الحقن داخل الكاميرا في الفئران ذات المخاطر المنخفضة للآثار الضارة

Summary

يصف هذا البروتوكول تقنية للحقن داخل الكاميرا في الفئران باستخدام شق مركزي في القرنية ونفق طويل في الغرفة الأمامية. تقلل طريقة الحقن هذه من خطر إحداث تلف غير مقصود للأنسجة وبالتالي تحسن الدقة والتكاثر.

Abstract

الحقن داخل الكاميرا هو روتين قياسي للإدارة في طب العيون. يعد تطبيق الحقن داخل الكاميرا في القوارض للبحث أمرا صعبا بسبب الأبعاد المحدودة وتشريح العين ، بما في ذلك حجم الخلط المائي الصغير وانحناء العدسة وسمك العدسة. يؤدي الضرر المحتمل أثناء الحقن داخل الكاميرا إلى آثار ضارة وتباين تجريبي. يصف هذا البروتوكول إجراء الحقن داخل الكاميرا في الفئران ، مما يسمح بالدقة والتكاثر.

تم استخدام فئران Sprague-Dawley كنماذج تجريبية. نظرا لأن موضع العدسة في الفئران يبرز في الغرفة الأمامية ، فإن الحقن من المحيط ، كما هو الحال في البشر ، أمر غير موات. لذلك ، يتم إنشاء شق في منطقة القرنية المركزية باستخدام شفرة خنجر مقاس 31 مقاس 0.8 مم لتشكيل نفق ذاتي الغلق في الغرفة الأمامية. يسمح الشق بزاوية قريبة من الشقة بإنشاء نفق طويل ، مما يقلل من فقدان الخلط المائي وضحلة الغرفة الأمامية. يتم إدخال إبرة نانوية عيار 34 في النفق للحقن. يتيح ذلك الاختراق بأقل قدر من مقاومة الاحتكاك ويتجنب لمس العدسة. يسمح حقن التريبان الأزرق بالتصور عن طريق المجهر الشقي لوجود الصبغة في الغرفة الأمامية واستبعاد التسرب. يتضح التوافر البيولوجي للطبقة البطانية للقرنية عن طريق حقن صبغة Hoechst ، التي تلطخ نوى الخلايا البطانية للقرنية بعد الحقن.

في الختام ، ينفذ هذا البروتوكول إجراء للحقن الدقيق داخل الكاميرا في الفئران. يمكن استخدام هذا الإجراء لتوصيل الأدوية والمركبات المختلفة داخل الكاميرا في نماذج الفئران التجريبية ، مما يزيد من كفاءة وقابلية استنساخ أبحاث العيون.

Introduction

التوافر البيولوجي للمركبات التي يتم توصيلها عن طريق الإعطاء الموضعي إلى سطح العين محدود إلى حد كبير ، وعادة ما يكون <5٪ ¹. يتم التخلص من المركبات التي تديرها قطرات العين بشكل أساسي عن طريق التصريف والتمزق المستحث ودوران السوائل المسيلة للدموع وامتصاص الملتحمة. بالإضافة إلى ذلك ، فإن تغلغل المركبات عبر سطح العين مقيد بشدة بواسطة حاجز القرنية والملتحمة^1،2،3. تتكون القرنية من ثلاث طبقات رئيسية: الظهارة الخارجية ، والسدى الوسيط ، والبطانة الداخلية. ترتبط ظهارة القرنية السطحية ببعضها البعض من خلال تقاطعات ضيقة قوية وتخلق مق....

Protocol

تمت الموافقة على التجارب في البروتوكول من قبل لجنة التصاريح الوطنية - لعلوم وتتوافق مع بيان ARVO لاستخدام في أبحاث طب العيون والرؤية. تم استخدام إناث فئران Sprague-Dawley ، التي تتراوح أعمارها بين 8-10 أسابيع ، في الدراسة الحالية وتعرضت لدورات الضوء والظلام لمدة 12/12 ساعة. تم الحصول على من مصدر تجاري (انظر جدول المواد).

1. تحضير

1. تحضير خليط مخدر من الكيتامين (80 ملغ/كغ من وزن الجسم في 0.8 مل) والزيلازين (4 ملغ/كغ من وزن الجسم في 0.2 مل) وحقنها داخل الصفاق في حقنة واحدة لتخدير الفئران.
2. حقن البوبرينورفين المسكن (0.03 ملغ/كغ) داخل الصفاق في حقنة واحدة.
....

النتائج

تم حقن فئران Sprague Dawley داخل الكاميرا ب 5 ميكرولتر من التربان الأزرق وفقا للبروتوكول الموضح أعلاه. أظهر فحص المصباح الشقي مباشرة بعد الحقن أن الغرفة كانت ملطخة باللون الأزرق ، مما يشير إلى أن المادة المحقونة وصلت إلى الغرفة الأمامية (الشكل 3). علاوة على ذلك ، .......

Discussion

يجب أن توفر نماذج البحث قبل السريري بيئة خاضعة للرقابة وقابلة للتكرار لضمان موثوقية النتائج وقابليتها للتطبيق. في أبحاث طب العيون ، تستخدم نماذج حقن العين بشكل شائع في جوانب بحثية متنوعة تتراوح من إنشاء نماذج المرض واختبار علاجات جديدة وتقييم تفاعلات الأنسجة والآثار ا?.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648