A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

يصف هذا البروتوكول تطبيق التقنية الجراحية المستخدمة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة عن طريق شق البطن في المذهب.

Abstract

يهدف هذا البروتوكول إلى إظهار التقنية الجراحية لنقل أجنة الخنازير المستنسخة إلى قناة البيض ، وهي طريقة تستخدم على نطاق واسع في إنتاج الخنازير المعدلة وراثيا للأبحاث الطبية الحيوية. خضعت تسعة ذهبيات للتزامن الهرموني وبضع البطن لنقل الأجنة المستنسخة الناتجة عن النقل النووي للخلايا الجسدية (SCNT) في مراحل تصل إلى 4 خلايا في اليوم 2 إلى قناة البيض. تم إجراء تشخيص الحمل عن طريق الفحص بالموجات فوق الصوتية بعد 30 يوما من جراحة النقل. أظهرت ستة من أصل تسعة مذهبات تم تشغيلها علامات الحمل في الفحص بالموجات فوق الصوتية. ومع ذلك ، نظرا لعدم وجود تقدم في نمو الجنين كما تم تقييمه بواسطة تخطيط صدى الشر ، فقد خضعت الذهبية للتشريح في 60 يوما لجمع المواد البيولوجية وتقييم الجهاز التناسلي. لوحظت التصاقات في قرون الرحم والمبيض وقنوات البيض. من تجويف الرحم لاثنين من الذهبات الرحيم ، تم الحصول على واحد وأربعة هياكل جنينية تتراوح أعمار الحمل بين 12 إلى 20 يوما. على الرغم من عدم وجود خنازير حية ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى انخفاض معدل الكفاءة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة ، والذي يتأثر بعوامل مختلفة ، بما في ذلك عدد ونوعية الأجنة المنقولة ، أثبتت التقنية الجراحية المقدمة أنها سريعة وآمنة.

Introduction

تعتبر الخنازير نموذجا تجريبيا ممتازا للأبحاث الطبية الحيوية نظرا لأوجه التشابه التشريحية والفسيولوجية والوراثية مع البشر1. غالبا ما تم استخدام هذه في الأبحاث المتعلقة بزرع الأعضاء ، بهدف إنتاج أعضاء أو خلايا أو أنسجة تعزز انخفاض خطر الرفض عند زرعها في البشر. تهدف أبحاث زراعة الأعضاء إلى زيادة إمدادات الأعضاء لزراعة الأعضاء البشرية ، وبالتالي تقليل قائمة انتظار المرضى2.

يتضمن إنتاج الخنازير لزرع الأعضاء عدة خطوات ، بما في ذلك إنتاج المستنسخة من خلايا الخنازير المعدلة وراثيا. بعد الإنتاج المختبري للأجنة المستنسخة المعدلة وراثيا ، ي....

Protocol

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات حول استخدام في البحوث التابعة لكلية الطب البيطري وعلوم بجامعة ساو باولو, البروتوكول رقم 6088030523. تم استخدام تسعة مذهبات عمرها سبعة أشهر من تربية الخنازير نواة Água Branca ، الواقعة في مدينة إيتو ، ولاية ساو باولو ، البرازيل ، مباشرة بعد الكشف الثاني عن الشبق9. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. تحضير

  1. قم بصيام لمدة 12 ساعة وتقييد وصول المياه لمدة 4 ساعات قبل العملية الجراحية.
  2. باستخدام إبرة 40 مم × 12 مم، اسحب 10 ملغم/كغ من الكيتامين و0.2 ملغم/....

النتائج

تهدف هذه المقالة إلى توضيح جراحة شق البطن لنقل الأجنة المستنسخة إلى قناة البيض المذهبة. بقيت جميع في مستوى تخدير مناسب ، دون أي حوادث أو مضاعفات أثناء الجراحة أثناء التعافي من التخدير. استغرق الذهب ، في المتوسط ، 2-3 ساعات للوقوف بعد انتهاء الجراحة.

استمرت ج.......

Discussion

تم إجراء الطريقة الجراحية الموصوفة سابقا من قبل مجموعات بحثية أخرى تعمل على إنتاج الخنازير المستنسخة أو الخنازير المستنسخة المعدلة وراثيا ، مع تقارير عن الولادات بعد تنفيذ هذه التقنية15،16،17،18،

Disclosures

لا يكشف أي من المؤلفين عن أي تضارب في المصالح

Acknowledgements

نود أن نشكر مستشفى الخيول البيطري والمستشفى البيطري للحيوانات المجترة التابع لكلية الطب البيطري ، جامعة ساو باولو (FMVZ / USP) ، ساو باولو ، البرازيل ، FAPESP (منحة 2022 / 11459-3 ، مؤسسة ساو باولو للأبحاث) ، EMS Pharma ، CNPq (منحة 405254 / 2022-9) ، و Água Branca لتربية الخنازير ، إيتو ، ساو باولو ، البرازيل.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
0.25 mL strawgeneric-Surgical material
1 mL syringeDescarpack341001Surgical material
10 mL syringeDescarpack324601Surgical material
20 mL syringeDescarpack324801Surgical material
3 mL syringeDescarpack324201Surgical material
5 mL syringeDescarpack324401Surgical material
60 mL syringeDescarpack323201Surgical material
9 mm endotracheal tubeRusch112482-000090Surgical material
Allis forcepsgeneric-Surgical instrument
Amox LAJA Saúde AnimalMAPA registration: 8.781/2004Pharmaceutical drug
Bakhaus forcepsgeneric-Surgical instrument
Catheter 20GDescarpack362401Catheter for intravenous access
CetaminAgener UniãoMAPA registration: SP-000292-5.000011 Anesthetic
Conductive clinical gelRMCANVISA registration: 80122200013Surgical material
Dipyrone D-500ZoetisMAPA registration: SP0000728-46Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22WiltexANVISA registration: 10150470565Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brushRioquimica7.89778E+12Surgical asepsis
Easy-Scan:GoIMVESCG01Ultrasound
Endozime AW PlusRuhof34514Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)CristáliaANVISA registration: 1029800810159Anesthetic
Gosset retractorgeneric-Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forcepsgeneric-Surgical instrument
Healing ointment - Unguento PearsonPearson SAMAPA registration: SP0000094-16Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solutionRioquimicaANVISA registration: 218690015Surgical material
IsofluoraneBiochimicoANVISA registration: 100630222Anesthetic
IV Drip set extensorgeneric-Fluid therapy
IV Macro drip setDescarpack410301Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)Ourofino SAMAPA registration: SP0000051-50Pharmaceutical drug
Laringoscope--Surgical instrument
Maxicam 2%Ourofino SAMAPA registration: SP0000051-69Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm generic1530Surgical material
MidazolamHipolaborANVISA registration: 1134301430035Anesthetic
Multi-Way IV Infusion SetDescarpack413201Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mmDescarpack353601Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mmWiltexANVISA registration: 10150470664Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holdergeneric-Surgical instrument
Nylon 2 suture trheadShalon MedicalN502CTI40Surgical material
Ordinary pengeneric-Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bagJP FarmaMS:1.0491.0070Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture threadAtramatG4099-75HSurgical material
Potassium chlorideSamtecANVISA registration: 1559200010139Parenteral drug
Procedure glovesDescarpack122401Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)União QuímicaANVISA registration: 1049714490057Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bagJP FarmaMS:1.0491.0061Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solutionRioquimica218690356Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactantRioquimica218690356Surgical asepsis
Scalp 21 GDescarpack421201Surgical material
Shoe coversgeneric-Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compressesCremerANVISA registration: 10071150065Surgical material
Sterile gauze padProcitexANVISA registration: 80245210083Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm Venkuri7010003Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm PolarFixF00208Surgical material
Sterile surgical glovesMucamboCA: 39.317Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscopegeneric-Surgical equipment
Surgical capDescarpack93201Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gownDescarpack231101Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical maskDescarpack110701Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-bluntgeneric-Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharpgeneric-Surgical instrument
Surgical staplerTradevet-Surgical material
Tekbond super glueTek Bond78072720030Surgical material
Thermometergeneric-Surgical equipment
Three Way StopcockSolidor374Surgical material
Tramadol hydroclorideAgener UniãoMAPA registration: SP-000292-5.000002Anesthetic
Transparent film dressingSkinupperANVISA registration: 82307460014Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm generic364828Surgical material

References

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved