מודל לחץ תבוסה חברתית עבור עכברים מתבגרים C57BL/6 זכרים ונקבות

Summary

פיתחנו מודל לחץ חברתי מואץ עבור עכברי C57BL/6 מתבגרים, הפועל הן אצל זכרים והן אצל נקבות ומאפשר חשיפה במהלך תקופות התבגרות בדידות. חשיפה למודל זה גורמת להימנעות חברתית, אך רק בתת-קבוצה של עכברים זכרים ונקבות מובסים.

Abstract

מצוקה חברתית בגיל ההתבגרות נפוצה ויכולה להשפיע לרעה על מסלולי בריאות הנפש. מידול לחץ חברתי אצל מכרסמים מתבגרים זכרים ונקבות נחוץ כדי להבין את השפעותיו על התפתחות המוח המתמשכת ועל התוצאות ההתנהגותיות. פרדיגמת הלחץ החברתי הכרוני (CSDS) נמצאת בשימוש נרחב כדי למדל לחץ חברתי בעכברים זכרים בוגרים C57BL/6 על ידי מינוף ההתנהגות התוקפנית המוצגת על ידי מכרסם זכר בוגר לפולש הפולש לטריטוריה שלו. יתרון של פרדיגמה זו הוא שהיא מאפשרת לסווג עכברים מובסים לקבוצות עמידות ורגישות בהתבסס על ההבדלים האישיים שלהם בהתנהגות החברתית 24 שעות לאחר מפגש התבוסה האחרון. יישום מודל זה בעכברי C57BL/6 מתבגרים היה מאתגר מכיוון שעכברים בוגרים או מתבגרים אינם תוקפים בדרך כלל עכברים זכרים או נקבות בגיל ההתבגרות המוקדמות ומכיוון שגיל ההתבגרות הוא פרק זמן קצר, הכולל חלונות זמן דיסקרטיים של פגיעות. מגבלה זו התגברה על ידי התאמת גרסה מואצת של CSDS לשימוש עבור עכברים זכרים ונקבות מתבגרים. פרדיגמת מתח זו בת 4 ימים עם 2 מפגשי תקיפה פיזית ביום משתמשת בבוגר זכר C57BL/6 כדי לכוון את עכבר CD-1 לתוקפנות כך שהוא תוקף בקלות את העכבר המתבגר הזכר או הנקבה. מודל זה נקרא לחץ תבוסה חברתית מואצת (AcSD) עבור עכברים מתבגרים. חשיפה של מתבגרים ל- AcSD גורמת להימנעות חברתית 24 שעות מאוחר יותר הן אצל זכרים והן אצל נקבות, אך רק בתת-קבוצה של עכברים מובסים. פגיעות זו מתרחשת למרות שמספר ההתקפות עקבי בין הפעלות בין קבוצות עמידות ורגישות. מודל AcSD קצר מספיק כדי לאפשר חשיפה בתקופות דיסקרטיות בתוך גיל ההתבגרות, מאפשר הפרדה של עכברים על פי נוכחות או היעדר התנהגות של הימנעות חברתית, והוא המודל הראשון הזמין לחקר לחץ תבוסה חברתית אצל עכברות מתבגרות C57BL/6.

Introduction

פרדיגמת הלחץ של התבוסה החברתית הכרונית נמצאת בשימוש נרחב כדי למדל לחץ חברתי במכרסמים בוגרים לאחר יום הלידה (PND) >65 מכרסמים זכרים. פרדיגמה זו מבוססת על ההתנהגות התוקפנית הטבעית של מכרסם זכר בוגר כאשר פולש פולש לטריטוריה שלו. מודל זה משמש במגוון מיני מכרסמים, כולל חולדות, אוגרים ועכברים 1,2,3,4,5,6,7,8,9, והוא מורכב משילוב של תוקפנות פיזית ולחץ פסיכולוגי הנמשך כ-10 ימים, במהלכם מכרסם פולש מתנסה בכמה דקות של תוקפנות פיזית מהמכרסם התושב.

Protocol

הליכי הניסוי בוצעו בהתאם להנחיות המועצה הקנדית לטיפול בבעלי חיים ואושרו על ידי אוניברסיטת מקגיל וועדת הטיפול בבעלי חיים של בית החולים דאגלס (מספר אישור ניסויים בבעלי חיים: 2005-5084). כל העכברים שוכנו בחדר מושבה מבוקר טמפרטורה ולחות (21-22 מעלות צלזיוס; 60%) ובמחזור אור-חושך של 12 שעות (אור דולק בשעה 8:00 שעות) במרכז נוירופנוטיפ של המכון האוניברסיטאי לבריאות הנפש דאגלס. לעכברים הייתה גישה למזון ומים לאורך כל הניסויים. עכברים חולקו באופן אקראי לכל תנאי ניסוי. חיות ניסוי התקבלו ממקור מסחרי (ראו טבלת חומרים). טבלה 2 מסכמת את מאפייני בעל החיים עבור כל שלב ניסוי. בסך הכל, 489 עכברי C57BL/6J מתבגרים (259 זכרים; 230 נקבות) שימשו ב-2....

תוצאות

בסך הכל בוצעו ארבעה ניסויים שונים באמצעות מודל הלחץ הכרוני של תבוסה חברתית בעכברים זכרים מתבגרים C57BL/6 (PND 21). עם זאת, מודל זה הציג מגבלות חשובות לשימוש בו בעכברי C57BL/6 בגיל ההתבגרות המוקדם.

ציוד נדרש לשינויים עבור עכברי C57BL/6 מתבגרים
המגבלה הראשונה הייתה שהציוד ששימש .......

Discussion

התנהגות עקבית ותוקפנית בעכברי CD-1
במהלך שלב המיון, חשוב מאוד לשים לב לכל ההתנהגויות המוצגות על ידי CD-1 (מרדף, התנהגויות הרכבה, רחרוח, טיפוח או נשיכה) ולעקוב מקרוב אחר רשומות אלה בעת בחירת עכברי CD-1 עבור AcSD. סביר להניח כי עכבר CD-1 אשר אינטראקציה עם העכבר המתבגר מבלי לתקוף אותו יפתח תוק?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL/6 adolescent mice	In house breeding		Mice were breeded at the Neurophenotyping Centre of the Douglas Mental Health University Institute.
C57BL/6 adult mice	Charles River Laboratories	Strain Code: 027	Mice are ordered so as to arrive at PND>65 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
C57BL/6J adolescent mice	Jackson Labs	Strain Code: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664	Mice are ordered so as to arrive at PND 24 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
CD-1 mice	Charles River Laboratories	Strain Code: 022	Mice retired breeders more than three months of age and singled housed throughout.
Cleaning solution	Virox Animal Health	DIN 02537222	Prevail: Accelerated Hydrogen Peroxide. Desinfectant cleaner and deodorizer.
Clear perforated acrylic glass divider	Manufactured by Douglas Hospital, custom order		0.6 cm (w) × 45.7 cm (d) × 22.23 cm (h); perforations of 0.6 cm diameter. The dividers are perforated allowing sensory but no physical contact between the pair of mice.
Clear rectangular rat cages	Allentown		24 cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h).
Cotton squares for bedding	Inotiv Envigo	T.6060 iso-BLOX	2.5 cm x 2.5 cm. Added to the social defeat apparatus.
Hard woodchip bedding	Inotiv Envigo	Teklad 7090, 7115	Sani-chip bedding.
Large binder clips to secure the steel-wire tops	STAPLES	Item #: 132429, Model #: 24178-CA	51 mm
Medium binder clips to secure the steel-wire tops		Item #: 132367, Model #: 24172-CA	32 mm, in case the cover lids of the rat cages do not close with the large clips
Pain relief cream	Polysporin		Plus Pain Relief Cream (red format, NOT ointment), 2 Antibiotics plus lidocaine hydrochloride
Paired Steel-wire tops			24 cm (w) × 48 cm (d) with 0.6 cm (w) of separation between the grill
Removable wire-mesh enclosure	Johnston industrial plastics		11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) custom order; two per social interaction test arena secured in precut clear polycarbonate
Social interaction open-field arena	PEXIGLAS		45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), custom-crafted from opaque acrylic glass (Plexiglas)
Stopwatch			For timing defeat sessions
Video camera with infrared lights	Swann	SRDVR-44580V	Swann Camera - 4 Channel 1080p Digital Video Recorder & 2 x PRO-T853
Video tracking software	Topscan		2.0 Clever Systems Inc.