A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
تقدم هذه الدراسة طريقة رائدة لقياس المجموعات الفرعية للخلايا القاتلة الطبيعية للرحم أثناء فترة الزرع باستخدام تقنيات تلطيخ كيميائية مناعية فلورية متقدمة متعددة الإرسال.
تلعب الكيمياء المناعية (IHC) دورا مهما في البحث البيولوجي والتشخيص السريري ، حيث تعمل كالطريقة الأكثر استخداما لتحديد مستضدات الأنسجة وتصورها. ومع ذلك ، فإن طرق تلطيخ IHC التقليدية لها قيود في التمييز بين الأنواع الفرعية المختلفة من الخلايا المناعية. دفع هذا التحدي العلماء إلى استكشاف تقنيات ومنهجيات جديدة للتحديد الدقيق والتمييز الدقيق للأنواع الفرعية للخلايا المناعية. في السنوات الأخيرة ، ظهر تعدد الإرسال IHC كحل ، مما يتيح الكشف المتزامن عن مستضدات متعددة وتصورها داخل نفس عينة الأنسجة. تلعب الخلايا القاتلة الطبيعية للرحم (uNK) دورا محوريا في عمليات الحمل المبكرة ، بما في ذلك إزالة الولادة ، وإعادة تشكيل الشرايين الحلزونية الرحمية ، وزرع الأجنة. تظهر أنواع فرعية مختلفة من خلايا uNK وظائف مختلفة ، مما يسمح لها بتنسيق الأحداث البيولوجية المختلفة لنمو الجنين الناجح والحمل. لذلك ، يعد البحث المتعمق حول الأنواع الفرعية لخلايا uNK ضروريا لتوضيح آليات تنظيم المناعة أثناء الحمل. توفر هذه الدراسات رؤى قيمة ومناهج جديدة لمعالجة الحالات ذات الصلة مثل العقم والفشل الإنجابي المتكرر. تقدم هذه الورقة بروتوكول تلطيخ IHC متعدد الإرسال مفصل لدراسة كثافة أربعة أنواع فرعية من خلايا uNK في عينات بطانة الرحم أثناء نافذة الزرع (WOI). يتضمن البروتوكول إعداد العينة ، وتحسين علامات النوع الفرعي ، والتصوير المجهري ، وتحليلات البيانات. يوفر بروتوكول تلطيخ IHC متعدد الإرسال هذا خصوصية وحساسية عالية ، مما يتيح الكشف المتزامن عن أنواع فرعية مختلفة من خلايا uNK ، وبالتالي تزويد الباحثين بأداة قوية لاستكشاف تعقيدات وآليات تنظيم المناعة أثناء الحمل.
تم الإبلاغ عن أول ولادة حية موثقة بعد الإخصاب في المختبر ونقل الأجنة (IVF-ET) في عام 1978. على مدار الأربعين عاما الماضية ، كان هناك طلب كبير على مساعدة أطفال الأنابيب بين الأزواج المصابين بالعقم1. في عام 2021 ، بدأ 238,126 مريضا ما مجموعه 413,776 دورة أطفال الأنابيب في الولايات المتحدة. هذا يمثل زيادة بنسبة 25٪ في الدورات عن عامين سابقين وزيادة بنسبة 135٪ عن عام 20122. وتعزى هذه الزيادة بشكل أساسي إلى ارتفاع معدل انتشار العقم وتأخر التخطيط للحمل. أدت التطورات في تقنيات زراعة الأجنة وبروتوكولات الإباضة الزائدة إلى زيادة معدل المواليد الأحياء لكل دورة ET ، حيث وصلت إلى 30٪ -50٪ ف....
تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات البحث السريري العنقودي الشرقي المشتركة بين الجامعة الصينية في هونغ كونغ والأقاليم الجديدة (رقم مرجع CREC: 2022.581). تم تعيين النساء المصابات ب RIF من مركز تكنولوجيا المساعدة على الإنجاب ، مستشفى أمير ويلز ، جامعة هونغ كونغ الصينية. تم تعريف RIF على أنه الفشل في تحقيق الحمل السريري بعد نقل ما لا يقل عن 4 أجنة ذات نوعية جيدة في 3 دورات جديدة أو مجمدة على الأقل في امرأة تقل أعمارها عن 40 عاماو 10 سنوات. تم الحصول على موافقة مستنيرة من المشاركين قبل جمع خزعات بطانة الرحم.
1. الحصول على عينات بطانة الرحم ومعالجتها
للحفاظ على الاتساق في توقيت جمع عينات بطانة الرحم للنساء اللواتي يخضعن للدورة الطبيعية ، تم إجراء اختبار بول للكشف بدقة عن زيادة الهرمون اللوتيني (LH) ، مع إجراء خزعات بطانة الرحم بعد 7 أيام من زيادة الهرمون اللوتيني (LH). بالنسبة للنساء اللواتي يخضعن لدورات العلاج التعويضي.......
ينطوي زرع الجنين على تفاعل معقد بين الجنين وبطانة الرحم. تلعب الحالة المناعية لتوازن بطانة الرحم دورا محوريا في تحديد تقبل بطانة الرحم. خلال WOI ، تكون مجموعة الكريات البيض السائدة في بطانة الرحم هي الخلايا القاتلة الطبيعية. ما يقرب من 90٪ من خلايا uNK تظهر تعبيرا عاليا عن CD56.......
ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح للإفصاح عنه.
تم دعم هذه الدراسة من قبل صندوق البحوث الصحية والطبية (10210956).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
CD49a | Novus Biologicals | NBP2-76478 | Primary antibodies |
CD56 | Leica | NCL-L-CD56-504 | Primary antibodies |
CD16 | abcam | ab183354 | Primary antibodies |
CXCR4 | R&D | MAB172 | Primary antibodies |
Amplification diluent | Akoya Biosciences | FP1498 series | Fluorophore dilution buffer |
Antibody diluents | Akoya Biosciences | ARD1001EA | Dilute the antibody |
Citrate buffered solution, pH 6.0 /9.0(10x) | Akoya Biosciences | A6001/A9001 | Antigen retrieval solution |
inForm advanced image analysis software | Akoya Biosciences | inForm Tissue Finder Software 2.2.6 | Data analysis software |
Mantra Workstations | Akoya Biosciences | CLS140089 | Spectral imaging |
microwave | Akoya Biosciences | inverter | Microwave stripping |
TSA 520 | Akoya Biosciences | FP1487001K | Suitable tyramide-based fluorescent reagents |
TSA 620 | Akoya Biosciences | FP1495001K | Suitable tyramide-based fluorescent reagents |
TSA 650 | Akoya Biosciences | FP1496001K | Suitable tyramide-based fluorescent reagents |
TSA 570 | Akoya Biosciences | FP1488001K | Suitable tyramide-based fluorescent reagents |
Poly-L-lysine coated slides | Fisher Technologies | 120-550-15 | Slides for routine histological use |
PolyHRP Broad Spectrum | Perkin Elmer | ARH1001EA | Secondary antibodies |
Invitrogen™ Fluoromount-G™ Mounting Medium | ThemoFisher Science | 495802 | Installation |
Spectral DAPI | Akoya Biosciences | FP1490A | Nucleic acid staining |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved