JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

قمنا بتطوير نموذج إجهاد الهزيمة الاجتماعية المتسارع للفئران المراهقة C57BL / 6 ، والذي يعمل في كل من الذكور والإناث ويسمح بالتعرض خلال فترات المراهقة المنفصلة. يؤدي التعرض لهذا النموذج إلى تجنب اجتماعي ، ولكن فقط في مجموعة فرعية من ذكور وإناث الفئران المهزومة.

Abstract

الشدائد الاجتماعية في مرحلة المراهقة سائدة ويمكن أن تؤثر سلبا على مسارات الصحة العقلية. هناك حاجة إلى نمذجة الإجهاد الاجتماعي في القوارض الذكور والإناث المراهقين لفهم آثاره على نمو الدماغ المستمر والنتائج السلوكية. تم استخدام نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن (CSDS) على نطاق واسع لنمذجة الإجهاد الاجتماعي في الفئران الذكور C57BL / 6 البالغة من خلال الاستفادة من السلوك العدواني الذي يظهره ذكر القوارض البالغ لدخيل يغزو أراضيها. ميزة هذا النموذج هو أنه يسمح بتصنيف الفئران المهزومة إلى مجموعات مرنة وحساسة بناء على اختلافاتهم الفردية في السلوك الاجتماعي بعد 24 ساعة من جلسة الهزيمة الأخيرة. كان تنفيذ هذا النموذج في الفئران المراهقة C57BL / 6 يمثل تحديا لأن الفئران البالغة أو المراهقة لا تهاجم عادة ذكور أو إناث الفئران المراهقة المبكرة ولأن المراهقة هي فترة قصيرة من الحياة ، تشمل نوافذ زمنية سرية للضعف. تم التغلب على هذا القيد من خلال تكييف نسخة سريعة من CSDS لاستخدامها في الفئران من الذكور والإناث المراهقين. يستخدم نموذج الإجهاد هذا لمدة 4 أيام مع جلسات هجوم جسدي 2 يوميا C57BL / 6 من الذكور البالغين لتجهيز الماوس CD-1 للعدوانية بحيث يهاجم بسهولة الفأر المراهق الذكر أو الأنثى. أطلق على هذا النموذج اسم إجهاد الهزيمة الاجتماعية المتسارع (AcSD) للفئران المراهقة. يؤدي تعرض المراهقين ل AcSD إلى تجنب اجتماعي بعد 24 ساعة في كل من الذكور والإناث ، ولكن فقط في مجموعة فرعية من الفئران المهزومة. تحدث هذه الثغرة الأمنية على الرغم من اتساق عدد الهجمات عبر الجلسات بين المجموعات المرنة والحساسة. نموذج AcSD قصير بما يكفي للسماح بالتعرض خلال فترات منفصلة خلال فترة المراهقة ، ويسمح بفصل الفئران وفقا لوجود أو عدم وجود سلوك التجنب الاجتماعي ، وهو أول نموذج متاح لدراسة إجهاد الهزيمة الاجتماعية في إناث الفئران C57BL / 6 المراهقة.

Introduction

يستخدم نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن على نطاق واسع لنمذجة الإجهاد الاجتماعي في يوم ما بعد الولادة للبالغين (PND) >65 من ذكور القوارض. يعتمد هذا النموذج على السلوك العدواني الطبيعي للقوارض الذكور البالغين عندما يغزو متسلل أراضيه. يستخدم هذا النموذج في مجموعة متنوعة من أنواع القوارض ، بما في ذلك الجرذان والهامستر والفئران1،2،3،4،5،6،7،8،9 ، ويتكون من مزيج من العدوان الجسدي والإجهاد النفسي يستمر حوالي 10 أيام ، حيث يقوم القوارض الدخيلة بتجربة بضع دقائق من العدوان الجسدي من القوارض المقيمة. يبقى القوارض في قفص منزل المقيم ، مفصولين بمقسم يسمح بالاتصال الحسي ولكن ليس الجسدي7. في تجارب الفئران ، الفئران المقيمة / المعتدية الأكثر استخداما هي الفئران السويسرية CD-1 للمربين المتقاعدين ، والتي تظهر سلوكا إقليميا قويا ضد الفئران الدخيلة 6,7. بالنسبة للفئران الدخيلة ، فإن أفضل سلالة مميزة هي سلالة C57BL / 6 2،4،5. يتعرض الفأر المهزوم لمعتد جديد كل يوم لمنع التعود على المعتدي. يتم إيواء الفئران الضابطة مع مجموعة مختلفة كل يوم. في الساعة 24 بعد جلسة الهزيمة الأخيرة ، يتم اختبار الفئران التجريبية في اختبار التفاعل الاجتماعي (SIT) حيث يمكنهم استكشاف حقل مفتوح في غياب (لا يوجد هدف) ، أو وجود ماوس CD-1 جديد (هدف). تقضي الفئران الضابطة وقتا أطول في منطقة التفاعل مع الهدف مقابل الجزء غير المستهدف من المهمة. تصنف الفئران المهزومة على أنها حساسة (نسبة<1) أو مرنة (نسبة>1) وفقا لنسبة التفاعل الاجتماعي (الوقت الذي يقضيه في منطقة التفاعل مع المعتدي الحاضر / الوقت الذي يقضيه في منطقة التفاعل مع المعتدي الغائب). يوفر هذا الإجراء أداة مفيدة لدراسة الفروق الفردية استجابة للإجهاد.

حتى السنوات الأخيرة ، تم استخدام نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن في الغالب في الفئران الذكور البالغة لأن التسلسلات الهرمية البارزة لهيمنة الذكور تنطوي على القتال ضد الذكور ولكن ليس ضد الإناث 6,7. علاوة على ذلك ، لا تهاجم ذكور القوارض الإناث عادة. بدلا من ذلك ، ينخرطون في سلوكيات التزاوج10. على الرغم من هذه العقبات ، تم تطوير استراتيجيات مختلفة لتكييف نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن للفئران البالغة. على سبيل المثال ، يعتمد نموذج فأر كاليفورنيا للهزيمة الاجتماعية على العدوان الطبيعي لهذا النوع أحادي الزواج من كلا الجنسين عند الدفاع عن أراضيهم 9,11. تركز الأساليب الأخرى على تحفيز السلوك العدواني للفئران CD-1 عن طريق تحفيز منطقة ما تحت المهاد البطنية للحصول على سلوك عدواني ثابت10،12 ، أو عن طريق تطبيق بول الذكور في إناث الفئران البالغة التجريبية لتلقي هجمات من المعتدين CD-113. هذا العدوان المتزايد والمتسق للفئران CD-1 أمر بالغ الأهمية للفأر الدخيل التجريبي لإظهار علامات سلوكية واضحة على الخضوع للهجمات المتكررة من قبل المعتدي خلال طول التفاعل6.

تكييف نموذج الهزيمة الاجتماعية المزمنة لاستخدامه في المراهقين C57BL / 6mice
المراهقة هي فترة تتميز بنضج اجتماعي كبير ، والذي يتكشف بالتوازي مع التغيرات في البنية الدقيقة والكلية للدماغ ، وخاصة في قشرة الفص الجبهي. في كل من البشر والقوارض ، هناك القليل من الإجماع فيما يتعلق ببداية ونهاية فترة المراهقة14,15. علاوة على ذلك ، هناك نوافذ حرجة للضعف خلال فترة المراهقة للاضطراب الناجم عن التجربة للدماغ المستمر والتطور المعرفي16،17،18،19. يحدث البلوغ والمراهقة في نفس الوقت ، لكن هذه المصطلحات ليست مترادفة. يشير البلوغ إلى بداية النضج الجنسي ، بينما تمثل المراهقة مرحلة أوسع تتميز بالتحول التدريجي من حالة الأحداث إلى تحقيق الاستقلال20. اقترحت مجموعات مختلفة أن المراهقة في الفئران تمتد من الفطام (PND 21) حتى مرحلة البلوغ (PND 60) 21. على وجه الخصوص ، يمكن الإشارة إلى المراهقة المبكرة على أنها الأسبوعين الأول والثاني بعد الفطام (PND 21-34) ومنتصف المراهقة على أنها فترة PND 35-48. تشمل هذه النطاقات فترات نمو منفصلة فيما يتعلق على سبيل المثال بتطوير نظام الدوبامين22،23،24 ، والتعرض لتأثيرات الأدوية على تطوير الشبكات العصبية17،25،26،27 ، والخصائص السلوكية المتميزة16،20،28،29،30.

مطلوب سلوك القتال من الماوس المقيم لبروتوكول الهزيمة الاجتماعية. ومع ذلك ، كما هو الحال مع إناث الفئران ، لا ينخرط الذكور عادة في تفاعلات عدوانية مع الفئران المراهقة المبكرة ، ربما لأنهم لا يعتبرونها تهديدا. تم إجراء معظم الدراسات التي تستكشف آثار الهزيمة الاجتماعية المزمنة في الفئران المراهقة C57BL / 6 خلال فترة منتصف المراهقة31،32،33،34،35 ؛ البعض الآخر لا يحدد يوم ما بعد الولادة لتعرض المراهقين36,37 ، أو يمدد أيام الهزيمة إلى مرحلة البلوغ المبكر38 أو لا يسمح بالاتصال الحسي39 ؛ دراسات أخرى على الفئران المراهقة تستخدم سلالات مختلفة40,41. يتم تلخيص خصائص هذه الدراسات باستخدام إجهاد الهزيمة الاجتماعية المزمن في الفئران الذكور المراهقين في الجدول 1.

تهتم مجموعتنا البحثية باستهداف نوافذ محددة للمراهقين ، بما في ذلك المراهقة المبكرة ، في الفئران C57BL / 6. بسبب قصر مدة فترات المراهقة المختلفة ، تم تصميم نسخة معدلة من النسخة المتسارعة من نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن42. أطلق على هذا النموذج اسم إجهاد الهزيمة الاجتماعية المتسارع (AcSD) للفئران المراهقة. يظهر العمل السابق أن هناك اختلافات كبيرة بين الجنسين في الحساسية للإجهاد الاجتماعي في مرحلة المراهقة في الفئران8،26،43،44،45 ، وكذلك في الآثار الضارة للإجهاد الاجتماعي على مسارات الصحة العقلية لدى البشر46،47،48،49،50،51،52 ، 53,54,55,56. يعمل نموذج AcSD بشكل فعال مع الفئران الإناث المراهقات أيضا ، مما يسمح لهن بالتحقيق في العواقب المحتملة الخاصة بالجنس بالإضافة إلى استكشاف الأساس البيولوجي العصبي.

الجدول 1: دراسات تستخدم نماذج الإجهاد الاجتماعي في الفئران الذكور المراهقين. السلالة والأنواع: فأر كاليفورنيا: بيروميسكوس كاليفورنيكوس. C57BL / 6: Mus musculus black 6 سلالة فأر فطرية. C57BL / 6J: نموذج الفأر الفطري M. musculus black 6 المقدم من مختبرات جاكسون. CD-1: M. musculus من سلالة الفأر الأبيض السويسرية. ICR: معهد M. musculus لأبحاث السرطان سلالة الفأر الأبيض المهجنة. OF1: M. musculus Oncins France 1 سلالة فأر ألبينو مهجورة.
الاختصارات: wk = أسبوع ؛ PND = يوم ما بعد الولادة ؛ الدقة = المرونة ؛ SUS = عرضة ؛ UNSUS = غير محسب. الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.

Protocol

تم تنفيذ الإجراءات التجريبية وفقا للمبادئ التوجيهية للمجلس الكندي لرعاية ووافقت عليها جامعة ماكجيل ولجنة رعاية في مستشفى دوغلاس (رقم الموافقة على التجارب على: 2005-5084). تم إيواء جميع الفئران في غرفة مستعمرة يتم التحكم في درجة حرارتها ورطوبتها (21-22 درجة مئوية ؛ 60٪) وفي دورة 12 ساعة من الضوء والظلام (الضوء في الساعة 8:00) في مركز التنميط العصبي في معهد جامعة دوغلاس للصحة العقلية. كان لدى الفئران إمكانية الوصول إلى الطعام والماء طوال التجارب. تم تعيين الفئران بشكل عشوائي لكل حالة تجريبية. تم الحصول على التجارب من مصدر تجاري (انظر جدول المواد). يلخص الجدول 2 خصائص لكل مرحلة تجريبية. في المجموع ، تم استخدام 489 فأرا مراهقا C57BL / 6J (259 ذكرا ؛ 230 أنثى) عبر 20 مجموعة تجريبية.

الجدول 2: الموضوعات الحيوانية لكل مرحلة تجريبية. †إذا لم تكن هذه مصابة بجروح خطيرة ، فيمكن إعادة استخدامها للتحضير. ‡إذا لم تكن هذه مصابة بجروح خطيرة ، فيمكن إعادة استخدامها للتحضير أثناء AcSD ، § مركز التنميط العصبي في معهد جامعة دوغلاس للصحة العقلية. للتجارب مع الذكور ، # للتجارب مع الإناث ، إذا كانت الهزيمة مختلطة ، استخدم الإناث للتحضير. ††لا تستخدم ل AcSD. الاختصارات: AcSD = إجهاد الهزيمة الاجتماعية المتسارعة ؛ PND = يوم ما بعد الولادة الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.

1. التأقلم

ملاحظة: يجب أن تستمر هذه المرحلة 1 أسبوع كحد أدنى.

  1. شراء ذكور الفئران المربي المتقاعد CD-1 (انظر جدول المواد) التي يزيد عمرها عن 4 أشهر وضعف كمية الفئران المراهقة C57BL / 6J (أي إذا تعرضت 10 فئران للإجهاد ، فقم بشراء 20 فأرا CD-1).
    ملاحظة: يوصى بالحصول على هذه الكمية من فئران CD-1 لأن نسبة صغيرة فقط من فئران CD-1 تظهر سلوكا عدوانيا تجاه الفئران المراهقة.
  2. دع الفئران الذكور CD-1 تعتاد على المنشأة الجديدة في قفصها المنزلي مع الطعام والماء لمدة أسبوع واحد قبل الفحص والتحضير.
  3. استخدم C57BL / 6 في PND >65 (للبالغين) و PND 25 ± 3 (للمراهقين) (الجدول 2) لجلسات الفحص والتمهيد. احصل على 4 C57BL / 6 فئران من كل عمر يوميا من التحضير (أي لمدة 3 أيام من التحضير ، احصل على 12 PND >65 و 12 PND 25 ± 3) لتقليل مخاطر الإصابات لأن هذه سيتم استخدامها بشكل متكرر للفحص وعملية التحضير.

2. فحص CD-1 وفتيلة

ملاحظة: مدة هذه المرحلة هي 3 أيام من الفحص (يوم واحد لإناث الفئران) و 3-4 أيام من التحضير (يمكن أن يزيد هذا بالنسبة للفئران الإناث واعتمادا على السلوك العدواني للفئران CD-1.)

  1. استخدم التعريف التشغيلي للهجوم لتسجيل هجمات CD-1 كما هو موضح أدناه.
    1. يتم تعريف هجوم واحد على أنه عندما يعض الماوس CD-1 الماوس C57BL / 6J ، ويتحرك الماوس C57BL / 6J بعيدا استجابة لللدغة. يتم تعريف اللدغة على أنها عندما يضع ماوس CD-1 أسنانه على أي جزء من جسم الماوس C57BL / 6J. يتم تعريف الابتعاد على أنه عندما يحرك الماوس C57BL / 6J كلا من مخالبه الخلفية من الموضع الذي كانا فيه قبل أن يشغله القرص المضغوط 1.
    2. تأكد من وجود فرق لا يقل عن ~ 2 ثانية بين الهجمات المنفصلة. إذا حدثت أكثر من لدغة واحدة على بعد <2 ثانية ، فاحتسب هجوما واحدا.
    3. إذا عض الماوس CD-1 أكثر من مرة على التوالي دون انقطاع (< ~ 2 ثانية) ، فقم بفصل برفق باستخدام مسطرة بلاستيكية. إذا عض الماوس CD-1 ولم يترك ، افصل برفق. إذا أصبح الماوس C57BL / 6J محاصرا في زاوية أو تم تثبيته بواسطة ماوس CD-1 ولا يمكنه الابتعاد استجابة لدغة ، فقم بفصل برفق باستخدام مسطرة. عد كل هذه كهجوم واحد (حتى الانفصال).
  2. فحص
    1. استخدم قفازات فحص النتريل لجميع عمليات التعامل مع وتجنب استخدام العطور أو العطور.
    2. قمبإجراء اليوم الأول من الفحص فقط مع الفئران الذكور البالغة C57BL / 6 كمتطفلين (PND >65) في قفص الفئران المنزلية CD-1. قم دائما بفحص ماوس CD-1 قبل تجربة جديدة.
    3. أدخل ماوس C57BL / 6 البالغ PND >65 في القفص المنزلي لماوس ذكر CD-1 لمدة 3 دقائق. سجل زمن الانتقال إلى العدوان الأول وعدد الاعتداءات التي يتم تنفيذها (انظر الجدول التكميلي 1).
    4. من اليومالثاني إلى اليوم الأخير من الفحص ، قدم ذكرا بالغا C57BL / 6 PND>65 لمدة دقيقة واحدة (بحد أقصى 30 ثانية إذا كان CD-1 شديد العدوانية) ثم استبدله بمراهق C57BL / 6 PND 25 ± 3 لمدة 5 دقائق.
      ملاحظة: من المهم إجراء الفحص مع الفئران المراهقة لأنه ليس كل الفئران التي تهاجم الفأر الذكر C57BL / 6 البالغ ستهاجم المراهق C57BL / 6. في الواقع ، لن تهاجم الفئران CD-1 التي تهاجم الفئران المراهقة دائما الذكور البالغين C57BL / 6.
    5. إذا كانت التجربة للعدوانية تجاه إناث الفئران ، فقم بإجراء الفحص والتحضير مع إناث الفئران المراهقة ، حتى لو كانت الفئران التجريبية تشمل كلا الجنسين.
    6. سجل زمن انتقال العدوان الأول وعدد الهجمات والجروح التي تلقتها جميع الفئران C57BL / 6 (انظر الجدول التكميلي 2).
    7. سجل أي نوع من التفاعل: المطاردة ، أو السلوكيات المتصاعدة ، أو الاستنشاق ، أو الاستمالة ، أو العض. سجل إذا كان CD-1 لا يقترب من الفئران المراهقة C57BL / 6 ؛ إذا تكرر هذا السلوك لمدة يومين ، لا تقم بتضمين CD-1 في فتيلة.
    8. بالنسبة لمرحلة التحضير ، حدد جميع فئران CD-1 التي تعرض سلوكيات مثل المطاردة أو السلوكيات المتصاعدة أو الاستنشاق أو المتابعة أو الاستمالة أو عض المراهق C57BL / 6.
    9. احتفظ بماوس CD-1 غير المحدد واستخدمها لاختبار التفاعل الاجتماعي (SIT).
      ملاحظة: يزداد السلوك الإقليمي مع مرور الوقت. لذلك ، قد تصبح الفئران CD-1 غير المختارة عدوانية تجاه الفئران المراهقة في التجربة التالية.
  3. فتيلة CD-1 السلوك العدواني
    1. إيواء الفئران CD-1 المختارة للتحضير في قفصهم المنزلي حتى اليوم الأخير من التحضير.
    2. أدخل ماوس C57BL / 6J البالغ PND >65 لمدة 30 ثانية إلى القفص المنزلي CD-1 ثم قم بتبديله بماوس C57BL / 6 PND 25 ± 3 مراهق لمدة 5 دقائق.
    3. سجل زمن انتقال العدوان الأول وعدد الهجمات وأي تفاعل (انظر الجدول التكميلي 3).
    4. قم بإجراء التحضير 2x يوميا لمدة 3-4 أيام في نفس الوقت الذي يتم فيه جدولة الهزائم (9:00 صباحا و 2:00 مساء).
      ملاحظة: لن تهاجم جميع الفئران CD-1 الفئران المراهقة خلال الأيام الأولى ، خاصة إذا كان التحضير نحو إناث الفئران. يمكن أن يزيد أو ينقص عدد أيام التحضير اعتمادا على السلوك العدواني الذي تظهره الفئران CD-1.
    5. لتقليل عدد أيام التحضير ، أعد استخدام فئران CD-1 التي مرت بتجربة هزيمة اجتماعية سابقة مع ذكور الفئران. إذا لم تظهر الفئران CD-1 عدوانا متزايدا ، فقم بتمديد أيام التحضير حتى الوصول إلى المعايير.
    6. قلل أيام التحضير إذا أظهرت فئران CD-1 سلوكا عدوانيا شديدا (تظهر الفئران C57BL / 6 جرحا مفرطا) لمنع الإصابات الشديدة أثناء الهزيمة الاجتماعية.
    7. بالنسبة للمرحلة التالية من التجربة ، حدد الفئران CD-1 التي تهاجم الفئران المراهقة على الأقل 10x (ذكور) أو 5x (إناث) لمدة يومين متتاليين.

3. بروتوكول AcSD

ملاحظة: تتكون هذه المرحلة من 3 أيام من التعود و 4 أيام من التعرض ل AcSD.

  1. التعود
    1. قم بإعداد أقفاص الفئران للهزيمة الاجتماعية (الشكل 1A-F). قسم أقفاص الفئران إلى مقصورتين باستخدام فواصل زجاجية أكريليك مناسبة (الشكل 1B ، D ؛ انظر جدول المواد).
    2. أضف فراش رقائق الخشب الصلب إلى جانبي القفص ، وأضف مربعا قطنيا لكل جانب كمواد فراش (الشكل 1 د). تأكد من أن سطح السلك مؤمن بمشابك رابطة (الشكل 1E). تأكد من تغطية قفص الفئران بغطاء الغطاء بدون القطن الواقي (الشكل 1F).
    3. ضع ماوس CD-1 لكل قفص على جانب واحد من القفص. ضع علامة على الجزء الخارجي من القفص لسهولة التعرف على كل ماوس.
    4. ضع الفئران CD-1 المختارة في جهاز الهزيمة الاجتماعية (الشكل 1F) قبل يومين أو 3 أيام من بدء بروتوكول AcSD (لتعزيز السلوك الإقليمي CD-1).
    5. أداء جلسة فتيلة 1 يوم قبل التجربة. هذا مهم للحفاظ على العدوان متسقا.
  2. جلسات الهزيمة
    1. أداء جلستين في اليوم (الجلسة الأولى: 9 صباحا ، الجلسة الثانية: 2 مساء) لمدة 4 أيام ، 8 جلسات في المجموع. ضع جدولا زمنيا للتأكد من أن المعتدي سيكون مختلفا لكل جلسة (انظر الجدول التكميلي 4 والجدول التكميلي 5).
    2. قم بوزن ماوس المراهقين C57BL / 6 قبل إدخاله على جانب CD-1 من القفص. أدخل ماوس C57BL / 6 ذكر بالغ >65 لمدة 30 ثانية في جانب CD-1 من قفص الهزيمة ثم قم بتبديله بماوس C57BL / 6 PND 24-28 للمراهقين لحلقة هزيمة مدتها 10 دقائق أو 10 هجمات كحد أقصى لكل جلسة.
    3. افصل بعد كل هجوم بمسطرة بلاستيكية. بعد كل جلسة هزيمة ، تحقق من وجود إصابات ، وعالجها بكريم تخفيف الآلام. سجل عدد الإصابات.
    4. ضع ماوس C57BL / 6J المراهق في الحجرة المجانية بجوار معتد غير مألوف حتى الجلسة التالية. كرر الإجراء مع معتدي مختلف في كل جلسة.
    5. ابدأ الجلسة مع الفئران التجريبية والمعتدية التي لم يتم إقرانها في الجلسة السابقة. راقب إصابات ذكور الفئران البالغة C57BL / 6J المستخدمة في التحضير (انظر الجدول التكميلي 6).
  3. اتبع التوصيات أدناه لرعاية ونقاط النهاية الإنسانية.
    1. اتبع إجراءات التشغيل القياسية لمجلس المراجعة المؤسسية المقابلة للهزائم الاجتماعية وضمان التقييم البيطري المستمر.
    2. مراقبة صحة الفئران طوال فترة الدراسة لتجنب معاناة وموتها.
    3. تحقق من ضبط الفاصل المثقوب بشكل صحيح لمنع الفئران من العبور إلى الحجرة الأخرى.
    4. قم بإخطار طاقم الرعاية البيطرية عندما يكون لدى جرح للمراقبة المناسبة وتطبيق كريم تخفيف الآلام يوميا حتى يتم التئام الجرح تماما.
    5. إذا تفاقمت الإصابة (زيادة حجم الجروح) ، قلل من الهجمات إلى 5 في الجلسة التالية مما يسمح بالتعافي. تحقق من وجود إصابات خطيرة. تعرف الإصابات الشديدة بأنها جروح يبلغ مجموعها > 1 سم.
    6. إزالة والقتل الرحيم على الفور مما يؤدي إلى انخفاض وزنها بنسبة 15٪ -20٪ من وزن الجسم الأولي ؛ انخفاض / انخفاض النشاط الحركي وضعف الاستمالة ؛ الفئران المصابة بجروح > 1 سم ؛ قطع القضيب ، أو علامات لدغة مع تورم في forelimbs.
      ملاحظة: يتم إجراء القتل الرحيم الأولي عن طريق غرف غاز isoflurane / CO2 متبوعا بالقتل الرحيم الثانوي الذي يتم عن طريق خلع عنق الرحم.
  4. الفئران السيطرة
    1. أداء جلستين في اليوم (الجلسة الأولى: 9 صباحا ، الجلسة الثانية: 2 مساء) لمدة 4 أيام ، 8 جلسات في المجموع. ضع جدولا زمنيا للتأكد من أن الفئران الضابطة تشترك في القفص مع C57BL / 6J مختلف محدد في كل جلسة (انظر الجدول التكميلي 7 والجدول التكميلي 8).
      ملاحظة: لا تتعرض الفئران الضابطة للمعتدي. لتقليد مقدمة ماوس CD-1 جديد في كل جلسة هزيمة ، يتم إقران الفئران الضابطة بمحدد جديد من نفس الجنس ونفس العمر (غير زميل القمامة) في كل جلسة.
    2. ضع الفئران الضابطة في جهاز الهزيمة الاجتماعية (الشكل 1) في غرفة منفصلة عن غرفة الفئران AcSD.
    3. ضع فأرتين للتحكم في كل قفص ، واحدة على كل جانب من القفص. ضع الفئران في جانب مختلف من القفص أو قفص مختلف تماما ، لذلك لا يتعرفون على الرائحة. قم بتدوير الفئران الضابطة في كل جلسة.

figure-protocol-10818
الشكل 1: جهاز لإجهاد الهزيمة الاجتماعية المتسارع (AcSD) للفئران المراهقة. (أ) من اليسار إلى اليمين ، قمم أسلاك فولاذية مقترنة بمسافة 0.6 سم بين القضبان ، مقسم بولي كربونات مثقب شفاف بقطر ثقوب 0.6 سم ، مشابك رابطة لتأمين قمم الأسلاك ، قفص فئران شفاف بغطاء غطاء (بدون طبقة واقية من القطن). (ب) أعلى: مقارنة بين فواصل البولي كربونات للهزيمة الاجتماعية المزمنة لدى البالغين (يسار) و AcSD لدى المراهقين (يمين) ؛ أسفل: قريب من مقسم البولي للفئران المراهقة. (ج) أعلى: مقارنة بين قمم الأسلاك الفولاذية للهزيمة الاجتماعية المزمنة لدى البالغين (يسار) و AcSD لدى المراهقين (يمين) ؛ أسفل: لقطة مقربة لأسطح الأسلاك الفولاذية. (مد-واو) تجميع جهاز الهزيمة الاجتماعية. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

4. اختبار التفاعل الاجتماعي

  1. قم بإجراء SIT بعد AcSD كما هو موضح سابقا57،58،59.
    1. قم بإجراء SIT بعد 24 ساعة من الجلسة الأخيرة من AcSD. قم بإجراء SIT تحت ظروف الضوء الأحمر (وليس في ظل ظروف الضوء الأصفر) بين الساعة 9 صباحا و 4 مساء.
    2. قم بإعداد الساحة المربعة الرئيسية وكاميرا الفيديو العلوية (انظر جدول المواد). تنقسم الساحة الرئيسية إلى 3 مناطق: منطقة التفاعل الاجتماعي (SIZ) ، والزوايا ، والمركز. يجب تمييز هذه المناطق في الساحة بخط أسود (استخدم علامة سوداء دائمة). استخدم الأبعاد والمعايير التالية لكل منطقة.
      1. تأكد من أن المنطقة المربعة هي المنطقة المربعة 14 سم × 9 سم التي تحيط بالسيابة. الزوايا عبارة عن مساحات صغيرة مربعة (9 سم × 9 سم) في زوايا الجدار المقابل للحاوية وتمثل أبعد نقطة عن SIZ. المركز هو المنطقة الواقعة بين المنطقة الاقتصادية الخاصة والزوايا.
    3. قم بتنظيف الساحة والمرفقات بمحلول بيروكسيديز الهيدروجين للتنظيف.
    4. ضع علامات تعريف لكل على الأرض لتحليلها. سجل كل سلوك للتحليل في وضع عدم الاتصال.
  2. الجلسة الأولى لتحديد استكشاف خط الأساس
    1. ضع حاوية شبكية سلكية فارغة على أحد جدران الساحة. ضع الماوس التجريبي (المهزوم أو الضابط) C57BL / 6 في منتصف الساحة. اسمح لها باستكشاف الساحة بحرية لمدة 2.5 دقيقة. استرجاع الماوس.
    2. قم بتنظيف الساحة والمرفقات بمحلول بيروكسيديز الهيدروجين للتنظيف.
  3. الجلسة الثانية للتفاعل الاجتماعي
    1. ضع ماوس CD-1 غير مألوف داخل حاوية الشبكة السلكية. ضع العلبة في نفس مكان الجلسة السابقة.
    2. أعد تقديم نفس ماوس C57BL / 6 المراهق إلى الساحة. اسمح لها باستكشاف الساحة بحرية لمدة 2.5 دقيقة. استرجع الفئران.
    3. قم بتنظيف الساحة والمرفقات بمحلول بيروكسيديز الهيدروجين للتنظيف.
    4. كرر العملية لجميع الفئران المراهقة C57BL / 6 (الفئران المجهدة والتحكم) بترتيب متوازن.
    5. استخدم أكثر من ماوس CD-1 واحد ل SIT لتقليل إجهاد المناولة والتحيز (على سبيل المثال ، بالنسبة لمجموعة من 30 ماوسا C57BL / 6 ، استخدم 4 فأرة CD-1). موازنة لهم بين الفئران المراهقة.
      ملاحظة: يقيس هذا الاختبار نهج و / أو سلوك التجنب للفئران التجريبية تجاه هدف اجتماعي ، كما وصفه لأول مرة كريشنان5 وجولدن7.
  4. تحليل
    1. سجل الوقت (الأوقات) المستغرق في منطقة التفاعل والزوايا خلال جلستي الاختبار.
    2. احسب نسبة التفاعل الاجتماعي على أنها الوقت المستغرق في منطقة التفاعل مع وجود المعتدي CD-1 مقسوما على الوقت المستغرق في منطقة التفاعل مع غياب المعتدي CD-1.
    3. صنف الفئران المجهدة بنسبة < 1.00 على أنها حساسة ونسبة ≥ 1.00 على أنها مرنة.
    4. استبعاد التي لا تستكشف الساحة خلال الجلسة الأولى (أي قضت 0 ثانية في أي من المناطق المخصصة) من جميع التحليلات للتحكم في الاختلافات في النشاط الحركي.
    5. استبعاد جميع التي تتلقى 0 هجوم في ≥4 جلسات هزيمة اجتماعية من جميع التحليلات لمنع المرنة غير التمثيلية.
    6. استبعاد الفئران (غير المعرضة) التي لا تقضي 61 ثانية على الأقل داخل منطقة التفاعل للتأكد من أن نسب التفاعل الاجتماعي العالية تعكس الاهتمام الفعلي بالهدف الاجتماعي.
    7. استبعاد الفئران ذات درجات نسبة التفاعل الشاذة.

النتائج

تم إجراء ما مجموعه أربع تجارب مختلفة باستخدام نموذج الإجهاد الاجتماعي المزمن في الفئران الذكور C57BL / 6 المراهقين (PND 21). ومع ذلك ، قدم هذا النموذج قيودا مهمة لاستخدامه في الفئران C57BL / 6 في سن المراهقة المبكرة.

التعديلات المطلوبة للمعدات للفئران المراهقة C57BL / 6
كان الق...

Discussion

سلوك عدواني متسق في فئران CD-1
أثناء مرحلة الفحص ، من المهم جدا ملاحظة جميع السلوكيات التي يعرضها CD-1 (المطاردة ، أو سلوكيات التركيب ، أو الاستنشاق ، أو الاستمالة ، أو العض) ومتابعة هذه السجلات عن كثب عند اختيار فأرة CD-1 ل AcSD. من المحتمل أن الماوس CD-1 الذي يتفاعل مع الفأر المراهق دون مه...

Disclosures

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الكندية للبحوث الصحية (أرقام منح CF: MOP-74709; PJT 190045) ، والمعهد الوطني لتعاطي المخدرات (رقم منحة CF: R01DA037911) ، ومجلس أبحاث العلوم الطبيعية والهندسة في كندا (رقم منحة CF: 2982226). تم دعم أندريا بانتوخا أوربان من قبل المجلس الوطني للعلوم الإنسانية والعلوم والتكنولوجيا / المجلس الوطني للإنسانية والعلوم والتكنولوجيا (CONAHCYT) من المكسيك و FRQNT - برنامج المنح الدراسية للطلاب الأجانب (PBEEE). حصل صموئيل ريتشر على منحة دراسية من البرنامج المتكامل لعلم الأعصاب في جامعة ماكجيل. تم إنشاء الرسوم التوضيحية للأشكال باستخدام قوالب من BioRender.com.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
C57BL/6 adolescent mice In house breedingMice were breeded at the Neurophenotyping Centre of the Douglas Mental Health University Institute.
C57BL/6 adult mice Charles River LaboratoriesStrain Code: 027Mice are ordered so as to arrive at PND>65 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
C57BL/6J adolescent mice Jackson LabsStrain Code: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664Mice are ordered so as to arrive at PND 24 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
CD-1 mice Charles River LaboratoriesStrain Code: 022Mice retired breeders more than three months of age and singled housed throughout.
Cleaning solution Virox Animal HealthDIN 02537222Prevail: Accelerated Hydrogen Peroxide. Desinfectant cleaner and deodorizer.
Clear perforated acrylic glass divider Manufactured by Douglas Hospital, custom order0.6 cm (w) × 45.7 cm (d) × 22.23 cm (h); perforations of 0.6 cm diameter. The dividers are perforated allowing sensory but no physical contact between the pair of mice.
Clear rectangular rat cages Allentown24 cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h).
Cotton squares for beddingInotiv EnvigoT.6060 iso-BLOX2.5 cm x 2.5 cm. Added to the social defeat apparatus.
Hard woodchip beddingInotiv EnvigoTeklad 7090, 7115Sani-chip bedding.
Large binder clips to secure the steel-wire topsSTAPLESItem #: 132429, Model #: 24178-CA51 mm
Medium binder clips to secure the steel-wire topsItem #: 132367, Model #: 24172-CA32 mm, in case the cover lids of the rat cages do not close with the large clips
Pain relief creamPolysporinPlus Pain Relief Cream (red format, NOT ointment), 2 Antibiotics plus lidocaine hydrochloride
Paired Steel-wire tops 24 cm (w) × 48 cm (d) with 0.6 cm (w) of separation between the grill
Removable wire-mesh enclosure Johnston industrial plastics11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) custom order; two per social interaction test arena secured in precut clear polycarbonate
Social interaction open-field arenaPEXIGLAS45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), custom-crafted from opaque acrylic glass (Plexiglas) 
Stopwatch For timing defeat sessions
Video camera with infrared lights SwannSRDVR-44580V Swann Camera - 4 Channel 1080p Digital Video Recorder & 2 x PRO-T853
Video tracking software Topscan2.0 Clever Systems Inc.

References

  1. Miczek, K. A. A new test for aggression in rats without aversive stimulation: Differential effects of d-amphetamine and cocaine. Psychopharmacology. 60, 253-259 (1979).
  2. Kudryavtseva, N., Bakshtanovskaya, I., Koryakina, L. Social model of depression in mice of c57bl/6j strain. Pharmacol Biochem Behav. 38 (2), 315-320 (1991).
  3. Blanchard, R. J., Mckittrick, C. R., Blanchard, D. C. Animal models of social stress: Effects on behavior and brain neurochemical systems. Physiol Behav. 73 (3), 261-271 (2001).
  4. Berton, O., et al. Essential role of bdnf in the mesolimbic dopamine pathway in social defeat stress. Science. 311 (5762), 864-868 (2006).
  5. Krishnan, V., et al. Molecular adaptations underlying susceptibility and resistance to social defeat in brain reward regions. Cell. 131 (2), 391-404 (2007).
  6. Bartolomucci, A., Fuchs, E., Koolhaas, J. M., Ohl, F. Acute and chronic social defeat: Stress protocols and behavioral testing. Neuromethods. 42, 261-275 (2009).
  7. Golden, S. A., Covington Iii, H. E., Berton, O., Russo, S. J. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nat Protoc. 6 (8), 1183-1191 (2011).
  8. Bourke, C. H., Neigh, G. N. Behavioral effects of chronic adolescent stress are sustained and sexually dimorphic. Horm Behav. 60 (1), 112-120 (2011).
  9. Steinman, M. Q., Trainor, B. C. Sex differences in the effects of social defeat on brain and behavior in the California mouse: Insights from a monogamous rodent. Semin Cell Dev Biol. 61, 92-98 (2017).
  10. Takahashi, A., et al. Establishment of a repeated social defeat stress model in female mice. Sci Rep. 7 (1), 12838 (2017).
  11. Wright, E. C., et al. Sexual differentiation of neural mechanisms of stress sensitivity during puberty. Proc Natl Acad Sci U S A. 120 (43), 2306475120 (2023).
  12. Yin, W., et al. Repeated social defeat in female mice induces anxiety-like behavior associated with enhanced myelopoiesis and increased monocyte accumulation in the brain. Brain Behav Immun. 78, 131-142 (2019).
  13. Van Doeselaar, L., et al. Chronic social defeat stress in female mice leads to sex-specific behavioral and neuroendocrine effects. Stress. 24 (2), 168-180 (2021).
  14. Hollenstein, T., Lougheed, J. P. Beyond storm and stress: Typicality, transactions, timing, and temperament to account for adolescent change. Am Psychol. 68 (6), 444 (2013).
  15. Sawyer, S. M., Azzopardi, P. S., Wickremarathne, D., Patton, G. C. The age of adolescence. Lancet Child Adolesc Health. 2 (3), 223-228 (2018).
  16. Adriani, W., Laviola, G. Windows of vulnerability to psychopathology and therapeutic strategy in the adolescent rodent model. Behav Pharmacol. 15 (5), 341-352 (2004).
  17. Reynolds, L. M., et al. Early adolescence is a critical period for the maturation of inhibitory behavior. Cereb Cortex. 29 (9), 3676-3686 (2019).
  18. Reynolds, L. M., et al. Amphetamine disrupts dopamine axon growth in adolescence by a sex-specific mechanism in mice. Nat Commun. 14 (1), 4035 (2023).
  19. Sisk, L. M., Gee, D. G. Stress and adolescence: Vulnerability and opportunity during a sensitive window of development. Curr Opin Psychol. 44, 286-292 (2022).
  20. Spear, L. P. The adolescent brain and age-related behavioral manifestations. Neurosci Biobehav Rev. 24 (4), 417-463 (2000).
  21. Reynolds, L. M., Flores, C. Mesocorticolimbic dopamine pathways across adolescence: Diversity in development. Front Neural Circuits. 15, 735625 (2021).
  22. Manitt, C., et al. The netrin receptor dcc is required in the pubertal organization of mesocortical dopamine circuitry. J Neurosci. 31 (23), 8381-8394 (2011).
  23. Reynolds, L. M., et al. Dcc receptors drive prefrontal cortex maturation by determining dopamine axon targeting in adolescence. Biol Psychiatry. 83 (2), 181-192 (2018).
  24. Kalsbeek, A., Voorn, P., Buijs, R., Pool, C., Uylings, H. Development of the dopaminergic innervation in the prefrontal cortex of the rat. J Comp Neurol. 269 (1), 58-72 (1988).
  25. Cuesta, S., et al. Dcc-related developmental effects of abused-versus therapeutic-like amphetamine doses in adolescence. Addict Biol. 25 (4), 12791 (2020).
  26. Bekhbat, M., et al. Adolescent stress sensitizes the adult neuroimmune transcriptome and leads to sex-specific microglial and behavioral phenotypes. Neuropsychopharmacology. 46 (5), 949-958 (2021).
  27. Hammerslag, L. R., Gulley, J. M. Age and sex differences in reward behavior in adolescent and adult rats. Dev Psychobiol. 56 (4), 611-621 (2014).
  28. Wheeler, A. L., et al. Adolescent cocaine exposure causes enduring macroscale changes in mouse brain structure. J Neurosci. 33 (5), 1797-1803 (2013).
  29. Schneider, M. Adolescence as a vulnerable period to alter rodent behavior. Cell Tissue Res. 354, 99-106 (2013).
  30. Makinodan, M., Rosen, K. M., Ito, S., Corfas, G. A critical period for social experience-dependent oligodendrocyte maturation and myelination. Science. 337 (6100), 1357-1360 (2012).
  31. Iñiguez, S. D., et al. Social defeat stress induces a depression-like phenotype in adolescent male c57bl/6 mice. Stress. 17 (3), 247-255 (2014).
  32. Iñiguez, S. D., et al. Social defeat stress induces depression-like behavior and alters spine morphology in the hippocampus of adolescent male c57bl/6 mice. Neurobiol Stress. 5, 54-64 (2016).
  33. Latsko, M. S., Farnbauch, L. A., Gilman, T. L., Lynch Iii, J. F., Jasnow, A. M. Corticosterone may interact with peripubertal development to shape adult resistance to social defeat. Horm Behav. 82, 38-45 (2016).
  34. Zhang, F., Yuan, S., Shao, F., Wang, W. Adolescent social defeat induced alterations in social behavior and cognitive flexibility in adult mice: Effects of developmental stage and social condition. Front Behav Neurosci. 10, 149 (2016).
  35. Xu, H., et al. Effects of adolescent social stress and antidepressant treatment on cognitive inflexibility and bdnf epigenetic modifications in the mpfc of adult mice. Psychoneuroendocrinology. 88, 92-101 (2018).
  36. Huang, G. B., et al. Effects of chronic social defeat stress on behaviour, endoplasmic reticulum proteins and choline acetyltransferase in adolescent mice. Int J Neuropsychopharmacol. 16 (7), 1635-1647 (2013).
  37. Hasegawa, S., et al. Dysfunction of serotonergic and dopaminergic neuronal systems in the antidepressant-resistant impairment of social behaviors induced by social defeat stress exposure as juveniles. Int J Neuropsychopharmacol. 21 (9), 837-846 (2018).
  38. Resende, L., et al. Social stress in adolescents induces depression and brain-region-specific modulation of the transcription factor max. Transl Psychiatry. 6 (10), e914 (2016).
  39. Mouri, A., et al. Juvenile social defeat stress exposure persistently impairs social behaviors and neurogenesis. Neuropharmacology. 133, 23-37 (2018).
  40. Rodriguez-Arias, M., et al. Social defeat in adolescent mice increases vulnerability to alcohol consumption. Addict Biol. 21 (1), 87-97 (2016).
  41. Montagud-Romero, S., et al. Repeated social defeat and the rewarding effects of cocaine in adult and adolescent mice: Dopamine transcription factors, probdnf signaling pathways, and the trkb receptor in the mesolimbic system. Psychopharmacology. 234, 2063-2075 (2017).
  42. Wilkinson, M. B., et al. A novel role of the wnt-dishevelled-gsk3β signaling cascade in the mouse nucleus accumbens in a social defeat model of depression. J Neurosci. 31 (25), 9084-9092 (2011).
  43. Hyer, M., et al. Chronic adolescent stress causes sustained impairment of cognitive flexibility and hippocampal synaptic strength in female rats. Neurobiol Stress. 14, 100303 (2021).
  44. Bekhbat, M., et al. Chronic adolescent stress sex-specifically alters central and peripheral neuro-immune reactivity in rats. Brain Behav Immun. 76, 248-257 (2019).
  45. Pyter, L. M., Kelly, S. D., Harrell, C. S., Neigh, G. N. Sex differences in the effects of adolescent stress on adult brain inflammatory markers in rats. Brain Behav Immun. 30, 88-94 (2013).
  46. Dalsgaard, S., et al. Incidence rates and cumulative incidences of the full spectrum of diagnosed mental disorders in childhood and adolescence. JAMA psychiatry. 77 (2), 155-164 (2020).
  47. Pedersen, C. B., et al. A comprehensive nationwide study of the incidence rate and lifetime risk for treated mental disorders. JAMA psychiatry. 71 (5), 573-581 (2014).
  48. Heim, C., Shugart, M., Craighead, W. E., Nemeroff, C. B. Neurobiological and psychiatric consequences of child abuse and neglect. Dev Psychobiol. 52 (7), 671-690 (2010).
  49. Kessler, R. C., Petukhova, M., Sampson, N. A., Zaslavsky, A. M., Wittchen, H. U. Twelve-month and lifetime prevalence and lifetime morbid risk of anxiety and mood disorders in the united states. Int J Methods Psychiatr Res. 21 (3), 169-184 (2012).
  50. Boyd, A., et al. Gender differences in mental disorders and suicidality in europe: Results from a large cross-sectional population-based study. J Affect Disord. 173, 245-254 (2015).
  51. Bale, T. L., Epperson, C. N. Sex differences and stress across the lifespan. Nat Neurosci. 18 (10), 1413-1420 (2015).
  52. Hankin, B. L., Mermelstein, R., Roesch, L. Sex differences in adolescent depression: Stress exposure and reactivity models. Child Dev. 78 (1), 279-295 (2007).
  53. Kim, S., Colwell, S. R., Kata, A., Boyle, M. H., Georgiades, K. Cyberbullying victimization and adolescent mental health: Evidence of differential effects by sex and mental health problem type. J Youth Adolesc. 47, 661-672 (2018).
  54. Filipponi, C., Petrocchi, S., Camerini, A. L. Bullying and substance use in early adolescence: Investigating the longitudinal and reciprocal effects over 3 years using the random intercept cross-lagged panel model. Front Psychol. 11, 571943 (2020).
  55. Brody, G. H., Yu, T., Chen, E., Miller, G. E. Persistence of skin-deep resilience in african american adults. Health Psychol. 39 (10), 921 (2020).
  56. Rijlaarsdam, J., Cecil, C. A., Buil, J. M., Van Lier, P. A., Barker, E. D. Exposure to bullying and general psychopathology: A prospective, longitudinal study. Res Child Adolesc Psychopathol. 49, 727-736 (2021).
  57. Vassilev, P., et al. Unique effects of social defeat stress in adolescent male mice on the netrin-1/dcc pathway, prefrontal cortex dopamine and cognition. eNeuro. 8 (2), (2021).
  58. Vassilev, P., et al. Custom-built operant conditioning setup for calcium imaging and cognitive testing in freely moving mice. eNeuro. 9 (1), (2022).
  59. Pantoja-Urbán, A. H., et al. Gains and losses: Resilience to social defeat stress in adolescent female mice. Biol Psychiatry. 95 (1), 37-47 (2024).
  60. Torres-Berrío, A., et al. Dcc confers susceptibility to depression-like behaviors in humans and mice and is regulated by mir-218. Biol Psychiatry. 81 (4), 306-315 (2017).
  61. Ver Hoeve, E. S., Kelly, G., Luz, S., Ghanshani, S., Bhatnagar, S. Short-term and long-term effects of repeated social defeat during adolescence or adulthood in female rats. Neuroscience. 249, 63-73 (2013).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

C57BL 6 AcSD

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved