Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

Представлен новый подход к двухфотонной микроскопии доставки из опухоли флуоресцентно-меченых наночастиц оксида железа в глиобластому на мышиной модели.

Аннотация

Внутривенное введение противораковых препаратов к опухолям головного мозга ограничено гематоэнцефалическим барьером. Метод прямой визуализации накопления и распределения макромолекул в опухолях головного мозга in vivo значительно расширит нашу способность понимать и оптимизировать доставку лекарств в доклинических моделях. Этот протокол описывает метод отслеживания in vivo в режиме реального времени внутривенно введенных флуоресцентно меченных наночастиц с помощью двухфотонной прижизненной микроскопии (2P-IVM) на мышиной модели глиобластомы (GBM).

Протокол содержит многоступенчатое описание процедуры, включающее анестезию и анальгезию экспериментальных животных, создание краниального окна, имплантацию клеток GBM, установку планки на голову, проведение исследований 2P-IVM и послеоперационный уход для долгосрочных последующих исследований. Мы покажем репрезентативные сеансы визуализации 2P-IVM и анализ изображений, рассмотрим преимущества и недостатки этой технологии, а также обсудим потенциальные области применения.

Этот метод может быть легко модифицирован и адаптирован для различных исследовательских задач в области доклинической визуализации головного мозга in vivo .

Введение

Двухфотонная прижизненная микроскопия (2P-IVM) — это метод флуоресцентной визуализации, который позволяет визуализировать живую ткань1.

Впервые разработанный в 1990-х годах, метод 2P-IVM использовался для анализа in vivo сетчатки2, почки3, тонкой кишки4, улитки5, сердца6, трахеи7 и головного мозга в различных доклинических моделях 8,9. В области неврологии 2P-IVM приобрел важное значение как метод ....

протокол

Процедура содержания животных, описанная в этом протоколе, соответствует требованиям Административной группы по уходу за лабораторными животными (APLAC).

1. Клеточная культура

  1. Подготовка вытяжки
    1. Вымойте руки, наденьте перчатки и лабораторный халат. Включите шкаф биологической безопасности и установите уровень створки на соответствующую высоту открывания. Дайте вытяжке продуться в течение 3-5 минут. Опрыскайте область капюшона 70% этиловым спиртом и протрите папиросной бумагой.
    2. Опрыскайте все реагенты 70% этиловым спиртом и протрите папиросной бумагой. Переместите реагенты в колпак. Не кладите на ....

Результаты

Здесь мы выполнили операцию на краниальном окне и приживили клетки C6 в мышиной модели GBM NSG (n = 5). Надлежащая герметизация между всеми компонентами, участвующими в создании окна (рис. 1A), обеспечит долговечность окон при длительной визуализации и, кроме того, снизит заболе?.......

Обсуждение

Мы представляем метод отслеживания НЧ in vivo в режиме реального времени с использованием 2P-IVM через краниальное окно для оценки доставки в опухоль флуоресцентно меченных НЧ оксида железа. Хирургическая техника этой процедуры требует твердой руки и продвинутых экспериментальных хи?.......

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов.

Благодарности

Мы хотели бы поблагодарить Стэнфордскую службу нейробиологической микроскопии Ву Цай, Стэнфордский центр инноваций в области визуализации in vivo (SCi3) - центр визуализации мелких животных, NIH S10 Shared Instrumentation Grant (S10RR026917-01, руководитель Майкл Мозли, доктор философии) и Стэнфордский центр доклинической визуализации на Портер-Драйв за предоставление оборудования и инфраструктуры для этого проекта. Эта работа была поддержана грантом Национального института детского здоровья и развития человека, грант No R01HD103638. Мы хотели бы поблагодарить Schnitzer Group, Стэнфордский университет; лаборатория Цзо, Университет Санта-Крус; и Лаборатория нейроваскул....

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.9% sodium chloride infusion solutionBaxter Corp533-JB1301P

Dulbecco's Modified Eagle Medium
Invitrogen11965-092
1 mL syringesBDLuer-Lok syringe, REF309628
10% FBSThermo fisherCytiva SH30910.03HI
10% DMSOSigma-AldrichD8418-50ML
2-photon microscopePrairie Technologies, BrukerPrairie Ultima IV
Alcohol applicators, 70%Medline Industries, LPMDS093810
Alcohol, spray bottleDecon Labs IncDecon SaniHol, 04-355-122
Aluminum foilReynold BrandsReynold Wrap non-stick aluminum foil
Anesthesia machinePatterson ScientificSAS3
Anesthesia monitoring Kent Scientific MouseSTAT Jr. Rodent Pulsoxymeter
Antibiotic-Antimycotic (100x), liquidInvitrogen15240-096
Betadine applicatorsProfessional Disposables International, IncS41125
Biopsy punch, 5 mm MiltexSize 5
Buprenorphine sustained releaseZoo PharmBup SR Lab, 1.0 mg/mLA generic drug can be used instead. 
C6 rat glioma cell lineATCC (American Tissue Culture Collection)CCL-107
CannulasBD16 G, 1.1/2”, 30 G, 1”
CarprofenPfizer Rimadyl, 50 mg/mlA generic drug can be used instead. 
CefazolineSagent Pharmaceuticals25021-101-10, 1 g/vialA generic drug can be used instead. 
Cell strainer, 40 µmFisher Scientific87711
Cotton tip applicators, 6” Dyad Medical Sourcing, LLCHCS1005
Dental cementStoelting Co51459Dental cement kit, clear, 2 components
DexamethasoneBimeda138RX, 2 mg/mLA generic drug can be used instead. 
DietGelClearH2ORecovery, 72-06-502
Drape Cardinal HealthBio Shield Wrap
DrillSaeyang MicrotechEscort Pro, B08350
Drill tips Hager & Meissinger GmbHREF310104001001005Size 005, US 1/4
FIJI imaging analysis softwareNational Institute of Healthhttps://imagej.net/software/fiji/
ForcepsFisher Scientific13-812-41
GauzeFisher HealthCareSterile Cotton Gauze Pad, 4 x 4”, 22-415-469
Gelfoam Ethicon Inc. Surgifoam absorbable gelatin sponge, Ref. 1972
Germinator Cellpoint Scientific Germinator 500, No. 11688
Glass coverslips, 5 mm diameterFisher ScientificMenzel Cover glass 
Gloves, non-sterileFisher ScientificNitrile powder-free medical examination gloves
Gloves, sterileMedline Industries, LPMDS104070
Hair removal creamChurch & DwightNair Hair remover lotion 
Hamilton syringeHamilton Company IncGastight #1701, 10 µL
HBSS without Ca, MgFisher ScientificPI88284
Head barHongway5 mm inner diameter O-rings
Heating padStoelting Co. Rodent warmer X2
Insulin syringesExel International Medical Products 29G x 1/2″
Iron oxide nanoparticlesCovis Pharma GmbHFeraheme ferumoxytol injection, 510 mg/17 mL, 59338077501
IsofluraneDechra26675-46-7
MiceJackson LaboratoriesNSG, Strain 005557
Microscope (surgery)Seiler MedicalSeiler IQ Q-100-220
NanoparticlesCustomIron oxide nanoparticles (Ferumoxytol) labeled with fluorescein isothiocyanate
Ophtalmic ointmentMajor pharmaceuticalsLubrifresh P.M. nighttime ointment, 203964
OxygenLinde Gas & Equipment Inc. High Pressure Steel K Style Cylinder, 249CF, 2000PSIG, CGA 540
Plastic cupsGeorgia-Pacirif Consumer ProductsDixie Portion Cup, 2 oz., Plastic, Clear, PK2400
Polyethylene tubingBraintree Scientific50-195-5494
ScaleOhaus CorpCR2200
ScalpelIntegra Life Sciences Production CorpIntegra Miltex Stainless steel disposable scalpel
ScissorsFisher Scientific13-804-18
SealantHenkel CorpLoctite 4014
Single use lab gownHigh Tech Conversions17-444-081
Stereotactic frameStoelting Co. Stoelting New Standard TM
Sterile Vacuum Bottle Top Filtration SystemsFisher ScientificS2GPU05RE, MilliporeSigma NO.:S2GPU05RE
Styrofoam boxN/AN/A
Surgical glovesCardinal Health19-163-108
Surgical glue, 3M Vetbond tissues adhesive3M Animal Care Prodcuts1469SB
Tail vein cathetherCustomConsists of two 30 G cannulas connected with sillicone tubing 
TrypLE Express (1x), no phenol redInvitrogen12604-039
Ultraviolett torchSpring sunshine technologyConsciot

Ссылки

  1. Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248 (4951), 73-76 (1990).
  2. Wang, Z., McCracken, S., Williams, P. R. Transpupillary two-photon in vivo imaging of the mouse retina.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

JoVE205

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Исследования

Образование

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены