Modelo de Estrés de Derrota Social para Ratones Adolescentes C57BL/6 Machos y Mujeres

Resumen

Desarrollamos un modelo de estrés de derrota social acelerado para ratones C57BL/6 adolescentes, que funciona tanto en machos como en hembras y permite la exposición durante períodos discretos de la adolescencia. La exposición a este modelo induce la evitación social, pero solo en un subconjunto de ratones machos y hembras derrotados.

Resumen

La adversidad social en la adolescencia es frecuente y puede tener un impacto negativo en las trayectorias de salud mental. Es necesario modelar el estrés social en roedores machos y hembras adolescentes para comprender sus efectos en el desarrollo continuo del cerebro y los resultados conductuales. El paradigma del estrés por derrota social crónica (CSDS, por sus siglas en inglés) se ha utilizado ampliamente para modelar el estrés social en ratones machos C57BL/6 adultos, aprovechando el comportamiento agresivo mostrado por un roedor macho adulto ante un intruso que invade su territorio. Una ventaja de este paradigma es que permite categorizar a los ratones derrotados en grupos resilientes y susceptibles en función de sus diferencias individuales en el comportamiento social 24 h después de la última sesión de derrota. La implementación de este modelo en ratones C57BL/6 adolescentes ha sido un desafío porque los ratones adultos o adolescentes no suelen atacar a ratones machos o hembras adolescentes tempranos y porque la adolescencia es un período corto de la vida, que abarca ventanas temporales discretas de vulnerabilidad. Esta limitación se superó mediante la adaptación de una versión acelerada de la CSDS para su uso en ratones machos y hembras adolescentes. Este paradigma de estrés de 4 días con 2 sesiones de ataque físico por día utiliza un macho adulto C57BL/6 para preparar al ratón CD-1 para una agresividad tal que ataque fácilmente al ratón adolescente macho o hembra. Este modelo se denominó estrés de derrota social acelerado (AcSD) para ratones adolescentes. La exposición de los adolescentes a la AcSD induce una evitación social 24 horas más tarde tanto en machos como en hembras, pero solo en un subconjunto de ratones derrotados. Esta vulnerabilidad se produce a pesar de que el número de ataques es coherente en todas las sesiones entre grupos resistentes y susceptibles. El modelo AcSD es lo suficientemente corto como para permitir la exposición durante períodos discretos dentro de la adolescencia, permite la segregación de ratones de acuerdo con la presencia o ausencia de comportamiento de evitación social, y es el primer modelo disponible para estudiar el estrés de derrota social en ratones hembra C57BL/6 adolescentes.

Introducción

El paradigma del estrés de derrota social crónica es ampliamente utilizado para modelar el estrés social en roedores adultos de día postnatal (DPN) >65 machos. Este paradigma se basa en el comportamiento agresivo natural de un roedor macho adulto cuando un intruso invade su territorio. Este modelo se utiliza en una variedad de especies de roedores, incluyendo ratas, hámsters y ratones 1,2,3,4,5,6,7,8,9, y consiste en una combinación de agresión física y estrés psicológico que dura unos 10 días, durante los cuales un roedor intruso experimenta unos minutos de agresión física por parte del roedor residente.^....

Protocolo

Los procedimientos experimentales se realizaron de acuerdo con las directrices del Consejo Canadiense de Cuidado Animal y fueron aprobados por el Comité de Cuidado Animal de la Universidad McGill y el Hospital Douglas (número de aprobación de experimentos con animales: 2005-5084). Todos los ratones se alojaron en una sala de colonias con temperatura y humedad controladas (21-22 °C; 60%) y en un ciclo de luz-oscuridad de 12 h (se enciende a las 8:00 h) en el Centro de Neurofenotipado del Instituto Universitario de Salud Mental Douglas. Los ratones tuvieron acceso ad libitum a comida y agua durante todos los experimentos. Los ratones fueron asignados aleatoriam....

Discusión

Comportamiento consistente y agresivo en ratones CD-1
Durante la fase de cribado, es muy importante tomar nota de todos los comportamientos mostrados por el CD-1 (persecución, comportamientos de montaje, olfateo, acicalamiento o mordedura) y seguir de cerca estos registros al seleccionar los ratones CD-1 para el AcSD. Es probable que un ratón CD-1 que interactúa con el ratón adolescente sin atacarlo desarrolle agresividad hacia los ratones adolescentes durante el cebado. Por el contrario, un rató.......

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
C57BL/6 adolescent mice	In house breeding		Mice were breeded at the Neurophenotyping Centre of the Douglas Mental Health University Institute.
C57BL/6 adult mice	Charles River Laboratories	Strain Code: 027	Mice are ordered so as to arrive at PND>65 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
C57BL/6J adolescent mice	Jackson Labs	Strain Code: 000664; RRID:IMSR_JAX:000664	Mice are ordered so as to arrive at PND 24 and are group housed (four mice per cage) in standard mice cages.
CD-1 mice	Charles River Laboratories	Strain Code: 022	Mice retired breeders more than three months of age and singled housed throughout.
Cleaning solution	Virox Animal Health	DIN 02537222	Prevail: Accelerated Hydrogen Peroxide. Desinfectant cleaner and deodorizer.
Clear perforated acrylic glass divider	Manufactured by Douglas Hospital, custom order		0.6 cm (w) × 45.7 cm (d) × 22.23 cm (h); perforations of 0.6 cm diameter. The dividers are perforated allowing sensory but no physical contact between the pair of mice.
Clear rectangular rat cages	Allentown		24 cm (w) × 48.3 cm (d) × 22.23 (h).
Cotton squares for bedding	Inotiv Envigo	T.6060 iso-BLOX	2.5 cm x 2.5 cm. Added to the social defeat apparatus.
Hard woodchip bedding	Inotiv Envigo	Teklad 7090, 7115	Sani-chip bedding.
Large binder clips to secure the steel-wire tops	STAPLES	Item #: 132429, Model #: 24178-CA	51 mm
Medium binder clips to secure the steel-wire tops		Item #: 132367, Model #: 24172-CA	32 mm, in case the cover lids of the rat cages do not close with the large clips
Pain relief cream	Polysporin		Plus Pain Relief Cream (red format, NOT ointment), 2 Antibiotics plus lidocaine hydrochloride
Paired Steel-wire tops			24 cm (w) × 48 cm (d) with 0.6 cm (w) of separation between the grill
Removable wire-mesh enclosure	Johnston industrial plastics		11 cm (w) × 6.8 cm (d) × 42 cm (h) custom order; two per social interaction test arena secured in precut clear polycarbonate
Social interaction open-field arena	PEXIGLAS		45 cm (w) × 45 cm (d) × 49 cm (h), custom-crafted from opaque acrylic glass (Plexiglas)
Stopwatch			For timing defeat sessions
Video camera with infrared lights	Swann	SRDVR-44580V	Swann Camera - 4 Channel 1080p Digital Video Recorder & 2 x PRO-T853
Video tracking software	Topscan		2.0 Clever Systems Inc.