A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
نقدم نهجا جديدا للفحص المجهري ثنائي الفوتون لتوصيل الورم لجسيمات أكسيد الحديد النانوية ذات العلامات الفلورية إلى الورم الأرومي الدبقي في نموذج الفأر.
يقتصر توصيل علاجات السرطان التي يتم إعطاؤها عن طريق الوريد إلى أورام المخ على الحاجز الدموي الدماغي. إن طريقة لتصوير تراكم وتوزيع الجزيئات الكبيرة بشكل مباشر في أورام المخ في الجسم الحي من شأنها أن تعزز بشكل كبير قدرتنا على فهم وتحسين توصيل الأدوية في النماذج قبل السريرية. يصف هذا البروتوكول طريقة للتتبع في الوقت الحقيقي في الجسم الحي للجسيمات النانوية الفلورية التي يتم إعطاؤها عن طريق الوريد باستخدام المجهر داخل الفوتون ثنائي الفوتون (2P-IVM) في نموذج فأر من الورم الأرومي الدبقي (GBM).
يحتوي البروتوكول على وصف متعدد الخطوات للإجراء ، بما في ذلك التخدير وتسكين التجارب ، وإنشاء نافذة الجمجمة ، وزرع خلايا GBM ، ووضع قضيب الرأس ، وإجراء دراسات 2P-IVM ، والرعاية بعد الجراحة لدراسات المتابعة طويلة الأجل. نعرض جلسات تصوير 2P-IVM التمثيلية وتحليل الصور ، ونفحص مزايا وعيوب هذه التقنية ، ونناقش التطبيقات المحتملة.
يمكن تعديل هذه الطريقة وتكييفها بسهولة لأسئلة بحثية مختلفة في مجال تصوير الدماغ قبل السريري في الجسم الحي .
الفحص المجهري ثنائي الفوتون داخل الجسم (2P-IVM) هو تقنية تصوير مضان تسمح بتصور الأنسجة الحية1.
تم تطوير 2P-IVM لأول مرة في تسعينيات القرن العشرين ، وقد استخدم في تحليل في الجسم الحي لشبكية العين2 ، والكلى3 ، والأمعاء الدقيقة4 ، والقوقعة5 ، والقلب6 ، والقصبة الهوائية7 ، والدماغ في مختلف النماذج قبل السريرية 8,9. في مجال علم الأعصاب ، اكتسب 2P-IVM أهمية كتقنية للتصوير في الوقت الفعلي للدماغ السليم في....
يتوافق الإجراء الحيواني الموصوف في هذا البروتوكول مع متطلبات الفريق الإداري لرعاية المختبر (APLAC).
1. ثقافة الخلية
هنا ، أجرينا جراحة نافذة الجمجمة وقمنا بنقش خلايا C6 في نموذج ماوس NSG من GBM (n = 5). سيضمن الختم المناسب بين جميع المكونات المشاركة في إنشاء النافذة (الشكل 1 أ) متانة النوافذ للتصوير طويل المدى ، بالإضافة إلى تقليل الإصابة بالأمراض. باستخدام المرحلة التي تم تكييفها ل في الجسم ا?.......
نقدم طريقة لتتبع NP في الوقت الفعلي في الجسم الحي باستخدام 2P-IVM من خلال نافذة الجمجمة لتقييم توصيل الورم لأكسيد الحديد NPs المسمى بالفلورسنت. تتطلب التقنية الجراحية لهذا الإجراء يدا ثابتة ومهارات جراحية تجريبية متقدمة. من المستحسن التدرب على استخدام الذبائح أو الأشباح قبل المضي قدما في.......
يعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
نود أن نشكر خدمة الفحص المجهري لعلم الأعصاب في ستانفورد وو تساي ، ومركز ستانفورد للابتكارات في التصوير في الجسم الحي (SCi3) - مركز تصوير الصغيرة ، ومنحة الأجهزة المشتركة NIH S10 (S10RR026917-01 ، PI Michael Moseley ، دكتوراه) ، ومرفق ستانفورد للتصوير قبل السريري في Porter Drive لتوفير المعدات والبنية التحتية لهذا المشروع. تم دعم هذا العمل بمنحة من المعهد الوطني لصحة الطفل والتنمية البشرية ، رقم المنحة R01HD103638. نود أن نشكر مجموعة شنيتزر ، جامعة ستانفورد. مختبر Zuo ، جامعة سانتا كروز ؛ ومختبر التصوير العصبي الوعائي ، مركز بوسطن الضوئي ، جامعة بوسطن ، لإجراء مناقشات تعليمية حول التصوير ثنائي الفوتون ونماذج نوافذ الجمجمة.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.9% sodium chloride infusion solution | Baxter Corp | 533-JB1301P | |
Dulbecco's Modified Eagle Medium | Invitrogen | 11965-092 | |
1 mL syringes | BD | Luer-Lok syringe, REF309628 | |
10% FBS | Thermo fisher | Cytiva SH30910.03HI | |
10% DMSO | Sigma-Aldrich | D8418-50ML | |
2-photon microscope | Prairie Technologies, Bruker | Prairie Ultima IV | |
Alcohol applicators, 70% | Medline Industries, LP | MDS093810 | |
Alcohol, spray bottle | Decon Labs Inc | Decon SaniHol, 04-355-122 | |
Aluminum foil | Reynold Brands | Reynold Wrap non-stick aluminum foil | |
Anesthesia machine | Patterson Scientific | SAS3 | |
Anesthesia monitoring | Kent Scientific | MouseSTAT Jr. Rodent Pulsoxymeter | |
Antibiotic-Antimycotic (100x), liquid | Invitrogen | 15240-096 | |
Betadine applicators | Professional Disposables International, Inc | S41125 | |
Biopsy punch, 5 mm | Miltex | Size 5 | |
Buprenorphine sustained release | Zoo Pharm | Bup SR Lab, 1.0 mg/mL | A generic drug can be used instead. |
C6 rat glioma cell line | ATCC (American Tissue Culture Collection) | CCL-107 | |
Cannulas | BD | 16 G, 1.1/2”, 30 G, 1” | |
Carprofen | Pfizer | Rimadyl, 50 mg/ml | A generic drug can be used instead. |
Cefazoline | Sagent Pharmaceuticals | 25021-101-10, 1 g/vial | A generic drug can be used instead. |
Cell strainer, 40 µm | Fisher Scientific | 87711 | |
Cotton tip applicators, 6” | Dyad Medical Sourcing, LLC | HCS1005 | |
Dental cement | Stoelting Co | 51459 | Dental cement kit, clear, 2 components |
Dexamethasone | Bimeda | 138RX, 2 mg/mL | A generic drug can be used instead. |
DietGel | ClearH2O | Recovery, 72-06-502 | |
Drape | Cardinal Health | Bio Shield Wrap | |
Drill | Saeyang Microtech | Escort Pro, B08350 | |
Drill tips | Hager & Meissinger GmbH | REF310104001001005 | Size 005, US 1/4 |
FIJI imaging analysis software | National Institute of Health | https://imagej.net/software/fiji/ | |
Forceps | Fisher Scientific | 13-812-41 | |
Gauze | Fisher HealthCare | Sterile Cotton Gauze Pad, 4 x 4”, 22-415-469 | |
Gelfoam | Ethicon Inc. | Surgifoam absorbable gelatin sponge, Ref. 1972 | |
Germinator | Cellpoint Scientific | Germinator 500, No. 11688 | |
Glass coverslips, 5 mm diameter | Fisher Scientific | Menzel Cover glass | |
Gloves, non-sterile | Fisher Scientific | Nitrile powder-free medical examination gloves | |
Gloves, sterile | Medline Industries, LP | MDS104070 | |
Hair removal cream | Church & Dwight | Nair Hair remover lotion | |
Hamilton syringe | Hamilton Company Inc | Gastight #1701, 10 µL | |
HBSS without Ca, Mg | Fisher Scientific | PI88284 | |
Head bar | Hongway | 5 mm inner diameter O-rings | |
Heating pad | Stoelting Co. | Rodent warmer X2 | |
Insulin syringes | Exel International Medical Products | 29G x 1/2″ | |
Iron oxide nanoparticles | Covis Pharma GmbH | Feraheme ferumoxytol injection, 510 mg/17 mL, 59338077501 | |
Isoflurane | Dechra | 26675-46-7 | |
Mice | Jackson Laboratories | NSG, Strain 005557 | |
Microscope (surgery) | Seiler Medical | Seiler IQ Q-100-220 | |
Nanoparticles | Custom | Iron oxide nanoparticles (Ferumoxytol) labeled with fluorescein isothiocyanate | |
Ophtalmic ointment | Major pharmaceuticals | Lubrifresh P.M. nighttime ointment, 203964 | |
Oxygen | Linde Gas & Equipment Inc. | High Pressure Steel K Style Cylinder, 249CF, 2000PSIG, CGA 540 | |
Plastic cups | Georgia-Pacirif Consumer Products | Dixie Portion Cup, 2 oz., Plastic, Clear, PK2400 | |
Polyethylene tubing | Braintree Scientific | 50-195-5494 | |
Scale | Ohaus Corp | CR2200 | |
Scalpel | Integra Life Sciences Production Corp | Integra Miltex Stainless steel disposable scalpel | |
Scissors | Fisher Scientific | 13-804-18 | |
Sealant | Henkel Corp | Loctite 4014 | |
Single use lab gown | High Tech Conversions | 17-444-081 | |
Stereotactic frame | Stoelting Co. | Stoelting New Standard TM | |
Sterile Vacuum Bottle Top Filtration Systems | Fisher Scientific | S2GPU05RE, MilliporeSigma NO.:S2GPU05RE | |
Styrofoam box | N/A | N/A | |
Surgical gloves | Cardinal Health | 19-163-108 | |
Surgical glue, 3M Vetbond tissues adhesive | 3M Animal Care Prodcuts | 1469SB | |
Tail vein cathether | Custom | Consists of two 30 G cannulas connected with sillicone tubing | |
TrypLE Express (1x), no phenol red | Invitrogen | 12604-039 | |
Ultraviolett torch | Spring sunshine technology | Consciot |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved