Cirurgia de transferência de embriões por laparotomia em leitoas

Resumo

Este protocolo descreve a aplicação da técnica cirúrgica utilizada para transferência de embriões clonados de suínos via laparotomia em leitoas.

Resumo

Este protocolo tem como objetivo demonstrar a técnica cirúrgica de transferência de embriões de suínos clonados para o oviduto, método amplamente utilizado na produção de suínos geneticamente modificados para pesquisa biomédica. Nove leitoas foram submetidas à sincronização hormonal e laparotomia para transferência de embriões clonados produzidos por transferência nuclear de células somáticas (SCNT) em estágios de até 4 células no dia 2 para o oviduto. O diagnóstico gestacional foi realizado por meio de exame ultrassonográfico 30 dias após a cirurgia de transferência. Seis das nove leitoas operadas exibiram sinais de gravidez no exame de ultrassom. No entanto, como não houve progressão no desenvolvimento fetal avaliado pela ecografia, as leitoas foram submetidas à necropsia aos 60 dias para coleta de material biológico e avaliação do sistema reprodutivo. Aderências foram observadas nos cornos uterinos, ovários e ovidutos. A partir do lúmen uterino de duas das leitoas eutanasiadas, foram obtidas uma e quatro estruturas embrionárias com idades gestacionais variando entre 12 a 20 dias. Apesar da ausência de leitões vivos, provavelmente atribuída à baixa taxa de eficiência de transferência de embriões clonados de suínos, que é influenciada por vários fatores, incluindo o número e a qualidade dos embriões transferidos, a técnica cirúrgica apresentada mostrou-se rápida e segura.

Introdução

Os porcos são um excelente modelo experimental para pesquisa biomédica devido às suas semelhanças anatômicas, fisiológicas e genéticas com os humanos¹. Esses animais têm sido frequentemente utilizados em pesquisas relacionadas ao xenotransplante, com a intenção de produzir órgãos, células ou tecidos que promovam um baixo risco de rejeição quando transplantados para humanos. A pesquisa em xenotransplante visa aumentar a oferta de órgãos para transplante humano, reduzindo assim a lista de espera de pacientes².

A produção de suínos para xeno....

Protocolo

Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais em Pesquisa da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, protocolo número 6088030523. Foram utilizadas nove leitoas de sete meses de idade da suinocultura do núcleo Água Branca, localizada na cidade de Itu, estado de São Paulo, Brasil, logo após a detecção do segundo estro⁹. Os detalhes dos reagentes e do equipamento utilizado no estudo estão listados na Tabela de Materiais.

1. Preparação animal

1. Jejuar os animais por 12 h e restringir o acesso ....

Discussão

O método cirúrgico descrito já foi realizado anteriormente por outros grupos de pesquisa que trabalham com a produção de suínos clonados ou suínos clonados geneticamente modificados, com relatos de nascimentos após a implementação dessa técnica 15,16,17,18,19,20. As taxas de gravid.......

Materiais

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25 mL straw	generic	-	Surgical material
1 mL syringe	Descarpack	341001	Surgical material
10 mL syringe	Descarpack	324601	Surgical material
20 mL syringe	Descarpack	324801	Surgical material
3 mL syringe	Descarpack	324201	Surgical material
5 mL syringe	Descarpack	324401	Surgical material
60 mL syringe	Descarpack	323201	Surgical material
9 mm endotracheal tube	Rusch	112482-000090	Surgical material
Allis forceps	generic	-	Surgical instrument
Amox LA	JA Saúde Animal	MAPA registration: 8.781/2004	Pharmaceutical drug
Bakhaus forceps	generic	-	Surgical instrument
Catheter 20G	Descarpack	362401	Catheter for intravenous access
Cetamin	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000011	Anesthetic
Conductive clinical gel	RMC	ANVISA registration: 80122200013	Surgical material
Dipyrone D-500	Zoetis	MAPA registration: SP0000728-46	Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22	Wiltex	ANVISA registration: 10150470565	Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brush	Rioquimica	7.89778E+12	Surgical asepsis
Easy-Scan:Go	IMV	ESCG01	Ultrasound
Endozime AW Plus	Ruhof	34514	Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)	Cristália	ANVISA registration: 1029800810159	Anesthetic
Gosset retractor	generic	-	Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forceps	generic	-	Surgical instrument
Healing ointment - Unguento Pearson	Pearson SA	MAPA registration: SP0000094-16	Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solution	Rioquimica	ANVISA registration: 218690015	Surgical material
Isofluorane	Biochimico	ANVISA registration: 100630222	Anesthetic
IV Drip set extensor	generic	-	Fluid therapy
IV Macro drip set	Descarpack	410301	Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-50	Pharmaceutical drug
Laringoscope	-	-	Surgical instrument
Maxicam 2%	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-69	Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm	generic	1530	Surgical material
Midazolam	Hipolabor	ANVISA registration: 1134301430035	Anesthetic
Multi-Way IV Infusion Set	Descarpack	413201	Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mm	Descarpack	353601	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mm	Wiltex	ANVISA registration: 10150470664	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holder	generic	-	Surgical instrument
Nylon 2 suture trhead	Shalon Medical	N502CTI40	Surgical material
Ordinary pen	generic	-	Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0070	Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture thread	Atramat	G4099-75H	Surgical material
Potassium chloride	Samtec	ANVISA registration: 1559200010139	Parenteral drug
Procedure gloves	Descarpack	122401	Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)	União Química	ANVISA registration: 1049714490057	Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0061	Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Scalp 21 G	Descarpack	421201	Surgical material
Shoe covers	generic	-	Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compresses	Cremer	ANVISA registration: 10071150065	Surgical material
Sterile gauze pad	Procitex	ANVISA registration: 80245210083	Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm	Venkuri	7010003	Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm	PolarFix	F00208	Surgical material
Sterile surgical gloves	Mucambo	CA: 39.317	Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscope	generic	-	Surgical equipment
Surgical cap	Descarpack	93201	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gown	Descarpack	231101	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical mask	Descarpack	110701	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-blunt	generic	-	Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharp	generic	-	Surgical instrument
Surgical stapler	Tradevet	-	Surgical material
Tekbond super glue	Tek Bond	78072720030	Surgical material
Thermometer	generic	-	Surgical equipment
Three Way Stopcock	Solidor	374	Surgical material
Tramadol hydrocloride	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000002	Anesthetic
Transparent film dressing	Skinupper	ANVISA registration: 82307460014	Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm	generic	364828	Surgical material