يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة في تشخيص مرض هيرشسبرونغ. الأسلوب والوظائف لهذه التقنية، إذا كنت تتبع بروتوكول، يعرض حساسية عالية ومعدلات التحديد التي عملية في نفس الوقت. إثبات الإجراء سيكون (ميجينغ فانغ) ، فني من مختبري
تبدأ عن طريق تحديد الخزعات شفط المستقيم في خمسة أضعاف حجم الأنسجة في 4٪ شبهformaldehyde لمدة ست ساعات في درجة حرارة الغرفة. يجفف الأنسجة الثابتة في مجفف الأنسجة المرضية لمدة 11 ساعة وتضمين أنسجة خزعة شفط المستقيم المعالجة في كتل البارافين. تقليم كتل على microtome حتى يتعرض لها جزء كامل من مستوى الأنسجة.
ثم استخدام microtome للحصول على 0.4 ميكرومتر أقسام من الأنسجة المضمنة. وضع في 45 إلى 50 درجة مئوية المياه للسماح المقاطع لتنتشر في خطة مسطحة. نقل المقاطع بالارض على الشرائح الزجاجية وخبز لهم في فرن درجة مئوية 60 لمدة ثلاث إلى خمس ساعات.
ضع الشرائح منزوعة الوبافينيف إلى تغييرين لمدة 15 دقيقة من الزيلين متبوعين برطوبة في غمرات الإيثانول المتتابعة لمدة خمس دقائق. ثم شطف الشرائح في المياه النقية التناضح العكسي لمدة خمس دقائق إضافية. لاسترجاع المستضد، ضع الشرائح في جرة كوبلين تلطيخ من حل استرجاع ووضع جرة في حمام محمّد من الماء المغلي.
بعد 20 دقيقة، والسماح للجرة لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق وشطف بلطف الشرائح مع برنامج تلفزيوني. ثم استخدام علامة مبيدة للماء لتطويق كل قسم الأنسجة ووضع الشرائح في مربع الرطب. لمنع أي بيروكسيدات، إضافة اثنين أو ثلاثة قطرات من 3٪ محلول بيروكسيد الهيدروجين على كل الأنسجة ووضع الشرائح في 37 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
في نهاية الحضانة، شطف الشرائح مع ثلاثة خمس دقائق PBS يغسل تليها عرقلة مع 5٪ البوم مصل البقر لمدة 20 دقيقة في 37 درجة مئوية. المقبل، والتخلص من الألبومين مصل البقر الزائد وتسمية الخلايا مع 50 ميكرولترات من الأجسام المضادة الأولية من الفائدة في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي ، شطف الشرائح مع ثلاث غسلات لمدة ثلاث دقائق في برنامج تلفزيوني وإضافة 50 ميكرولترات من محسن البوليمر إلى كل شريحة.
بعد 20 دقيقة في 37 درجة مئوية، وغسل الشرائح ثلاث مرات في برنامج تلفزيوني وإضافة 50 ميكرولترات من الأجسام المضادة الثانوية B إلى كل قسم الأنسجة. بعد 30 دقيقة في 37 درجة مئوية، شطف المقاطع مع ثلاثة يغسل لمدة خمس دقائق في برنامج تلفزيوني وإضافة قطرة من حل العمل DAB الطازجة المعدة لكل شريحة. عندما يتم الكشف عن المستوى المناسب من تلطيخ البني عن طريق المجهر الخفيفة، شطف الشرائح في برنامج تلفزيوني لمدة خمس دقائق ووصمة عار مضادة للنيات مع قطرة واحدة من الهماوكسيلين لمدة دقيقة واحدة.
إزالة وصمة عار الزائدة تحت عدد قليل من الماء لمدة 30 إلى 40 ثانية تقريبا تليها غسل 25 إلى 30 ثانية في برنامج تلفزيوني جديد. التفريق بين الأنسجة في 1٪ من حمض الهيدروكلوريك الإيثانول لمدة 10 ثوان تليها غسل برنامج تلفزيوني لمدة دقيقة واحدة. قم بتجفيف الشرائح مع الانغماس لمدة خمس دقائق في الترتيب العكسي للترطيب وتعريض الشرائح لتغييرين لمدة خمس دقائق من الزيلين.
ثم قم بتركيب زلة الغطاء باستخدام التركيبة فائقة التنظيف وتسمح للشرائح بالجفاف قبل التصور على المجهر الخفيف. في هذه الدراسة التمثيلية لـ 318 مريضًا من مرضى خزعة القسم المستقيمي ، تم تشخيص 99 مريضًا في البداية عن طريق خزعة قسم المستقيم. وقد لوحظ العديد من خلايا العقدة التي تعبر عن كالريتينين في خزعات الأنسجة العادية.
ومع ذلك، لم يتم الكشف عن خلايا العقد في أي منطقة من الأنسجة من شرائح المرض هيرشسبرونغ. S-100 وPGP9.5 كشفت مناعة جذوع الأعصاب المتضخمة في submucosa من الأنسجة المريضة مع تلطيخ الحبيبية فقط من بعض الأغصان العصبية الصغيرة لوحظ في الأمعاء العادية. أثناء محاولة هذا الإجراء، من المهم أن نتذكر أن تولي اهتماما لتفاصيل مثل حجم الخزعات شفط المستقيم وسمك المقاطع.
بعد أن يتم إلغاء تجزئة هذا الأسلوب ، فإن هذه التقنية تمهد الطريق لإجراء أبحاث في مجال جراحة الأطفال لدعم تشخيص مرض هيرشسبرونغ.
