جراحة نقل الأجنة عن طريق شق البطن في الذهب

Summary

يصف هذا البروتوكول تطبيق التقنية الجراحية المستخدمة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة عن طريق شق البطن في المذهب.

Abstract

يهدف هذا البروتوكول إلى إظهار التقنية الجراحية لنقل أجنة الخنازير المستنسخة إلى قناة البيض ، وهي طريقة تستخدم على نطاق واسع في إنتاج الخنازير المعدلة وراثيا للأبحاث الطبية الحيوية. خضعت تسعة ذهبيات للتزامن الهرموني وبضع البطن لنقل الأجنة المستنسخة الناتجة عن النقل النووي للخلايا الجسدية (SCNT) في مراحل تصل إلى 4 خلايا في اليوم 2 إلى قناة البيض. تم إجراء تشخيص الحمل عن طريق الفحص بالموجات فوق الصوتية بعد 30 يوما من جراحة النقل. أظهرت ستة من أصل تسعة مذهبات تم تشغيلها علامات الحمل في الفحص بالموجات فوق الصوتية. ومع ذلك ، نظرا لعدم وجود تقدم في نمو الجنين كما تم تقييمه بواسطة تخطيط صدى الشر ، فقد خضعت الذهبية للتشريح في 60 يوما لجمع المواد البيولوجية وتقييم الجهاز التناسلي. لوحظت التصاقات في قرون الرحم والمبيض وقنوات البيض. من تجويف الرحم لاثنين من الذهبات الرحيم ، تم الحصول على واحد وأربعة هياكل جنينية تتراوح أعمار الحمل بين 12 إلى 20 يوما. على الرغم من عدم وجود خنازير حية ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى انخفاض معدل الكفاءة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة ، والذي يتأثر بعوامل مختلفة ، بما في ذلك عدد ونوعية الأجنة المنقولة ، أثبتت التقنية الجراحية المقدمة أنها سريعة وآمنة.

Introduction

تعتبر الخنازير نموذجا تجريبيا ممتازا للأبحاث الطبية الحيوية نظرا لأوجه التشابه التشريحية والفسيولوجية والوراثية مع البشر¹. غالبا ما تم استخدام هذه في الأبحاث المتعلقة بزرع الأعضاء ، بهدف إنتاج أعضاء أو خلايا أو أنسجة تعزز انخفاض خطر الرفض عند زرعها في البشر. تهدف أبحاث زراعة الأعضاء إلى زيادة إمدادات الأعضاء لزراعة الأعضاء البشرية ، وبالتالي تقليل قائمة انتظار المرضى².

يتضمن إنتاج الخنازير لزرع الأعضاء عدة خطوات ، بما في ذلك إنتاج المستنسخة من خلايا الخنازير المعدلة وراثيا. بعد الإنتاج المختبري للأجنة المستنسخة المعدلة وراثيا ، ي....

Protocol

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات حول استخدام في البحوث التابعة لكلية الطب البيطري وعلوم بجامعة ساو باولو, البروتوكول رقم 6088030523. تم استخدام تسعة مذهبات عمرها سبعة أشهر من تربية الخنازير نواة Água Branca ، الواقعة في مدينة إيتو ، ولاية ساو باولو ، البرازيل ، مباشرة بعد الكشف الثاني عن الشبق⁹. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير

1. قم بصيام لمدة 12 ساعة وتقييد وصول المياه لمدة 4 ساعات قبل العملية الجراحية.
2. باستخدام إبرة 40 مم × 12 مم، اسحب 10 ملغم/كغ من الكيتامين و0.2 ملغم/....

النتائج

تهدف هذه المقالة إلى توضيح جراحة شق البطن لنقل الأجنة المستنسخة إلى قناة البيض المذهبة. بقيت جميع في مستوى تخدير مناسب ، دون أي حوادث أو مضاعفات أثناء الجراحة أثناء التعافي من التخدير. استغرق الذهب ، في المتوسط ، 2-3 ساعات للوقوف بعد انتهاء الجراحة.

استمرت ج.......

Discussion

تم إجراء الطريقة الجراحية الموصوفة سابقا من قبل مجموعات بحثية أخرى تعمل على إنتاج الخنازير المستنسخة أو الخنازير المستنسخة المعدلة وراثيا ، مع تقارير عن الولادات بعد تنفيذ هذه التقنية^{15،16،17،18،}

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25 mL straw	generic	-	Surgical material
1 mL syringe	Descarpack	341001	Surgical material
10 mL syringe	Descarpack	324601	Surgical material
20 mL syringe	Descarpack	324801	Surgical material
3 mL syringe	Descarpack	324201	Surgical material
5 mL syringe	Descarpack	324401	Surgical material
60 mL syringe	Descarpack	323201	Surgical material
9 mm endotracheal tube	Rusch	112482-000090	Surgical material
Allis forceps	generic	-	Surgical instrument
Amox LA	JA Saúde Animal	MAPA registration: 8.781/2004	Pharmaceutical drug
Bakhaus forceps	generic	-	Surgical instrument
Catheter 20G	Descarpack	362401	Catheter for intravenous access
Cetamin	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000011	Anesthetic
Conductive clinical gel	RMC	ANVISA registration: 80122200013	Surgical material
Dipyrone D-500	Zoetis	MAPA registration: SP0000728-46	Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22	Wiltex	ANVISA registration: 10150470565	Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brush	Rioquimica	7.89778E+12	Surgical asepsis
Easy-Scan:Go	IMV	ESCG01	Ultrasound
Endozime AW Plus	Ruhof	34514	Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)	Cristália	ANVISA registration: 1029800810159	Anesthetic
Gosset retractor	generic	-	Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forceps	generic	-	Surgical instrument
Healing ointment - Unguento Pearson	Pearson SA	MAPA registration: SP0000094-16	Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solution	Rioquimica	ANVISA registration: 218690015	Surgical material
Isofluorane	Biochimico	ANVISA registration: 100630222	Anesthetic
IV Drip set extensor	generic	-	Fluid therapy
IV Macro drip set	Descarpack	410301	Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-50	Pharmaceutical drug
Laringoscope	-	-	Surgical instrument
Maxicam 2%	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-69	Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm	generic	1530	Surgical material
Midazolam	Hipolabor	ANVISA registration: 1134301430035	Anesthetic
Multi-Way IV Infusion Set	Descarpack	413201	Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mm	Descarpack	353601	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mm	Wiltex	ANVISA registration: 10150470664	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holder	generic	-	Surgical instrument
Nylon 2 suture trhead	Shalon Medical	N502CTI40	Surgical material
Ordinary pen	generic	-	Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0070	Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture thread	Atramat	G4099-75H	Surgical material
Potassium chloride	Samtec	ANVISA registration: 1559200010139	Parenteral drug
Procedure gloves	Descarpack	122401	Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)	União Química	ANVISA registration: 1049714490057	Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0061	Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Scalp 21 G	Descarpack	421201	Surgical material
Shoe covers	generic	-	Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compresses	Cremer	ANVISA registration: 10071150065	Surgical material
Sterile gauze pad	Procitex	ANVISA registration: 80245210083	Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm	Venkuri	7010003	Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm	PolarFix	F00208	Surgical material
Sterile surgical gloves	Mucambo	CA: 39.317	Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscope	generic	-	Surgical equipment
Surgical cap	Descarpack	93201	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gown	Descarpack	231101	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical mask	Descarpack	110701	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-blunt	generic	-	Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharp	generic	-	Surgical instrument
Surgical stapler	Tradevet	-	Surgical material
Tekbond super glue	Tek Bond	78072720030	Surgical material
Thermometer	generic	-	Surgical equipment
Three Way Stopcock	Solidor	374	Surgical material
Tramadol hydrocloride	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000002	Anesthetic
Transparent film dressing	Skinupper	ANVISA registration: 82307460014	Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm	generic	364828	Surgical material