يصف هذا البروتوكول الجديد التخدير الجراحي في الفئران باستخدام تخدير البروبوفول. تمكن هذه الطريقة من البحث في تخدير البروبوفول في نماذج الفئران من الأمراض. يسمح البروتوكول بتقييم التخدير الوريدي الكلي ويتجنب استخدام التخدير المتطاير.
يمكن استخدام البروتوكول لاستكشاف كيفية تأثير تخدير البروبوفول على النتائج المتعلقة بالمرض. على سبيل المثال ، هنا نقوم بتقييم نتائج السرطان على المدى القصير والطويل بعد الجراحة لإزالة الورم. للبدء ، ثقافة 66 CL4 ميراي خلايا سرطان الثدي التي يتم تحويلها بثبات للتعبير عن لوسيفيراز اليراع في وسط ألفا ميم التي تحتوي على 10٪ FBS و 200 مللي مول الجلوتامين.
احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية ولكن 5٪ ثاني أكسيد الكربون. الزراعة الفرعية للخلايا عندما تصل الخلايا إلى حوالي 80٪ من التقاء. عندما تكون الخلايا في مرحلة نمو لوغاريتمية مع ملليلتر من التنقيط في محلول EDTA ، ارفع الخلايا الملتصقة وعد الخلايا باستخدام مقياس الدم.
ثم قم بتخفيف الخلايا في PBS واحتفظ بتعليق الخلية المخفف على الجليد حتى يصبح الماوس جاهزا للحقن. بمجرد تخدير الماوس بالكامل ، امسح منطقة وسادة الدهون الثديية اليسرى الرابعة بمسحة كحول تستخدم لمرة واحدة لإعداد موقع الحقن. املأ حقنة هاميلتون سعة 25 ميكرولتر متصلة بإبرة تحت الجلد معقمة قياس 27 بتعليق الخلايا السرطانية.
استخدم الملقط لرفع الجلد وتأمينه. حقن مرة واحدة 10 إلى الخلايا الخامسة و 20 ميكرولتر من PBS في وسادة الدهون الثديية اليسرى الرابعة على بعد ملليمتر واحد تقريبا من الحلمة. إذا تم وضع علامة على الخلايا باستخدام luciferase ، فقم بحقن 100 ميكرولتر من D-luciferin في الوريد الذيل الجانبي للفأر المخدر باستخدام حقنة أنسولين 0.5 ملليلتر بإبرة تحت الجلد قياس 30.
بعد دقيقتين من الحقن ، ضع الماوس في نظام تصوير التلألؤ الحيوي مع لوحة الدهون الثديية التي تواجه الأعلى والتقاط الصورة لمدة 10 ثوان. بعد التصوير ، ضع الماوس في القفص النظيف واسمح له بالتعافي من التخدير. راقب نمو نمو الورم الأساسي باستخدام الفرجار.
احسب حجم الورم واستئصاله عندما يصل حجم الورم الأساسي إلى 80 إلى 90 ملليمترا مكعبا. قم بإعداد مضخة المحاقن الآلية باستخدام حقنة أنسولين بقياس 30 ملليلتر واحد تحتوي على تركيبة بروبوفول بنسبة 2٪. الحث على التخدير في غرفة الحث مع ثلاثة في المئة سيفوفلوران أو إيزوفلوران.
ثم انقل الفأر المخدر إلى وسادة تسخين عند 37 درجة مئوية وحافظ على التخدير باستخدام اثنين إلى ثلاثة بالمائة من سيفوفلوران أو أيسوفلوران باستخدام مخروط الأنف. اضبط توصيل سيفوفلوران كما هو مطلوب أثناء التعليب الوريدي للحفاظ على عمق ثابت للتخدير يتضح من فقدان منعكس الدواسة ومعدل التنفس أقل من 100 نفس في الدقيقة. ضع مواد التشحيم المائية على العينين لمنع جفاف القرنية ، ثم حقن 0.05 ملليغرام لكل كيلوغرام من البوبرينورفين تحت الجلد.
لتوصيل التخدير الوريدي الكلي القائم على البروبوفول ، قم بتقليب الوريد الذيل الجانبي باستخدام إبرة تحت الجلد معقمة قياس 30 متصلة بقسطرة بولي يوريثين معقمة. تأكد من الموضع الصحيح عن طريق الفلاش باك الدموي في القسطرة. إعطاء اثنين في المئة بروبوفول كبلعة أولية من 27 ملليغرام لكل كيلوغرام على مدى دقيقة واحدة لبدء التخدير الكلي عن طريق الوريد.
وقف إدارة سيفوفلوران. الحفاظ على ضخ البروبوفول بمعدل 2.2 إلى 4.0 ملليغرام لكل كيلوغرام في الدقيقة للحفاظ على عمق التخدير المستقر أثناء الجراحة. حلق منطقة البطن وتطهير المنطقة الجراحية بمحلول البوفيدون اليود.
جعل شق سنتيمتر واحد أدنى من الورم في وسادة الدهون الثديية الرابعة اليسرى. استخدم الملقط والمقص لتشريح الورم والعقدة الليمفاوية الإربية اليسرى. إذا تم استخدام الخلايا السرطانية الموسومة باللوسيفيراز ، فقم بحقن d-luciferin في الوريد الذيل الجانبي كما هو موضح والتقاط الصور لمدة 60 ثانية للحصول على هوامش واضحة.
إذا تم تحديد ورم متبقي، فقم باستئصال أنسجة إضافية من وسادة الدهون الثديية. بمجرد تحقيق الإرقاء في الموقع الجراحي ، أغلق الجلد باستخدام 5-0 خيوط نايلون. امسح الجرح بمحلول البوفيدون اليود.
عند الانتهاء من الجراحة ، أوقف التخدير وضع الماوس في قفص نظيف على وسادة تدفئة للسماح له بالتعافي من التخدير. راقب الماوس كل 15 دقيقة حتى يعود الماوس إلى اليقظة الطبيعية. ثم مراقبة وتوفير مسكن كل 12 ساعة لمدة 48 ساعة بعد الجراحة.
بالنسبة لتكرار الورم الأولي أو تقييم التكرار البعيد ، راقب الفئران مرة واحدة في الأسبوع ، بدءا من الأسبوع التالي للجراحة باستخدام نظام تصوير التلألؤ الحيوي. تم استخدام تصوير التلألؤ الحيوي لتحديد تكرار الورم البعيد في الرئتين بعد استئصال الورم الأساسي. يمكن استخدام هذا النموذج لتقييم الأحداث التي وقعت خلال الفترة المحيطة بالجراحة.
بعد 24 ساعة من جراحة السرطان تحت البروبوفول ، تم تقييم سيتوكينات البلازما المتداولة. الممارسات اللازمة لتعليب الوريد الذيل الجانبي بسرعة وتقليل مدة التعرض للسيفوفلوران. يجب أن يتم معايرة سيفوفلوران تدريجيا حيث يتم إعطاء بلعة البروبوفول لمنع الإفراط في التخدير.
يمكن استخدام هذه الطريقة للتحقيق في تأثير تخدير البروبوفول في نماذج الفئران لجراحة القلب أو الأمراض الخطيرة ، مثل الإنتان.
