A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

تقدم هذه الدراسة طريقة رائدة لقياس المجموعات الفرعية للخلايا القاتلة الطبيعية للرحم أثناء فترة الزرع باستخدام تقنيات تلطيخ كيميائية مناعية فلورية متقدمة متعددة الإرسال.

Abstract

تلعب الكيمياء المناعية (IHC) دورا مهما في البحث البيولوجي والتشخيص السريري ، حيث تعمل كالطريقة الأكثر استخداما لتحديد مستضدات الأنسجة وتصورها. ومع ذلك ، فإن طرق تلطيخ IHC التقليدية لها قيود في التمييز بين الأنواع الفرعية المختلفة من الخلايا المناعية. دفع هذا التحدي العلماء إلى استكشاف تقنيات ومنهجيات جديدة للتحديد الدقيق والتمييز الدقيق للأنواع الفرعية للخلايا المناعية. في السنوات الأخيرة ، ظهر تعدد الإرسال IHC كحل ، مما يتيح الكشف المتزامن عن مستضدات متعددة وتصورها داخل نفس عينة الأنسجة. تلعب الخلايا القاتلة الطبيعية للرحم (uNK) دورا محوريا في عمليات الحمل المبكرة ، بما في ذلك إزالة الولادة ، وإعادة تشكيل الشرايين الحلزونية الرحمية ، وزرع الأجنة. تظهر أنواع فرعية مختلفة من خلايا uNK وظائف مختلفة ، مما يسمح لها بتنسيق الأحداث البيولوجية المختلفة لنمو الجنين الناجح والحمل. لذلك ، يعد البحث المتعمق حول الأنواع الفرعية لخلايا uNK ضروريا لتوضيح آليات تنظيم المناعة أثناء الحمل. توفر هذه الدراسات رؤى قيمة ومناهج جديدة لمعالجة الحالات ذات الصلة مثل العقم والفشل الإنجابي المتكرر. تقدم هذه الورقة بروتوكول تلطيخ IHC متعدد الإرسال مفصل لدراسة كثافة أربعة أنواع فرعية من خلايا uNK في عينات بطانة الرحم أثناء نافذة الزرع (WOI). يتضمن البروتوكول إعداد العينة ، وتحسين علامات النوع الفرعي ، والتصوير المجهري ، وتحليلات البيانات. يوفر بروتوكول تلطيخ IHC متعدد الإرسال هذا خصوصية وحساسية عالية ، مما يتيح الكشف المتزامن عن أنواع فرعية مختلفة من خلايا uNK ، وبالتالي تزويد الباحثين بأداة قوية لاستكشاف تعقيدات وآليات تنظيم المناعة أثناء الحمل.

Introduction

تم الإبلاغ عن أول ولادة حية موثقة بعد الإخصاب في المختبر ونقل الأجنة (IVF-ET) في عام 1978. على مدار الأربعين عاما الماضية ، كان هناك طلب كبير على مساعدة أطفال الأنابيب بين الأزواج المصابين بالعقم1. في عام 2021 ، بدأ 238,126 مريضا ما مجموعه 413,776 دورة أطفال الأنابيب في الولايات المتحدة. هذا يمثل زيادة بنسبة 25٪ في الدورات عن عامين سابقين وزيادة بنسبة 135٪ عن عام 20122. وتعزى هذه الزيادة بشكل أساسي إلى ارتفاع معدل انتشار العقم وتأخر التخطيط للحمل. أدت التطورات في تقنيات زراعة الأجنة وبروتوكولات الإباضة الزائدة إلى زيادة معدل المواليد الأحياء لكل دورة ET ، حيث وصلت إلى 30٪ -50٪ ف....

Protocol

تمت الموافقة على الدراسة من قبل لجنة أخلاقيات البحث السريري العنقودي الشرقي المشتركة بين الجامعة الصينية في هونغ كونغ والأقاليم الجديدة (رقم مرجع CREC: 2022.581). تم تعيين النساء المصابات ب RIF من مركز تكنولوجيا المساعدة على الإنجاب ، مستشفى أمير ويلز ، جامعة هونغ كونغ الصينية. تم تعريف RIF على أنه الفشل في تحقيق الحمل السريري بعد نقل ما لا يقل عن 4 أجنة ذات نوعية جيدة في 3 دورات جديدة أو مجمدة على الأقل في امرأة تقل أعمارها عن 40 عاماو 10 سنوات. تم الحصول على موافقة مستنيرة من المشاركين قبل جمع خزعات بطانة الرحم.

1. الحصول على عينات بطانة الرحم ومعالجتها

  1. ت....

النتائج

للحفاظ على الاتساق في توقيت جمع عينات بطانة الرحم للنساء اللواتي يخضعن للدورة الطبيعية ، تم إجراء اختبار بول للكشف بدقة عن زيادة الهرمون اللوتيني (LH) ، مع إجراء خزعات بطانة الرحم بعد 7 أيام من زيادة الهرمون اللوتيني (LH). بالنسبة للنساء اللواتي يخضعن لدورات العلاج التعويضي.......

Discussion

ينطوي زرع الجنين على تفاعل معقد بين الجنين وبطانة الرحم. تلعب الحالة المناعية لتوازن بطانة الرحم دورا محوريا في تحديد تقبل بطانة الرحم. خلال WOI ، تكون مجموعة الكريات البيض السائدة في بطانة الرحم هي الخلايا القاتلة الطبيعية. ما يقرب من 90٪ من خلايا uNK تظهر تعبيرا عاليا عن CD56.......

Disclosures

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس لديهم تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

تم دعم هذه الدراسة من قبل صندوق البحوث الصحية والطبية (10210956).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
CD49aNovus BiologicalsNBP2-76478Primary antibodies
CD56LeicaNCL-L-CD56-504Primary antibodies
CD16abcamab183354Primary antibodies
CXCR4R&DMAB172Primary antibodies
Amplification diluentAkoya BiosciencesFP1498 seriesFluorophore dilution buffer
Antibody diluentsAkoya BiosciencesARD1001EADilute the antibody
Citrate buffered solution, pH 6.0 /9.0(10x)Akoya BiosciencesA6001/A9001Antigen retrieval solution
inForm advanced image analysis softwareAkoya BiosciencesinForm Tissue Finder Software 2.2.6Data analysis software
Mantra WorkstationsAkoya BiosciencesCLS140089Spectral imaging
microwaveAkoya BiosciencesinverterMicrowave stripping
TSA 520Akoya BiosciencesFP1487001KSuitable tyramide-based fluorescent reagents
TSA 620Akoya BiosciencesFP1495001KSuitable tyramide-based fluorescent reagents
TSA 650Akoya BiosciencesFP1496001KSuitable tyramide-based fluorescent reagents
TSA 570Akoya BiosciencesFP1488001KSuitable tyramide-based fluorescent reagents
Poly-L-lysine coated slidesFisher Technologies120-550-15Slides for routine histological use
PolyHRP Broad SpectrumPerkin ElmerARH1001EASecondary antibodies
Invitrogen™ Fluoromount-G™ Mounting MediumThemoFisher Science495802Installation
Spectral DAPIAkoya BiosciencesFP1490ANucleic acid staining

References

  1. De Geyter, C. Assisted reproductive technology: Impact on society and need for surveillance. Best Pract Res Clin Endocrinol Metab. 33 (1), 3-8 (2019).
  2. . State-Specific Assisted Reproductive Technology Surveillance. CDC Available from: https://www.cdc.gov/art/state-specific-surveillance/2021/index.html (2024)
  3. ....

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

212

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved