Операция по переносу эмбрионов с помощью лапаротомии у свинок

Резюме

В этом протоколе описывается применение хирургической техники, используемой для переноса клонированных эмбрионов свиней с помощью лапаротомии у свинок.

Аннотация

Этот протокол направлен на демонстрацию хирургической техники переноса клонированных эмбрионов свиньи в яйцевод, метода, широко используемого в производстве генетически модифицированных свиней для биомедицинских исследований. Девяти свинкам была проведена гормональная синхронизация и лапаротомия для переноса клонированных эмбрионов, полученных путем переноса ядра соматических клеток (SCNT) на стадии до 4 клеток на 2-й день в яйцевод. Гестационная диагностика проводилась с помощью ультразвукового исследования через 30 дней после операции. У шести из девяти оперированных свинок при ультразвуковом исследовании были обнаружены признаки беременности. Однако, поскольку не было никакого прогресса в развитии плода, оцененного с помощью эхографии, свинкам было проведено вскрытие через 60 дней для сбора биологического материала и оценки репродуктивной системы. Спайки наблюдались в рогах матки, яичниках и яйцеводах. Из просвета матки двух усыпленных свинок были получены одна и четыре эмбриональные структуры с гестационным возрастом от 12 до 20 дней. Несмотря на отсутствие живых поросят, вероятно, объясняющееся низкой эффективностью переноса клонированных эмбрионов свиней, на которую влияют различные факторы, в том числе количество и качество переносимых эмбрионов, представленная хирургическая методика оказалась быстрой и безопасной.

Введение

Свиньи являются отличной экспериментальной моделью для биомедицинских исследований из-за их анатомического, физиологического и генетического сходства^{с человеком.} Эти животные часто использовались в исследованиях, связанных с ксенотрансплантацией, с целью получения органов, клеток или тканей, которые способствуют низкому риску отторжения при трансплантации человеку. Исследования в области ксенотрансплантации направлены на увеличение поставок органов для трансплантации человеку, тем самым сокращая лист ожидания пациентов².

Производство свин....

протокол

Данное исследование было одобрено Этическим комитетом по использованию животных в научных исследованиях Колледжа ветеринарной медицины и зоотехнии Университета Сан-Паулу, протокол No 6088030523. Девять семимесячных свинок из свинофермы Água Branca, расположенной в городе Иту, штат Сан-Паулу, Бразилия, были использованы сразу после обнаружения второй течки⁹. Подробная информация о реагентах и оборудовании, использованном в исследовании, приведена в Таблице материалов.

1. Подготовка животных

1. Голодайте животных в течение 12 часов и ограничьте ....

Результаты

Целью данной статьи является демонстрация лапаротомической операции по переносу клонированных эмбрионов в яйцевод свинок. Все животные оставались в адекватной анестезиологической плоскости, без каких-либо интраоперационных инцидентов и осложнений во время восста.......

Обсуждение

Описанный хирургический метод ранее был выполнен другими исследовательскими группами, работающими с производством клонированных свиней или генетически модифицированных клонированных свиней, с сообщениями о рождении после внедрения этой методики 15,16,1.......

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25 mL straw	generic	-	Surgical material
1 mL syringe	Descarpack	341001	Surgical material
10 mL syringe	Descarpack	324601	Surgical material
20 mL syringe	Descarpack	324801	Surgical material
3 mL syringe	Descarpack	324201	Surgical material
5 mL syringe	Descarpack	324401	Surgical material
60 mL syringe	Descarpack	323201	Surgical material
9 mm endotracheal tube	Rusch	112482-000090	Surgical material
Allis forceps	generic	-	Surgical instrument
Amox LA	JA Saúde Animal	MAPA registration: 8.781/2004	Pharmaceutical drug
Bakhaus forceps	generic	-	Surgical instrument
Catheter 20G	Descarpack	362401	Catheter for intravenous access
Cetamin	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000011	Anesthetic
Conductive clinical gel	RMC	ANVISA registration: 80122200013	Surgical material
Dipyrone D-500	Zoetis	MAPA registration: SP0000728-46	Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22	Wiltex	ANVISA registration: 10150470565	Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brush	Rioquimica	7.89778E+12	Surgical asepsis
Easy-Scan:Go	IMV	ESCG01	Ultrasound
Endozime AW Plus	Ruhof	34514	Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)	Cristália	ANVISA registration: 1029800810159	Anesthetic
Gosset retractor	generic	-	Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forceps	generic	-	Surgical instrument
Healing ointment - Unguento Pearson	Pearson SA	MAPA registration: SP0000094-16	Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solution	Rioquimica	ANVISA registration: 218690015	Surgical material
Isofluorane	Biochimico	ANVISA registration: 100630222	Anesthetic
IV Drip set extensor	generic	-	Fluid therapy
IV Macro drip set	Descarpack	410301	Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-50	Pharmaceutical drug
Laringoscope	-	-	Surgical instrument
Maxicam 2%	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-69	Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm	generic	1530	Surgical material
Midazolam	Hipolabor	ANVISA registration: 1134301430035	Anesthetic
Multi-Way IV Infusion Set	Descarpack	413201	Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mm	Descarpack	353601	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mm	Wiltex	ANVISA registration: 10150470664	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holder	generic	-	Surgical instrument
Nylon 2 suture trhead	Shalon Medical	N502CTI40	Surgical material
Ordinary pen	generic	-	Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0070	Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture thread	Atramat	G4099-75H	Surgical material
Potassium chloride	Samtec	ANVISA registration: 1559200010139	Parenteral drug
Procedure gloves	Descarpack	122401	Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)	União Química	ANVISA registration: 1049714490057	Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0061	Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Scalp 21 G	Descarpack	421201	Surgical material
Shoe covers	generic	-	Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compresses	Cremer	ANVISA registration: 10071150065	Surgical material
Sterile gauze pad	Procitex	ANVISA registration: 80245210083	Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm	Venkuri	7010003	Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm	PolarFix	F00208	Surgical material
Sterile surgical gloves	Mucambo	CA: 39.317	Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscope	generic	-	Surgical equipment
Surgical cap	Descarpack	93201	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gown	Descarpack	231101	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical mask	Descarpack	110701	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-blunt	generic	-	Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharp	generic	-	Surgical instrument
Surgical stapler	Tradevet	-	Surgical material
Tekbond super glue	Tek Bond	78072720030	Surgical material
Thermometer	generic	-	Surgical equipment
Three Way Stopcock	Solidor	374	Surgical material
Tramadol hydrocloride	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000002	Anesthetic
Transparent film dressing	Skinupper	ANVISA registration: 82307460014	Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm	generic	364828	Surgical material