكي (SCI). أفاد Andreas Rowald et al. أن SCS تمكن الطرف السفلي من وظيفة المحرك والجذع في غضون يوم واحد1. يعد استكشاف الآلية البيولوجية ل SCS للتعافي الحركي مجالا بحثيا مهما وشائعا لتطوير استراتيجية SCS أكثر دقة. على سبيل المثال ، أظهر فريق Grégoire Courtine أن الخلايا العصبية البينية Vsx2 المثيرة والخلايا العصبية Hoxa10 في الحبل الشوكي هي الخلايا العصبية الرئيسية للاستجابة ل SCS ، والتعديل العصبي الخاص بالخلية ممكن لاستعادة قدرة الفئران على المشي بعد SCI2. ومع ذلك ، تركز دراسات قليلة على الآلية الكهربائية ل SCS على نطاق خلية واحدة. على ال....
وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام على جميع التجارب على وأجريت الدراسات وفقا للوائح رعاية ذات الصلة.
1. إعداد
بفضل الصيانة الصارمة لدرجات الحرارة المنخفضة أثناء التشغيل الجيد (الشكل التكميلي 1 والشكل التكميلي 2 والشكل 1) ، كانت صلاحية الخلية جيدة بما يكفي لإجراء التسجيلات الكهربية اللاحقة. لمحاكاة السيناريو السريري قدر الإمكان ، استخدمنا المعالجة الدقيقة لوضع كاثود SCS وا.......
تتقارب معلومات الحركة المعدلة بواسطة SCS أخيرا مع الخلايا العصبية الحركية. لذلك ، فإن أخذ الخلايا العصبية الحركية كهدف للبحث قد يبسط تصميم الدراسة ويكشف عن آلية التعديل العصبي ل SCS بشكل مباشر أكثر. لتسجيل خصائص التحفيز المتنوعة والاستجابات الخلوية في وقت واحد ، يعد مشبك التصحيح طريقة جيدة ?.......
اي
تم تمويل هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين للعلماء الشباب (52207254 و 82301657) وصندوق علوم ما بعد الدكتوراه الصيني (2022M711833).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Adenosine 5’-triphosphate magnesium salt | Sigma | A9187 | |
Ascorbic Acid | Sigma | A4034 | |
CaCl2·2H2O | Sigma | C5080 | |
Choline Chloride | Sigma | C7527 | |
Cover slide tweezers | VETUS | 36A-SA | Clip a slice |
D-Glucose | Sigma | G8270 | |
EGTA | Sigma | E4378 | |
Fine scissors | RWD Life Science | S12006-10 | Cut the diaphragm |
Fluorescence Light Source | Olympus | U-HGLGPS | |
Fluoro-Gold | Fluorochrome | Fluorochrome | Label the motor neuron |
Guanosine 5′-triphosphate sodium salt hydrate | Sigma | G8877 | |
HEPES | Sigma | H3375 | |
infrared CCD camera | Dage-MTI | IR-1000E | |
KCl | Sigma | P5405 | |
K-gluconate | Sigma | P1847 | |
Low melting point agarose | Sigma | A9414 | |
MgSO4·7H2O | Sigma | M2773 | |
Micromanipulator | Sutter Instrument | MP-200 | |
Micropipette puller | Sutter instrument | P1000 | |
Micro-scissors | Jinzhong | wa1020 | Laminectomy |
Microscope for anatomy | Olympus | SZX10 | |
Microscope for ecletrophysiology | Olympus | BX51WI | |
Micro-toothed tweezers | RWD Life Science | F11008-09 | Lift the cut vertebral body |
NaCl | Sigma | S5886 | |
NaH2PO4 | Sigma | S8282 | |
NaHCO3 | Sigma | V900182 | |
Na-Phosphocreatine | Sigma | P7936 | |
Objective lens for ecletrophysiology | Olympus | LUMPLFLN60XW | working distance 2 mm |
Osmometer | Advanced | FISKE 210 | |
Patch-clamp amplifier | Axon | Multiclamp 700B | |
Patch-clamp digitizer | Axon | Digidata 1550B | |
pH meter | Mettler Toledo | FE28 | |
Slice Anchor | Multichannel system | SHD-27H | |
Spinal cord stimulatior | PINS | T901 | |
Toothed tweezer | RWD Life Science | F13030-10 | Lift the xiphoid |
Vibratome | Leica | VT1200S | |
Wide band ultraviolet excitation filter | Olympus | U-MF2 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ISSN 1940-087X
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved
We use cookies to enhance your experience on our website.
By continuing to use our website or clicking “Continue”, you are agreeing to accept our cookies.