פרוטוקול חדשני זה מתאר הרדמה כירורגית בעכברים באמצעות הרדמה פרופופול. השיטה מאפשרת לחקור הרדמה של פרופופול במודלים של מחלות בעכברים. הפרוטוקול מאפשר הערכה של הרדמה תוך ורידית כוללת ונמנע משימוש בהרדמה נדיפה.
ניתן להשתמש בפרוטוקול כדי לחקור כיצד הרדמה של פרופופול משפיעה על תוצאות הקשורות למחלות. לדוגמה, כאן אנו מעריכים תוצאות סרטן לטווח קצר וארוך לאחר ניתוח להסרת הגידול. כדי להתחיל, תרבית 66 CL4 Mirai תאי סרטן החלב אשר מתמרים ביציבות לבטא לוציפראז גחלילית במדיום אלפא MEM המכיל 10% FBS ו 200 מילימולר גלוטמין.
לדגור על התאים ב 37 מעלות צלזיוס אבל 5% פחמן דו חמצני. תת-תרבית של התאים כאשר התאים מגיעים למפגש של כ-80%. כאשר התאים נמצאים בשלב גדילה לוגריתמי עם שני מיליליטר של טפטופים בתמיסת EDTA, הרימו את התאים הדבקים וספרו את התאים באמצעות המוציטומטר.
לאחר מכן דללו את התאים ב-PBS ושמרו את תרחיף התאים המדולל על הקרח עד שהעכבר יהיה מוכן להזרקה. לאחר שהעכבר מורדם לחלוטין, נגב את אזור כרית שומן החלב השמאלית הרביעית עם ספוגית אלכוהול חד פעמית להכנת אתר ההזרקה. מלאו מזרק המילטון 25 מיקרוליטר המחובר למחט היפודרמית סטרילית בגודל 27 מדים עם תרחיף תאים סרטניים.
השתמש מלקחיים כדי להרים ולאבטח את העור. להזריק פעם אחת 10 לתאים החמישיים ו-20 מיקרוליטרים של PBS לתוך כרית שומן החלב השמאלית הרביעית במרחק של כמילימטר מהפטמה. אם התאים מתויגים עם לוציפראז, להזריק 100 microliters של D-luciferin בווריד הזנב לרוחב של העכבר מורדם באמצעות מזרק אינסולין 0.5 מיליליטר עם מחט היפודרמית 30 מד.
שתי דקות לאחר ההזרקה מניחים את העכבר במערכת הדמיה ביולומינסנציה כאשר כרית שומן החלב פונה כלפי מעלה ולוכדים את התמונה למשך 10 שניות. לאחר ההדמיה, הניחו את העכבר בכלוב הנקי ואפשרו לו להתאושש מההרדמה. עקוב אחר הצמיחה של צמיחת הגידול הראשוני באמצעות קליפר.
חישוב נפח הגידול וכריתת הגידול כאשר הגידול הראשוני מגיע לנפח של 80 עד 90 מילימטרים מעוקבים. הגדר את משאבת המזרק האוטומטית עם מזרק אינסולין מיליליטר אחד של 30 מד המכיל נוסחת פרופופול של שני אחוזים. השרה הרדמה בתא אינדוקציה עם שלושה אחוזים sevoflurane או isoflurane.
לאחר מכן העבירו את העכבר המרדים לכרית חימום בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ושמרו על ההרדמה עם שניים עד שלושה אחוזים סבופלורן או איזופלוראן באמצעות חרוט אף. התאם את אספקת sevoflurane כנדרש במהלך קנולציה תוך ורידית כדי לשמור על עומק יציב של הרדמה המודגם על ידי אובדן רפלקס הדוושה וקצב הנשימה פחות מ -100 נשימות לדקה. החל חומר סיכה מימי על העיניים כדי למנוע ייבוש של הקרנית, ולאחר מכן להזריק 0.05 מיליגרם לכל קילוגרם של buprenorphine תת עורית.
כדי לספק את ההרדמה התוך-ורידית הכוללת המבוססת על פרופופול, ניתן לנטרל את וריד הזנב הלטרלי באמצעות מחט היפודרמית סטרילית בגודל 30 מד המחוברת לקטטר פוליאוריתן סטרילי. אשרו את המיקום הנכון על ידי פלאשבק דם לתוך הקטטר. מתן שני אחוז פרופופול כבולוס ראשוני של 27 מיליגרם לק"ג במשך דקה אחת כדי להתחיל הרדמה תוך ורידית מלאה.
להפסיק את הממשל sevoflurane. לשמור על עירוי פרופופול בקצב של 2.2 עד 4.0 מיליגרם לק"ג לדקה לשמירה על עומק הרדמה יציב במהלך הניתוח. לגלח את אזור הבטן ולחטא את האזור הכירורגי עם תמיסת פובידון-יוד.
בצע חתך של סנטימטר אחד נחות מהגידול בכרית שומן החלב הרביעית השמאלית. השתמש מלקחיים ומספריים כדי לנתח את הגידול ואת בלוטת הלימפה המפשעה השמאלית. אם נעשה שימוש בתאי גידול המתויגים בלוציפראז, הזריקו d-לוציפרין בווריד הזנב הצדדי כפי שהודגם ותפסו את התמונות למשך 60 שניות כדי לקבל שוליים ברורים.
אם מזוהה גידול שיורי, כריתת רקמה נוספת מפד שומן החלב. לאחר hemostasis מושגת באתר כירורגי, לסגור את העור באמצעות 5-0 תפרים ניילון. נגב את הפצע בתמיסת פובידון-יוד.
עם סיום הניתוח, יש להפסיק את ההרדמה ולהניח את העכבר בכלוב נקי על כרית חימום כדי לאפשר לו להתאושש מההרדמה. נטר את העכבר כל 15 דקות עד שהעכבר יחזור לערנות רגילה. לאחר מכן לפקח ולספק משכך כאבים כל 12 שעות במשך 48 שעות לאחר הניתוח.
לצורך הישנות ראשונית של הגידול או הערכת הישנות מרוחקת, עקבו אחר העכברים פעם בשבוע, החל מהשבוע שלאחר הניתוח באמצעות מערכת הדמיה ביולומינסנציה. הדמיית Bioluminescence שימשה לזיהוי הישנות הגידול המרוחק בריאות לאחר כריתת הגידול הראשוני. מודל זה יכול לשמש כדי להעריך אירועים שהתרחשו במהלך התקופה perioperative.
24 שעות לאחר ניתוח סרטן תחת פרופופול, נבדקו ציטוקינים במחזור הדם. שיטות הנדרשות כדי לתמרן במהירות את וריד הזנב הלטרלי ולמזער את משך החשיפה לסבופלורן. יש להוריד בהדרגה את הסבופלורן מכיוון שהפרופופול בולוס ניתן כדי למנוע טשטוש יתר.
שיטה זו עשויה לשמש כדי לחקור את ההשפעה של הרדמה פרופופול במודלים של עכברים של ניתוחי לב או מחלות קריטיות, כגון אלח דם.
