卡瑞津、S100 蛋白和蛋白质基因产物9.5 的免疫修饰直肠吸吮活检诊断

这种方法可以帮助回答赫希斯普龙病的诊断问题。如果遵循协议，该技术的方法和功能会表现出高灵敏度和同时处理的特异性率。演示程序将是米景方，一个技术人员从我的实验室。

首先将直肠吸活检固定在4%半甲醛中组织体积的五倍，在室温下6小时。将固定组织脱水 11 小时，并将加工过的直肠吸活检组织嵌入石蜡块中。修剪微原子上的块，直到组织的完整截面被暴露。

然后使用微原子获得0.4微米的嵌入组织部分。将45至50摄氏度的水，让部分铺成平面图。将扁平部分转移到玻璃滑梯上，在 60 摄氏度的烤箱中烘烤三到五个小时。

将脱甲脱素的幻灯片放入两个 15 分钟的二甲苯变化中，然后连续进行 5 分钟乙醇浸入。然后用反渗透纯净水冲洗滑梯五分钟。对于抗原检索，将幻灯片放入可检索溶液的科普林染色罐中，然后将罐子放入沸水的预热浴中。

20 分钟后，让罐子冷却到室温约 10 分钟，然后用 PBS 轻轻冲洗幻灯片。然后使用疏水标记包围每个组织部分，并放入湿盒中。要阻止任何过氧化物，请在每个组织上加入两到三滴 3% 的过氧化氢溶液，并将幻灯片在 37 摄氏度下放置 20 分钟。

在孵育结束时，用三个五分钟的PBS洗涤冲洗幻灯片，然后用5%牛血清白蛋白在37摄氏度下阻断20分钟。接下来，丢弃过量的牛血清白蛋白，并在4摄氏度下用50微升的原抗体标记细胞。第二天早上，用PBS三分钟洗涤液冲洗幻灯片，并在每张幻灯片中加入50微升聚合物增强剂。

在37摄氏度下20分钟后，用PBS清洗幻灯片三次，并在每个组织部分添加50微升的二次抗体B。在 37 摄氏度下 30 分钟后，用 PBS 中三个 5 分钟的洗涤液冲洗部分，并在每张幻灯片上添加一滴新鲜准备的 DAB 工作解决方案。当通过光显微镜检测到适当水平的棕色染色时，在 PBS 中冲洗幻灯片 5 分钟，然后用一滴赤氧林对核进行反染色一分钟。

去除水滴下多余的污渍约 30 至 40 秒，然后用新鲜 PBS 洗涤 25 到 30 秒。在1%盐酸乙醇中区分组织10秒，然后洗1分钟PBS。以水化的相反顺序浸入五分钟使幻灯片脱水，使幻灯片暴露在两个五分钟二甲苯的变化中。

然后使用超清洁安装安装盖滑，让幻灯片在光显微镜上可视化之前干燥。在这项对318例直肠部分活检患者的代表性研究中，99名患者最初被诊断为直肠部分活检。在正常组织活检中观察到许多表达卡雷丁素的结节细胞。

然而，在赫希斯普龙病段的组织的任何区域中未检测到结节细胞。S-100 和 PGP9.5 免疫染色显示，在患病组织的亚木科萨中，神经躯干会肥大，在正常内肠中观察到的一些小神经树枝只有颗粒染色。在尝试此程序时，重要的是要记住注意细节，如直肠吸活检的大小和部分的厚度。

在碎片整理后，这项技术将为儿科外科领域的研究铺平道路，以支持赫希斯普龙病的诊断。