A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول تطبيق التقنية الجراحية المستخدمة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة عن طريق شق البطن في المذهب.
يهدف هذا البروتوكول إلى إظهار التقنية الجراحية لنقل أجنة الخنازير المستنسخة إلى قناة البيض ، وهي طريقة تستخدم على نطاق واسع في إنتاج الخنازير المعدلة وراثيا للأبحاث الطبية الحيوية. خضعت تسعة ذهبيات للتزامن الهرموني وبضع البطن لنقل الأجنة المستنسخة الناتجة عن النقل النووي للخلايا الجسدية (SCNT) في مراحل تصل إلى 4 خلايا في اليوم 2 إلى قناة البيض. تم إجراء تشخيص الحمل عن طريق الفحص بالموجات فوق الصوتية بعد 30 يوما من جراحة النقل. أظهرت ستة من أصل تسعة مذهبات تم تشغيلها علامات الحمل في الفحص بالموجات فوق الصوتية. ومع ذلك ، نظرا لعدم وجود تقدم في نمو الجنين كما تم تقييمه بواسطة تخطيط صدى الشر ، فقد خضعت الذهبية للتشريح في 60 يوما لجمع المواد البيولوجية وتقييم الجهاز التناسلي. لوحظت التصاقات في قرون الرحم والمبيض وقنوات البيض. من تجويف الرحم لاثنين من الذهبات الرحيم ، تم الحصول على واحد وأربعة هياكل جنينية تتراوح أعمار الحمل بين 12 إلى 20 يوما. على الرغم من عدم وجود خنازير حية ، ويرجع ذلك على الأرجح إلى انخفاض معدل الكفاءة لنقل أجنة الخنازير المستنسخة ، والذي يتأثر بعوامل مختلفة ، بما في ذلك عدد ونوعية الأجنة المنقولة ، أثبتت التقنية الجراحية المقدمة أنها سريعة وآمنة.
تعتبر الخنازير نموذجا تجريبيا ممتازا للأبحاث الطبية الحيوية نظرا لأوجه التشابه التشريحية والفسيولوجية والوراثية مع البشر1. غالبا ما تم استخدام هذه في الأبحاث المتعلقة بزرع الأعضاء ، بهدف إنتاج أعضاء أو خلايا أو أنسجة تعزز انخفاض خطر الرفض عند زرعها في البشر. تهدف أبحاث زراعة الأعضاء إلى زيادة إمدادات الأعضاء لزراعة الأعضاء البشرية ، وبالتالي تقليل قائمة انتظار المرضى2.
يتضمن إنتاج الخنازير لزرع الأعضاء عدة خطوات ، بما في ذلك إنتاج المستنسخة من خلايا الخنازير المعدلة وراثيا. بعد الإنتاج المختبري للأجنة المستنسخة المعدلة وراثيا ، ي....
تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات حول استخدام في البحوث التابعة لكلية الطب البيطري وعلوم بجامعة ساو باولو, البروتوكول رقم 6088030523. تم استخدام تسعة مذهبات عمرها سبعة أشهر من تربية الخنازير نواة Água Branca ، الواقعة في مدينة إيتو ، ولاية ساو باولو ، البرازيل ، مباشرة بعد الكشف الثاني عن الشبق9. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. تحضير
تهدف هذه المقالة إلى توضيح جراحة شق البطن لنقل الأجنة المستنسخة إلى قناة البيض المذهبة. بقيت جميع في مستوى تخدير مناسب ، دون أي حوادث أو مضاعفات أثناء الجراحة أثناء التعافي من التخدير. استغرق الذهب ، في المتوسط ، 2-3 ساعات للوقوف بعد انتهاء الجراحة.
استمرت ج.......
تم إجراء الطريقة الجراحية الموصوفة سابقا من قبل مجموعات بحثية أخرى تعمل على إنتاج الخنازير المستنسخة أو الخنازير المستنسخة المعدلة وراثيا ، مع تقارير عن الولادات بعد تنفيذ هذه التقنية15،16،17،18،
لا يكشف أي من المؤلفين عن أي تضارب في المصالح
نود أن نشكر مستشفى الخيول البيطري والمستشفى البيطري للحيوانات المجترة التابع لكلية الطب البيطري ، جامعة ساو باولو (FMVZ / USP) ، ساو باولو ، البرازيل ، FAPESP (منحة 2022 / 11459-3 ، مؤسسة ساو باولو للأبحاث) ، EMS Pharma ، CNPq (منحة 405254 / 2022-9) ، و Água Branca لتربية الخنازير ، إيتو ، ساو باولو ، البرازيل.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
0.25 mL straw | generic | - | Surgical material |
1 mL syringe | Descarpack | 341001 | Surgical material |
10 mL syringe | Descarpack | 324601 | Surgical material |
20 mL syringe | Descarpack | 324801 | Surgical material |
3 mL syringe | Descarpack | 324201 | Surgical material |
5 mL syringe | Descarpack | 324401 | Surgical material |
60 mL syringe | Descarpack | 323201 | Surgical material |
9 mm endotracheal tube | Rusch | 112482-000090 | Surgical material |
Allis forceps | generic | - | Surgical instrument |
Amox LA | JA Saúde Animal | MAPA registration: 8.781/2004 | Pharmaceutical drug |
Bakhaus forceps | generic | - | Surgical instrument |
Catheter 20G | Descarpack | 362401 | Catheter for intravenous access |
Cetamin | Agener União | MAPA registration: SP-000292-5.000011 | Anesthetic |
Conductive clinical gel | RMC | ANVISA registration: 80122200013 | Surgical material |
Dipyrone D-500 | Zoetis | MAPA registration: SP0000728-46 | Pharmaceutical drug |
Disposable scalpel n. 22 | Wiltex | ANVISA registration: 10150470565 | Surgical instrument |
Disposable sterile sponge-brush | Rioquimica | 7.89778E+12 | Surgical asepsis |
Easy-Scan:Go | IMV | ESCG01 | Ultrasound |
Endozime AW Plus | Ruhof | 34514 | Detergent for surgical instruments |
Fentanil (Fentanest) | Cristália | ANVISA registration: 1029800810159 | Anesthetic |
Gosset retractor | generic | - | Surgical instrument |
Halstead-mosquito hemostatic forceps | generic | - | Surgical instrument |
Healing ointment - Unguento Pearson | Pearson SA | MAPA registration: SP0000094-16 | Pharmaceutical drug |
hydrogen peroxide solution | Rioquimica | ANVISA registration: 218690015 | Surgical material |
Isofluorane | Biochimico | ANVISA registration: 100630222 | Anesthetic |
IV Drip set extensor | generic | - | Fluid therapy |
IV Macro drip set | Descarpack | 410301 | Fluid therapy |
Lactofur (ceftiofur) | Ourofino SA | MAPA registration: SP0000051-50 | Pharmaceutical drug |
Laringoscope | - | - | Surgical instrument |
Maxicam 2% | Ourofino SA | MAPA registration: SP0000051-69 | Pharmaceutical drug |
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm | generic | 1530 | Surgical material |
Midazolam | Hipolabor | ANVISA registration: 1134301430035 | Anesthetic |
Multi-Way IV Infusion Set | Descarpack | 413201 | Fluid therapy |
Needle 40 mm x 1.2 mm | Descarpack | 353601 | Sterile needle for applying medicines and anesthetics. |
Needle 40 mm x 1.6 mm | Wiltex | ANVISA registration: 10150470664 | Sterile needle for applying medicines and anesthetics. |
Needle holder | generic | - | Surgical instrument |
Nylon 2 suture trhead | Shalon Medical | N502CTI40 | Surgical material |
Ordinary pen | generic | - | Regular pen for taking notes |
Physiological solution 0.9% 500 mL bag | JP Farma | MS:1.0491.0070 | Fluid therapy |
Polyglycolic acid 2 suture thread | Atramat | G4099-75H | Surgical material |
Potassium chloride | Samtec | ANVISA registration: 1559200010139 | Parenteral drug |
Procedure gloves | Descarpack | 122401 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Propofol (Provive) | União Química | ANVISA registration: 1049714490057 | Anesthetic |
Ringer lactate solution 500 mL bag | JP Farma | MS:1.0491.0061 | Fluid therapy |
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution | Rioquimica | 218690356 | Surgical asepsis |
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant | Rioquimica | 218690356 | Surgical asepsis |
Scalp 21 G | Descarpack | 421201 | Surgical material |
Shoe covers | generic | - | Personal Protective Equipment (PPE) |
Sterile compresses | Cremer | ANVISA registration: 10071150065 | Surgical material |
Sterile gauze pad | Procitex | ANVISA registration: 80245210083 | Surgical material |
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm | Venkuri | 7010003 | Surgical material |
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm | PolarFix | F00208 | Surgical material |
Sterile surgical gloves | Mucambo | CA: 39.317 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Stethoscope | generic | - | Surgical equipment |
Surgical cap | Descarpack | 93201 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Surgical gown | Descarpack | 231101 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Surgical mask | Descarpack | 110701 | Personal Protective Equipment (PPE) |
Surgical scissors blunt-blunt | generic | - | Surgical instrument |
Surgical scissors sharp-sharp | generic | - | Surgical instrument |
Surgical stapler | Tradevet | - | Surgical material |
Tekbond super glue | Tek Bond | 78072720030 | Surgical material |
Thermometer | generic | - | Surgical equipment |
Three Way Stopcock | Solidor | 374 | Surgical material |
Tramadol hydrocloride | Agener União | MAPA registration: SP-000292-5.000002 | Anesthetic |
Transparent film dressing | Skinupper | ANVISA registration: 82307460014 | Surgical material |
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm | generic | 364828 | Surgical material |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved