Intrakamerale Injektion bei Ratten mit geringem Risiko für Nebenwirkungen

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt eine Technik zur intrakameralen Injektion bei Ratten unter Verwendung eines zentralen Hornhautschnitts und eines langen Tunnels in die Vorderkammer. Diese Injektionsmethode minimiert das Risiko einer versehentlichen Gewebeschädigung und verbessert dadurch die Präzision und Reproduzierbarkeit.

Zusammenfassung

Die intrakamerale Injektion ist eine Standardverabreichungsroutine in der Augenheilkunde. Die Anwendung der intrakameralen Injektion bei Nagetieren zu Forschungszwecken ist aufgrund der begrenzten Abmessungen und der Anatomie des Auges, einschließlich des kleinen Kammerwasservolumens, der Linsenkrümmung und der Linsendicke, eine Herausforderung. Mögliche Schäden während intrakameraler Injektionen führen zu unerwünschten Wirkungen und experimenteller Variabilität. Dieses Protokoll beschreibt ein Verfahren zur intrakameralen Injektion bei Ratten, das Präzision und Reproduzierbarkeit ermöglicht.

Als Versuchsmodelle wurden Sprague-Dawley-Ratten verwendet. Da die Linsenposition bei Ratten in die Vorderkammer hineinragt, ist eine Injektion aus der Peripherie, wie sie beim Menschen erfolgt, ungünstig. Daher wird mit einer 31 Gauge 0,8 mm Stilettoklinge ein Schnitt im zentralen Hornhautbereich erstellt, um einen selbstdichtenden Tunnel in die Vorderkammer zu bilden. Ein Schnitt in einem flachen Winkel ermöglicht es, einen langen Tunnel zu schaffen, der den Verlust des Kammerwassers und die Flachheit der Vorderkammer minimiert. Eine 34-Gauge-Nanonadel wird zur Injektion in den Tunnel eingeführt. Dies ermöglicht eine Durchdringung mit minimalem Reibungswiderstand und vermeidet das Berühren der Linse. Die Injektion von Trypanblau ermöglicht die Visualisierung des Vorhandenseins des Farbstoffs in der Vorderkammer durch Schlitzmikroskopie und schließt Leckagen aus. Die Bioverfügbarkeit in der Hornhautendothelschicht wird durch die Injektion von Hoechst-Farbstoff nachgewiesen, der die Kerne der Hornhautendothelzellen nach der Injektion färbte.

Zusammenfassend lässt sich sagen, dass dieses Protokoll ein Verfahren zur genauen intrakameralen Injektion bei Ratten implementiert. Dieses Verfahren kann für die intrakamerale Verabreichung verschiedener Medikamente und Verbindungen in experimentellen Rattenmodellen verwendet werden, wodurch die Effizienz und Reproduzierbarkeit der ophthalmologischen Forschung erhöht wird.

Einleitung

Die Bioverfügbarkeit von Verbindungen, die durch topische Verabreichung an die Augenoberfläche abgegeben werden, ist stark begrenzt und liegt in der Regel <5 %¹. Verbindungen, die durch Augentropfen verabreicht werden, werden hauptsächlich durch Drainage, induzierte Tränenfluss, Tränenflüssigkeitsumsatz und Bindehautabsorption ausgeschieden. Darüber hinaus wird die Permeation von Verbindungen durch die Augenoberfläche durch die Hornhaut-Konjunktiva-Barriere stark eingeschränkt ^1,2,3. Die Hornhaut besteht aus drei Haupt....

Protokoll

Die Versuche im Protokoll wurden vom Nationalen Genehmigungsausschuss für Tierwissenschaften genehmigt und entsprechen der ARVO-Erklärung zur Verwendung von Tieren in der Augen- und Sehforschung. Weibliche Sprague-Dawley-Ratten im Alter von 8-10 Wochen wurden für die vorliegende Studie verwendet und 12/12 h Hell-Dunkel-Zyklen ausgesetzt. Die Tiere wurden aus einer kommerziellen Quelle gewonnen (siehe Materialtabelle).

1. Vorbereitung der Tiere

1. Bereiten Sie eine Anästhesiemischung aus Ketamin (80 mg/kg Körpergewicht in 0,8 ml) und Xylazin (4 mg/kg Körpergewicht in ....

Diskussion

Präklinische Forschungsmodelle sollten eine kontrollierte und reproduzierbare Umgebung bieten, um die Zuverlässigkeit und Anwendbarkeit der Ergebnisse zu gewährleisten. In der ophthalmologischen Forschung werden Augeninjektionsmodelle häufig in verschiedenen Forschungsbereichen eingesetzt, die von der Erstellung von Krankheitsmodellen über das Testen neuer Behandlungen bis hin zur Bewertung von Gewebereaktionen und potenziellen Nebenwirkungen reichen.

Int.......

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648