Внутрикамерная инъекция крысам с низким риском побочных эффектов

Резюме

Этот протокол описывает технику внутрикамерной инъекции крысам с использованием центрального разреза роговицы и длинного туннеля в переднюю камеру. Этот метод инъекции сводит к минимуму риск непреднамеренного повреждения тканей и тем самым повышает точность и воспроизводимость.

Аннотация

Внутрикамерная инъекция является стандартной процедурой введения в офтальмологии. Применение внутрикамерной инъекции у грызунов для исследований является сложной задачей из-за предельных размеров и анатомии глаза, включая небольшой объем водянистой влаги, кривизну хрусталика и толщину хрусталика. Потенциальное повреждение во время внутрикамерных инъекций приводит к неблагоприятным последствиям и экспериментальной вариабельности. Этот протокол описывает процедуру внутрикамерной инъекции крысам, обеспечивающую точность и воспроизводимость.

В качестве экспериментальных моделей использовались крысы Спрэг-Доули. Поскольку положение хрусталика у крыс выступает в переднюю камеру, введение с периферии, как это делается у человека, неблагоприятно. Таким образом, разрез создается в центральной области роговицы с помощью лезвия шпильки 31 калибра 0,8 мм, чтобы сформировать самогерметизирующийся туннель в переднюю камеру. Разрез под углом, близким к плоскому, позволяет создать длинный тоннель, что сводит к минимуму потерю водянистой влаги и обмеление передней камеры. Наноигла 34 калибра вводится в туннель для инъекции. Это обеспечивает проникновение с минимальным сопротивлением трению и позволяет избежать прикосновения к объективу. Введение трипан-синего позволяет визуализировать с помощью щелевой микроскопии наличие красителя в передней камере и исключить утечку. Биодоступность к эндотелиальному слою роговицы демонстрируется при введении красителя Hoechst, которым окрашиваются ядра эндотелиальных клеток роговицы после инъекции.

В заключение следует отметить, что в этом протоколе реализована процедура точной внутрикамерной инъекции крысам. Эта процедура может быть использована для внутрикамерной доставки различных лекарственных препаратов и соединений в экспериментальных моделях крыс, повышая эффективность и воспроизводимость офтальмологических исследований.

Введение

Биодоступность соединений, доставляемых при местном введении на поверхность глаза, сильно ограничена и обычно составляет <5%¹. Соединения, вводимые глазными каплями, в основном устраняются за счет дренажа, индуцированного слезотечения, оборота слезной жидкости и всасывания конъюнктивы. Кроме того, проникновение соединений через поверхность глаза сильно ограничено роговично-конъюнктивным барьером ^1,2,3. Роговица состоит из трех основных слоев: самого наружного эпителия, промежуточной стромы и самого внутреннего эндотели....

протокол

Эксперименты в протоколе были одобрены Национальным комитетом по выдаче разрешений - для зоотехнии и соответствуют Заявлению ARVO об использовании животных в офтальмологических и зрительных исследованиях. Для настоящего исследования были использованы самки крыс Sprague-Dawley в возрасте 8-10 недель, которые подвергались 12-12-часовому циклу «свет-темнота». Животные были получены из коммерческого источника (см. Таблицу материалов).

1. Подготовка животных

1. Приготовьте смесь анестетика из кетамина (80 мг/кг массы тела в 0,8 мл) и ксилазина (4 мг/кг массы тела в 0,2 мл....

Результаты

Крысам Sprague Dawley вводили интракамерально 5 мкл трипанового синего в соответствии с протоколом, описанным выше. Осмотр с помощью щелевой лампы сразу после инъекции показал, что камера окрашена трипановым синим, что указывает на то, что введенный материал достиг передней.......

Обсуждение

Модели доклинических исследований должны обеспечивать контролируемую и воспроизводимую среду для обеспечения надежности и применимости результатов. В офтальмологических исследованиях модели глазных инъекций обычно используются в различных исследовательских ас?.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648