Inyección intracameral en ratas con bajo riesgo de efectos adversos

Resumen

Este protocolo describe una técnica para la inyección intracameral en ratas utilizando una incisión corneal central y un túnel largo hacia la cámara anterior. Este método de inyección minimiza el riesgo de inducir daño tisular involuntario y, por lo tanto, mejora la precisión y la reproducibilidad.

Resumen

La inyección intracameral es una rutina de administración estándar en oftalmología. La aplicación de la inyección intracameral en roedores para la investigación es un desafío debido a las dimensiones y la anatomía limitantes del ojo, incluido el pequeño volumen de humor acuoso, la curvatura del cristalino y el grosor del cristalino. El daño potencial durante las inyecciones intracamerales introduce efectos adversos y variabilidad experimental. Este protocolo describe un procedimiento para la inyección intracameral en ratas, que permite precisión y reproducibilidad.

Se utilizaron ratas Sprague-Dawley como modelos experimentales. Dado que la posición del cristalino en las ratas sobresale en la cámara anterior, la inyección desde la periferia, como se hace en los humanos, es desfavorable. Por lo tanto, se crea una incisión en la región central de la córnea utilizando una hoja de aguja de 0,8 mm de calibre 31 para formar un túnel autosellante en la cámara anterior. Una incisión en un ángulo cercano al plano permite crear un túnel largo, lo que minimiza la pérdida de humor acuoso y la poca profundidad de la cámara anterior. Se inserta una nanoaguja de calibre 34 en el túnel para la inyección. Esto permite la penetración con una resistencia mínima a la fricción y evita tocar la lente. La inyección de tripano-azul permite visualizar mediante microscopía de hendidura la presencia del colorante en la cámara anterior y excluir fugas. La biodisponibilidad de la capa endotelial corneal se demuestra mediante la inyección de colorante de Hoechst, que tiñe los núcleos de las células endoteliales de la córnea después de la inyección.

En conclusión, este protocolo implementa un procedimiento para la inyección intracameral precisa en ratas. Este procedimiento se puede utilizar para la administración intracameral de diversos fármacos y compuestos en modelos experimentales de ratas, lo que aumenta la eficiencia y la reproducibilidad de la investigación oftalmológica.

Introducción

La biodisponibilidad de los compuestos administrados por administración tópica a la superficie del ojo es muy limitada, normalmente un <5%¹. Los compuestos administrados por colirios se eliminan principalmente por drenaje, lagrimeo inducido, renovación del líquido lagrimal y absorción conjuntival. Además, la permeabilidad de los compuestos a través de la superficie ocular está muy restringida por la barrera córnea-conjuntiva ^1,2,3. La córnea está compuesta por tres capas principales: el epitelio más externo, el estroma....

Protocolo

Los experimentos en el protocolo fueron aprobados por el Comité Nacional de Permisos para la ciencia animal y cumplen con la Declaración de ARVO sobre el uso de animales en la investigación oftálmica y de la visión. Para el presente estudio se utilizaron ratas hembras Sprague-Dawley, de 8 a 10 semanas de edad, y se expusieron a ciclos de luz-oscuridad de 12/12 h. Los animales se obtuvieron de una fuente comercial (ver Tabla de Materiales).

1. Preparación animal

1. Preparar una mezcla anestésica de ketamina (80 mg/kg de peso corporal en 0,8 mL) y xilacina (4 mg/kg de ....

Discusión

Los modelos de investigación preclínica deben proporcionar un entorno controlado y reproducible para garantizar la fiabilidad y aplicabilidad de los hallazgos. En la investigación oftalmológica, los modelos de inyección ocular se utilizan comúnmente en diversos aspectos de la investigación que van desde el establecimiento de modelos de enfermedad, la prueba de nuevos tratamientos y la evaluación de las reacciones tisulares y los posibles efectos adversos.

Materiales

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648