A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
يصف هذا البروتوكول اختيار واسمات البلازموديزم المثلى للتحليلات القائمة على الفحص المجهري متحد البؤر لاستهداف البروتين إلى البلازموديزما أثناء تفاعلات الفيروس والبلازموديزما أو نقل البلازموديزم.
البلازموديزما هي مسام نانوية غشائية تربط سيتوبلازم الخلايا النباتية المجاورة وتمكن من الاتجار من خلية إلى أخرى بالمغذيات والجزيئات الكبيرة وكذلك الفيروسات الغازية. تلعب البلازموديزما أدوارا أساسية في تنظيم الاتصال بين الخلايا ، مما يساهم في تطوير النبات ، والاستجابات البيئية ، والتفاعلات مع مسببات الأمراض الفيروسية. يمكن أن يوفر اكتشاف توطين البلازموديزمي للبروتينات النباتية أو الفيروسية معلومات وظيفية مفيدة حول البروتين وهو مهم لفهم آليات تفاعلات الفيروسات النباتية. لتسهيل هذه الدراسات ، وصفنا بروتوكولا للتحليل القائم على الفحص المجهري متحد البؤر لمختلف البروتينات المستهدفة للبلازموديزمال لاختيار أفضل علامة بلازمودية لدراسة تفاعلات الفيروس والبلازموديزما أو نقل البلازموديزم. على وجه التحديد ، يتم توضيح تحليلات هذه الأحداث باستخدام بروتين الحركة من خلية إلى خلية (MP) لفيروس إزالة الوريد اللفت (TVCV) ، والبروتين الموضعي البلازموديزمي أرابيدوبسيس 5 (PDLP5) وبروتين ربط البلازموديزما كالوز 1 (PDCB1). يتم تحليل بيانات توطين البروتين البلازموديزمي بالتوازي مع التصور العالمي للبلازموديزما باستخدام تلطيخ الأنيلين الأزرق للأنسجة التي تم أخذ عينات منها. يمكن تكييف هذه الأساليب بسهولة لتحليل توطين البلازموديزمي لأي بروتينات خلوية أو ممرضة في لسان النبات.
تلعب البلازموديزما (PD) دورا أساسيا في التحكم في نمو النبات والاستجابات البيئية والتفاعلات مع مسببات الأمراض الفيروسية من خلال تنظيم الاتصال بين الخلايا 1,2. يتشكل PD في البداية أثناء التحريك الخلوي ، مع إدخال المئات من PD في الخلية الجديدة بين الخليتين الابنتين ، وبالتالي توفير قنوات الاتصال من خلية إلى خلية 3,4. PD هو هيكل غني بالغشاء ، يحتوي على غشاء مشتق من الشبكة الإندوبلازمية (ER) ، وهو أنبوب عبر PD ، في الجزء المركزي من المسام التي يصطف عليها غشاء البلازما 3,4....
تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في هذه الدراسة مدرجة في جدول المواد.
1. نمو النبات
2. بناء ناقل....
لتسهيل دراسات وظيفة PD في فسيولوجيا النبات والتفاعلات مع مسببات الأمراض ، تم تطوير ثلاثة بروتينات مرجعية بسيطة وموثوقة لتوطين PD. تم اختيار اثنين من بروتينات PD الخلوية وبروتين MP مشتق من مسببات الأمراض مشفر بواسطة فيروس توبامو TVCV النباتي. تم تصور التوطين تحت الخلوي لهذه ال.......
تتطلب أي دراسات بيولوجية للخلايا للاتصال بين الخلايا النباتية والنقل من خلية إلى خلية أثناء نمو النبات الطبيعي والتشكل ، وكذلك أثناء التفاعلات بين مسببات الأمراض النباتية ، اكتشاف ومراقبة فرز البروتينات - الداخلية والممرضة المشفرة - إلى الوصلات بين الخلايا النباتية ، ?.......
يعلن المؤلفون عدم وجود مصالح متنافسة.
تم دعم العمل في مختبر VC بمنح من NIH (R35GM144059) و NSF (MCB 1913165 و IOS 1758046) و BARD (IS-5276-20) إلى VC. لم يكن للممولين أي دور في تصميم الدراسة وجمع البيانات وتفسيرها أو قرار النشر.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
ABT AC 1 phase motor | BRANDTECH | ABF63/4C-7RQ | |
Agrobacterium tumefaciens EHA105 | |||
Contamination control | CCI | ||
Gateway BP Clonase II Enzyme mix | Invitrogen | #11789020 | |
Gateway LR Clonase II Enzyme mix | Invitrogen | #11791020 | |
GraphPad Prism 8.0.1. | GraphPad Software Inc. | ||
Image J | National Institutes of Health and the Laboratory for Optical and Computational Instrumentation | ||
Laser scanning confocal microscope | Zeiss | LSM 900 | |
Nicotiana benthamiana | Plant species | ||
pDONR207 | Invitrogen | #12213013 | |
Q5 High-Fidelity DNA Polymerase | NEB | #M0491S |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionExplore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved