يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال أمراض الجهاز الهضمي حول تأثير أعضاء الميكروبات ، وتحديدًا تلك التي من جنس Helicobacter ، على الالتهاب والسرطان. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تسمح بدراسة عدوى Helicobacter وتأثيرها على المعدة في ظل الظروف الفسيولوجية. تمتد آثار هذه التقنية نحو تطوير العلاجات للوقاية من أو القضاء على عدوى Helicobacter أو عواقبها ، بما في ذلك المضادات الحيوية أو الأدوية أو اللقاحات.
توفر هذه الطرق رؤية خاصة بـ pathogenesis من عدوى Helicobacter. ومع ذلك، قد يتم تكييف العديد من التقنيات لدراسة مسببات الأمراض المعدية المعوية الأخرى. عموما، سوف الأفراد الجدد لهذه الطريقة النضال مع إعداد inoculum البكتيرية قادرة على إنشاء عدوى في الفئران.
ومن الضروري أن عزل Helicobacter معروفة سلالات الفأر الاستعمار التي لم تشهد ثقافة فرعية واسعة في المختبر. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي تسجيل عدد الثقافات الفرعية في المختبر لهذه السلالات. إضافة التعليقات البكتيرية إلى أنابيب البوليسترين 15 ملليلتر، واستخدام حلقة بلاستيكية لنقل واحد 10-20 ميكرولتر قطرات من كل ثقافة على شرائح المجهر الزجاج الفردية.
ثم، تقييم صلاحية وحركية البكتيريا تحت المجهر على النقيض من المرحلة في التكبير 100 مرة. فقط استخدام inocula H.pylori إذا كانت غالبية البكتيريا لها شكل bacillary. H.felis inocula ينبغي أن تحتوي في المقام الأول على البكتيريا على شكل helical.
و تحميل الحقنة في حقن فردية يمكن التخلص منها و مليلتر واحد تجهيز كل حقنة مع إبرة قياس 23، واستخدام فيلم البارافين البلاستيك لإرفاق قسطرة البولي إيثيلين المتاح لكل إبرة. بعد ذلك ، قم يدويًا بتقييد فأر محدد من العمر من ستة إلى ثمانية أسابيع خالي من مسببات الأمراض والخالية من Helicobacter من قِبل scruff من الرقبة والذيل ، وأدخل قسطرة واحدة في مركز الفك المفتوح.
توجيه القسطرة في المريء نحو المريء، وتمديد عنق الماوس للسماح بسهولة الوصول إلى المعدة من خلال المريء وبعيدا عن القصبة الهوائية حتى معظم أو كل من القسطرة لم يعد مرئيا وشعروا المقاومة. ثم، تسليم ما لا يقل عن واحد مرات 10 إلى البكتيريا الخامسة لضمان الاستعمار الأمثل وأمراض الأمراض. في نهاية التجربة ، استخدم مقصًا ناعمًا ومنحنيًا لفتح تجويف البطن لختان المعدة.
قطع المعدة على طول انحناء أكبر، وغسل بلطف الجهاز مرتين في أنبوب واحد 50 ملليلتر من برنامج تلفزيوني الطازجة في غسل لإزالة أي طعام المتبقية. بعد الغسيل الثاني، ضع الأنسجة في طبق بيتري من البلاستيك، طوله ستة سنتيمترات، لتسجيل الوزن الرطب. بعد تسطيح المعدة، قسم العينة القوس إلى اثنين من شظايا الأنسجة متساوية تتألف من المناطق antrum، والجسم، وغير غدي forestomach.
إزالة المنطقة غير غدية، وتزن نصف كل معدة قبل تخزين قطعة من الأنسجة في الحل المناسب للتحليل المصب المخطط لها. إضافة النصف الآخر من أنسجة المعدة إلى أنبوب مخروطي 15 ملليلتر يحتوي على 10٪ formalin، تسطيح الأنسجة ضد الجانبين العلويين من الأنابيب بعد 10 ثوان. عندما أصبحت الأنسجة الملصقة على جدران أنبوب، إعادة غمر العينات في formalin لمدة 24 ساعة على الأقل.
لحساب عدد من H.pylori قابلة للحياة في المعدة بعد العدوى، التجانس عينات المعدة المخزنة في BHI، وتنفيذ عمليات تخفيف المسلسل مكررة من تجانس المعدة الناتجة في مرق الطازجة، العقيمة. تقسيم قبل المجففة حصان الدم أجار، أو HBA، لوحات تستكمل مع المضادات الحيوية إضافية إلى ثلاثة أو أربعة أجزاء، وباستخدام التكيف من تقنية مايلز ومصرا، إضافة 10 إلى 100 ميكرولترات من كل تخفيف التجانس المعدة على جزء من كل لوحة أجار. انتشار تجانس مع الحلقات العقيمة والبلاستيك، والسماح للألواح لتجف.
ثم، ضع اللوحات في وضع مقلوب في جرار غاز anaerobe تحتوي على طبق بيتري من الماء وحزمة غاز. ثم، احتضان الجرار في 37 درجة مئوية لمدة أربعة إلى سبعة أيام. عندما يمكن ملاحظة المستعمرات، عدّد الأجزاء التي تحتوي على ما بين 10 و 100 مستعمرة معزولة.
بعد القتل الرحيم ، يتم حصاد المعدة من الحيوانات ووزنها. تتم إزالة المنطقة غير غدية، وينقسم المعدة إلى نصفين متساويين تتألف من antrum والجسم. وعادة ما يتم تأكيد الاستعمار الناجح من خلال إجراء العد القابل للتطبيق والتعداد اللاحق للمستعمرات الفردية من تجانس المعدة المتجانسة على لوحات HBA.
لاحظ أن وجود البكتيريا الملوثة من ميكروبيوتا المعدة الماوس أو أعداد كبيرة من مستعمرات H.pylori يمكن أن تعقد تعداد CFUs H.pylori. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام البوليميراز المتعدد الكلور للتحقق من العدوى باستخدام اُبُر محددة مُثبتة صحة موجهة إلى منطقة زوج من 325 قاعدة من جينات H.felis وH.pylori ureB. في هذه التجربة التمثيلية، أظهرت الفئران من النوع البري C57 Black-6 علامات معتدلة للالتهاب، بما في ذلك تضخم التنسج وضمور الغدة في ستة أشهر بعد العدوى مع H.felis، بالإضافة إلى التسلل الخلوي للخلود الفرعي.
ويلاحظ التهاب أكثر حدة في الفئران خروج المغلوب في نفس الوقت نقطة, مع وجود إضافية من بصيلات اللمفاوية لوحظت على مقربة من تسلل الخلوية. يمكن أيضًا تصور بكتيريا H.felis في أقسام ملطّخة بـ Giemsa من أنسجة معدة الماوس المصابة. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل PCR الكمي، الكيمياء المناعية، أو المناعة للإجابة على أسئلة إضافية حول أنواع الاستجابات المضيفة الناجمة أثناء عدوى Helicobacter.
بعد تطورها، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال علم الأحياء الدقيقة والجهاز الهضمي لاستكشاف الدور المسبب لهيليكوباكتر بيلوري في أمراض المعدة في البشر. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية إصابة الفئران بشكل متكاثر مع أنواع Helicobacter ودراسة الأمراض المرتبطة بالعدوى. لا ننسى أن سلالات Helicobacter المستخدمة في هذا البروتوكول المعدية، وبالتالي ينبغي اتباع إجراءات السلامة الحيوية القياسية دائما أثناء العمل مع هذه البكتيريا.
