副作用のリスクが低いラットにおける皮内注射

要約

このプロトコルは、中央角膜切開と前房への長いトンネルを使用したラットの皮内房内注射の技術を説明しています。この注入方法により、不注意による組織損傷を誘発するリスクが最小限に抑えられ、精度と再現性が向上します。

要約

皮内注射は、眼科における標準的な投与ルーチンです。げっ歯類への皮内注射の研究への適用は、小さな房水量、水晶体の湾曲、水晶体の厚さなど、眼の寸法と解剖学的構造に制限があるため、困難です。前房内注射中の潜在的な損傷は、悪影響と実験のばらつきをもたらします。このプロトコルは、ラットでの皮内注射の手順を説明しており、精度と再現性を可能にします。

実験モデルとしてSprague-Dawleyラットを使用しました。ラットの水晶体の位置は前房に突き出ているため、ヒトのように周辺から注射することは好ましくありません。したがって、31ゲージの0.8mmスティレットブレードを使用して角膜中央領域に切開を作成し、前房へのセルフシールトンネルを形成します。フラットに近い角度での切開は、長いトンネルを作り出すことを可能にし、これにより房水の損失と前房の浅さが最小限に抑えられます。34ゲージのナノニードルをトンネルに挿入して注入します。これにより、摩擦抵抗を最小限に抑えた貫通が可能になり、レンズへの接触を回避できます。トリパンブルーの注入により、スリット顕微鏡による前房内の色素の存在を可視化し、漏れを排除することができます。角膜内皮層へのバイオアベイラビリティは、注射後に角膜内皮細胞の核を染色したヘキスト色素の注射によって実証されます。

結論として、このプロトコルは、ラットでの正確な皮内注射の手順を実装します。この手順は、実験ラットモデルにおけるさまざまな薬物や化合物の皮内導入に使用でき、眼科研究の効率と再現性を向上させます。

概要

局所投与によって眼の表面に送達される化合物のバイオアベイラビリティは非常に限られており、通常は<5%¹です。.点眼薬で投与される化合物は、主にドレナージ、誘発性流涙、涙液代謝回転、および結膜吸収によって排除されます。さらに、眼表面を通る化合物の透過は、角膜結膜バリア^1,2,3によって高度に制限されています。角膜は、最も外側の上皮、中間間質、および最も内側の内皮の3つの主要な層で構成されています。表在性角膜上皮は、強力なタイトジャンクションによって相互接続されており、物質透過性に対する主な障壁である高い傍細胞抵抗性を生み出します。複数の上皮層は、角膜上皮の細胞間空間を通る親水性分子と高分子の透過をさらに制限します。上皮の後継として、間質はコラーゲン繊維で構成され、水性の細孔を含んでいます。角膜上皮とは対照的に、間質は親水性薬物の移動を可能にします。しかし、親油性化合物^1,2,3に対しては非常に不透過性です。角膜上皮と間質層は一緒になって、薬物の吸収を....

プロトコル

この議定書の実験は、動物科学のための国家許可委員会によって承認され、眼科および視覚研究における動物の使用に関するARVO声明に準拠しています。8〜10週齢の雌Sprague-Dawleyラットを本研究に使用し、12/12時間の明暗サイクルに曝露しました。動物は商業的な供給源から入手しました( 資料の表を参照)。

1.動物の調理

1. ケタミン(0.8mL中80mg/kg体重)とキシラジン(0.2mL中4mg/kg体重)の麻酔薬混合物を調製し、ラットに麻酔をかけるために1回注射で腹腔内注射する。
2. 鎮痛剤のブプレノルフィン(0.03 mg / kg)を1回の注射で腹腔内に注射します。.
3. 局所眼科麻酔薬0.4%オキシブプロカインを両眼に適用します。.

2. セルフシール性角膜トンネルの作製

1. 外科用眼鉗子を備えた角膜強膜接合部の横にある垂直正中線に上強膜を保持することにより、目を安定させます。
2. 手術用顕微鏡下で、滅菌済みの0.8 mm、31 Gスティレットブレードを、垂直正中線(瞳孔の中心より上)の傍中心角膜領域に、水平にできるだけ近い角度で平坦な位置に置き....

ディスカッション

前臨床研究モデルは、所見の信頼性と適用性を確保するために、制御された再現性のある環境を提供する必要があります。眼科研究では、疾患モデルの確立、新しい治療法の試験、組織反応や潜在的な副作用の評価など、さまざまな研究面で眼注射モデルが一般的に使用されています。

前房内注射は、実験眼科における一般的な手法として機能?.......

資料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648