이 새로운 프로토콜은 propofol 마취를 사용하는 마우스의 외과 적 마취를 설명합니다. 이 방법은 질병의 마우스 모델에서 propofol 마취에 대한 연구를 가능하게합니다. 이 프로토콜은 전체 정맥 내 마취의 평가를 허용하고 휘발성 마취의 사용을 피합니다.
이 프로토콜은 propofol 마취가 질병 관련 결과에 어떻게 영향을 미치는지 탐구하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어, 여기에서는 종양 제거 수술 후 장단기 암 결과를 평가합니다. 시작하기에, 반딧불이 루시페라아제를 발현하도록 안정적으로 형질도입된 66 CL4 미라이 유방암 세포를 10%FBS 및 200 밀리몰 글루타민을 함유하는 알파 MEM 배지에서 배양한다.
세포를 섭씨 37도에서 배양하지만 5 % 이산화탄소. 세포가 약 80% 컨플루언스에 도달하면 세포를 계대배양합니다. 세포가 EDTA 용액에 2 밀리리터의 물방울이있는 대수 성장 단계에있을 때, 부착 된 세포를 들어 올리고 혈구 측정기를 사용하여 세포를 세십시오.
그런 다음 세포를 PBS로 희석하고 마우스가 주사할 준비가 될 때까지 희석된 세포 현탁액을 얼음 위에 유지합니다. 마우스가 완전히 마취되면 왼쪽 네 번째 유방 지방 패드 부위를 일회용 알코올 면봉으로 닦아 주사 부위를 준비합니다. 멸균 25 게이지 피하 주사 바늘에 부착 된 27 마이크로 리터 해밀턴 주사기를 암세포 현탁액으로 채 웁니다.
집게를 사용하여 피부를 들어 올리고 고정하십시오. 다섯 번째 세포에 10회 1회 주사하고 PBS 20마이크로리터를 젖꼭지에서 약 1mm 떨어진 네 번째 왼쪽 유방 지방 패드에 주입합니다. 세포에 루시페라아제 태그가 붙은 경우 30게이지 피하 주사 바늘이 있는 0.5밀리리터 인슐린 주사기를 사용하여 마취된 마우스의 측면 꼬리 정맥에 100마이크로리터의 D-루시페린을 주사합니다.
주사 2분 후 마우스를 유방 지방 패드가 위를 향하도록 생물발광 이미징 시스템에 놓고 10초 동안 이미지를 캡처합니다. 이미징 후 마우스를 깨끗한 케이지에 넣고 마취에서 회복되도록하십시오. 캘리퍼를 사용하여 원발성 종양 성장의 성장을 모니터링합니다.
종양 부피를 계산하고 원발성 종양이 80-90 입방 밀리미터 부피에 도달하면 종양을 절제합니다. 2 % propofol 제형을 포함하는 30 게이지 1 밀리리터 인슐린 주사기로 자동 주사기 펌프를 설정하십시오. 유도 챔버에서 3 % 세보 플루 란 또는 이소 플루 란으로 마취를 유도하십시오.
그런 다음 마취 된 마우스를 섭씨 37 도의 가열 패드로 옮기고 코 콘을 사용하여 2-3 % 세보 플루 란 또는 이소 플루 란으로 마취를 유지합니다. 정맥 캐뉼러 동안 필요에 따라 세보 플루 란의 전달을 조정하여 페달 반사의 손실과 분당 100 회 미만의 호흡수로 입증 된 안정적인 마취 깊이를 유지하십시오. 각막의 건조를 막기 위해 눈에 수성 윤활제를 바르고 부 프레 노르 핀 킬로그램 당 0.05 밀리그램을 피하에 주사하십시오.
propofol 기반 전체 정맥 마취를 전달하기 위해, 멸균 폴리 우레탄 카테터에 부착 된 멸균 30 게이지 피하 주사 바늘을 사용하여 측면 꼬리 정맥을 캐뉼레이트합니다. 카테터에 혈액 플래시백으로 올바른 위치를 확인하십시오. 총 정맥 마취를 시작하기 위해 1 분 동안 킬로그램 당 27 밀리그램의 초기 볼 루스로 2 % propofol을 투여하십시오.
세보 플루 란 투여를 중단하십시오. 수술 중 안정적인 마취 깊이를 유지하기 위해 분당 킬로그램 당 2.2-4.0 밀리그램의 속도로 propofol 주입을 유지하십시오. 복부 부위를 면도하고 포비돈 요오드 용액으로 수술 부위를 소독하십시오.
왼쪽 네 번째 유방 지방 패드의 종양보다 1cm 열등한 절개를 만드십시오. 집게와 가위를 사용하여 종양과 왼쪽 사타구니 림프절을 해부하십시오. 루시페라제 태그가 부착된 종양 세포를 사용하는 경우 입증된 대로 측면 꼬리 정맥에 d-루시페린을 주사하고 60초 동안 이미지를 캡처하여 명확한 여백을 얻습니다.
잔류 종양이 확인되면 유방 지방 패드에서 추가 조직을 절제하십시오. 수술 부위에서 지혈이 이루어지면 5-0 나일론 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다. 포비돈 요오드 용액으로 상처를 닦으십시오.
수술이 끝나면 마취를 멈추고 마우스를 가열 패드의 깨끗한 케이지에 넣어 마취에서 회복 할 수 있도록하십시오. 마우스가 정상 경보 상태로 돌아올 때까지 15분마다 마우스를 모니터링합니다. 그런 다음 수술 후 48 시간 동안 12 시간마다 진통제를 모니터링하고 제공하십시오.
원발성 종양 재발 또는 원격 재발 평가의 경우, 생물 발광 이미징 시스템을 사용하여 수술 다음 주에 시작하여 일주일에 한 번 마우스를 모니터링합니다. 생물발광 영상화는 원발성 종양의 절제술 후 폐에서 먼 종양 재발을 확인하기 위해 사용되었다. 이 모델은 수술 전후 기간 동안 발생한 사건을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.
암 수술 24시간 후 프로포폴 하에서, 순환 혈장 사이토카인을 평가하였다. 측면 꼬리 정맥을 빠르게 캐뉼레이션하고 세보플루란 노출 기간을 최소화하는 데 필요한 관행. 세보플루란은 과도한 진정을 방지하기 위해 프로포폴 볼루스를 투여함에 따라 점진적으로 하향 적정되어야 합니다.
이 방법은 심장 수술 또는 패혈증과 같은 심각한 질병의 마우스 모델에서 propofol 마취의 영향을 조사하기 위해 사용될 수 있습니다.
