Gilts'te Laparotomi ile Embriyo Transferi Ameliyatı

Özet

Bu protokol, klonlanmış domuz embriyolarını solungaçlar halinde laparotomi yoluyla transfer etmek için kullanılan cerrahi tekniğin uygulanmasını açıklar.

Özet

Bu protokol, biyomedikal araştırmalar için genetiği değiştirilmiş domuzların üretiminde yaygın olarak kullanılan bir yöntem olan klonlanmış domuz embriyolarının yumurta kanalına aktarılması için cerrahi tekniği göstermeyi amaçlamaktadır. Somatik hücre nükleer transferi (SCNT) ile üretilen klonlanmış embriyoların 2. günde 4 hücreye kadar olan aşamalarda yumurta kanalına transferi için dokuz solungaça hormonal senkronizasyon ve laparotomi uygulandı. Gebelik tanısı transplantasyon ameliyatından 30 gün sonra ultrason muayenesi ile konuldu. Ameliyat edilen dokuz yaldızdan altısı ultrason muayenesinde hamilelik belirtileri gösterdi. Bununla birlikte, ekografi ile değerlendirildiği gibi fetal gelişimde herhangi bir ilerleme olmadığından, biyolojik materyalin toplanması ve üreme sisteminin değerlendirilmesi için solungaçlara 60. günde nekropsi yapıldı. Rahim boynuzlarında, yumurtalıklarda ve yumurta kanallarında yapışıklıklar gözlendi. Ötenazi yapılan solungaçların ikisinin uterus lümeninden, gebelik yaşları 12 ila 20 gün arasında değişen bir ve dört embriyonik yapı elde edildi. Muhtemelen transfer edilen embriyoların sayısı ve kalitesi de dahil olmak üzere çeşitli faktörlerden etkilenen klonlanmış domuz embriyolarının transferinin düşük verimlilik oranına atfedilen canlı domuz yavrularının olmamasına rağmen, sunulan cerrahi tekniğin hızlı ve güvenli olduğu kanıtlanmıştır.

Giriş

Domuzlar, insanlara anatomik, fizyolojik ve genetik benzerlikleri nedeniyle biyomedikal araştırmalar için mükemmel bir deneysel modeldir¹. Bu hayvanlar, insanlara nakledildiğinde düşük reddedilme riskini destekleyen organlar, hücreler veya dokular üretmek amacıyla ksenotransplantasyon ile ilgili araştırmalarda sıklıkla kullanılmıştır. Ksenotransplantasyon araştırması, insan nakli için organ arzını artırmayı ve böylece hastaların bekleme listesini azaltmayı amaçlamaktadır².

Ksenotransplantasyon için domuz üretimi, genetik olarak düzenlenmi....

Protokol

Bu çalışma, São Paulo Üniversitesi Veterinerlik ve Hayvan Bilimleri Fakültesi Araştırmalarında Hayvan Kullanımı Etik Kurulu, 6088030523 numaralı protokol tarafından onaylanmıştır. Brezilya'nın São Paulo eyaleti, Itu şehrinde bulunan Água Branca çekirdek domuz çiftliğinden dokuz yedi aylık yaldız, ikinci kızgınlık tespitinden hemen sonra^{kullanıldı 9}. Çalışmada kullanılan reaktiflerin ve ekipmanların detayları Malzeme Tablosunda listelenmiştir.

1. Hayvan hazırlama

1. Cerrahi işlemden önce hayvanları 12 saat aç bırakın ve su erişimini 4 saat kısı....

Tartışmalar

Tarif edilen cerrahi yöntem daha önce klonlanmış domuzların veya genetiği değiştirilmiş klonlanmış domuzların üretimi ile çalışan diğer araştırma grupları tarafından gerçekleştirilmiştir ve bu tekniğin uygulanmasından sonraki doğum raporları 15,16,17,18,19,20. Çe?.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
0.25 mL straw	generic	-	Surgical material
1 mL syringe	Descarpack	341001	Surgical material
10 mL syringe	Descarpack	324601	Surgical material
20 mL syringe	Descarpack	324801	Surgical material
3 mL syringe	Descarpack	324201	Surgical material
5 mL syringe	Descarpack	324401	Surgical material
60 mL syringe	Descarpack	323201	Surgical material
9 mm endotracheal tube	Rusch	112482-000090	Surgical material
Allis forceps	generic	-	Surgical instrument
Amox LA	JA Saúde Animal	MAPA registration: 8.781/2004	Pharmaceutical drug
Bakhaus forceps	generic	-	Surgical instrument
Catheter 20G	Descarpack	362401	Catheter for intravenous access
Cetamin	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000011	Anesthetic
Conductive clinical gel	RMC	ANVISA registration: 80122200013	Surgical material
Dipyrone D-500	Zoetis	MAPA registration: SP0000728-46	Pharmaceutical drug
Disposable scalpel n. 22	Wiltex	ANVISA registration: 10150470565	Surgical instrument
Disposable sterile sponge-brush	Rioquimica	7.89778E+12	Surgical asepsis
Easy-Scan:Go	IMV	ESCG01	Ultrasound
Endozime AW Plus	Ruhof	34514	Detergent for surgical instruments
Fentanil (Fentanest)	Cristália	ANVISA registration: 1029800810159	Anesthetic
Gosset retractor	generic	-	Surgical instrument
Halstead-mosquito hemostatic forceps	generic	-	Surgical instrument
Healing ointment - Unguento Pearson	Pearson SA	MAPA registration: SP0000094-16	Pharmaceutical drug
hydrogen peroxide solution	Rioquimica	ANVISA registration: 218690015	Surgical material
Isofluorane	Biochimico	ANVISA registration: 100630222	Anesthetic
IV Drip set extensor	generic	-	Fluid therapy
IV Macro drip set	Descarpack	410301	Fluid therapy
Lactofur (ceftiofur)	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-50	Pharmaceutical drug
Laringoscope	-	-	Surgical instrument
Maxicam 2%	Ourofino SA	MAPA registration: SP0000051-69	Pharmaceutical drug
Micropore adhesive 5 cm x 10 cm	generic	1530	Surgical material
Midazolam	Hipolabor	ANVISA registration: 1134301430035	Anesthetic
Multi-Way IV Infusion Set	Descarpack	413201	Fluid therapy
Needle 40 mm x 1.2 mm	Descarpack	353601	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle 40 mm x 1.6 mm	Wiltex	ANVISA registration: 10150470664	Sterile needle for applying medicines and anesthetics.
Needle holder	generic	-	Surgical instrument
Nylon 2 suture trhead	Shalon Medical	N502CTI40	Surgical material
Ordinary pen	generic	-	Regular pen for taking notes
Physiological solution 0.9% 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0070	Fluid therapy
Polyglycolic acid 2 suture thread	Atramat	G4099-75H	Surgical material
Potassium chloride	Samtec	ANVISA registration: 1559200010139	Parenteral drug
Procedure gloves	Descarpack	122401	Personal Protective Equipment (PPE)
Propofol (Provive)	União Química	ANVISA registration: 1049714490057	Anesthetic
Ringer lactate solution 500 mL bag	JP Farma	MS:1.0491.0061	Fluid therapy
Riohex 0.5% clorexidine alcohol solution	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Riohex 2% clorexidine solution with surfactant	Rioquimica	218690356	Surgical asepsis
Scalp 21 G	Descarpack	421201	Surgical material
Shoe covers	generic	-	Personal Protective Equipment (PPE)
Sterile compresses	Cremer	ANVISA registration: 10071150065	Surgical material
Sterile gauze pad	Procitex	ANVISA registration: 80245210083	Surgical material
Sterile surgical drapes 140 cm x 90 cm	Venkuri	7010003	Surgical material
Sterile surgical drapes 150 cm x 190 cm	PolarFix	F00208	Surgical material
Sterile surgical gloves	Mucambo	CA: 39.317	Personal Protective Equipment (PPE)
Stethoscope	generic	-	Surgical equipment
Surgical cap	Descarpack	93201	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical gown	Descarpack	231101	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical mask	Descarpack	110701	Personal Protective Equipment (PPE)
Surgical scissors blunt-blunt	generic	-	Surgical instrument
Surgical scissors sharp-sharp	generic	-	Surgical instrument
Surgical stapler	Tradevet	-	Surgical material
Tekbond super glue	Tek Bond	78072720030	Surgical material
Thermometer	generic	-	Surgical equipment
Three Way Stopcock	Solidor	374	Surgical material
Tramadol hydrocloride	Agener União	MAPA registration: SP-000292-5.000002	Anesthetic
Transparent film dressing	Skinupper	ANVISA registration: 82307460014	Surgical material
Waterproof adhesive 10 cm x 4.5 cm	generic	364828	Surgical material