癌症切除手术中全静脉麻醉的 体内 小鼠模型

该新方案描述了使用丙泊酚麻醉的小鼠手术麻醉。该方法能够研究疾病小鼠模型中的丙泊酚麻醉。该方案允许评估全静脉麻醉，避免使用挥发性麻醉。

该方案可用于探索丙泊酚麻醉如何影响疾病相关结果。例如，在这里，我们评估手术切除肿瘤后的短期和长期癌症结果。首先，在含有10%FBS和200毫摩尔谷氨酰胺的α MEM培养基中稳定转导以表达萤火虫荧光素的66个CL4 Mirai乳腺癌细胞。

将细胞在 37 摄氏度但 5% 二氧化碳下孵育。当细胞达到约80%汇合度时传代培养细胞。当细胞处于对数生长期，在EDTA溶液中滴有两毫升时，提起贴壁细胞并使用血细胞计数器计数细胞。

然后在PBS中稀释细胞，并将稀释的细胞悬液保持在冰上，直到小鼠准备好注射。小鼠完全麻醉后，用一次性酒精棉签擦拭左第四个乳腺脂肪垫区域以准备注射部位。用癌细胞悬浮液填充连接到无菌 27 号皮下注射针头的 25 微升汉密尔顿注射器。

使用镊子提拉并固定皮肤。将1次10次注射到第五个细胞和20微升PBS到距离约1毫米的第四个左乳腺脂肪垫中。如果细胞用荧光素酶标记，则使用0.5毫升胰岛素注射器和30号皮下注射针头在麻醉小鼠的侧尾静脉中注射100微升D-荧光素。

注射两分钟后，将小鼠置于生物发光成像系统中，乳腺脂肪垫朝上并捕获图像10秒钟。成像后，将鼠标放在干净的笼子中，让它从麻醉中恢复。使用卡尺监测原发性肿瘤生长的生长。

计算肿瘤体积并在原发肿瘤达到80至90立方毫米体积时切除肿瘤。使用含有2%丙泊酚制剂的30号1毫升胰岛素注射器设置自动注射泵。在含有百分之三氟烷或异氟烷的诱导室中诱导麻醉。

然后将麻醉的小鼠转移到37摄氏度的加热垫上，并使用鼻锥用2%至3%的七氟烷或异氟烷维持麻醉。在静脉插管期间根据需要调整七氟醚的输送，以保持稳定的麻醉深度，表现为踏板反射丧失和呼吸频率低于每分钟 100 次。在眼睛上涂抹水性润滑剂以防止角膜干燥，然后皮下注射每公斤丁丙诺啡0.05毫克。

为了提供基于丙泊酚的全静脉麻醉，请使用连接到无菌聚氨酯导管的无菌 30 号皮下注射针插管外侧尾静脉。通过血液回气进入导管确认正确放置。在一分钟内给予 2% 的丙泊酚作为每公斤 27 毫克的初始推注，以开始全静脉麻醉。

停止七氟醚给药。将丙泊酚输注保持在每分钟 2.2 至 4.0 毫克/千克的速度，以在手术过程中保持稳定的麻醉深度。剃除腹部区域，并用聚维酮碘溶液对手术区域进行消毒。

在左第四乳腺脂肪垫中做一个低于肿瘤的一厘米切口。使用镊子和剪刀解剖肿瘤和左腹股沟淋巴结。如果使用荧光素酶标记的肿瘤细胞，如图所示在侧尾静脉中注射d-荧光素，并捕获图像60秒以获得清晰的边缘。

如果发现残留肿瘤，请从乳腺脂肪垫上切除其他组织。一旦在手术部位达到止血，使用5-0尼龙缝合线关闭皮肤。用聚维酮碘溶液擦拭伤口。

手术完成后，停止麻醉并将鼠标放在加热垫上的干净笼子中，使其从麻醉中恢复。每 15 分钟监控一次鼠标，直到鼠标恢复正常警觉状态。然后在手术后 48 小时内每 12 小时监测并提供镇痛。

对于原发性肿瘤复发或远处复发评估，每周监测一次小鼠，使用生物发光成像系统在手术后一周开始。采用生物发光成像技术鉴定原发性肿瘤切除术后肺部远处肿瘤复发情况。该模型可用于评估围手术期发生的事件。

在丙泊酚下进行癌症手术后24小时，评估循环血浆细胞因子。快速插管尾静脉和最小化七氟醚暴露持续时间所需的做法。七氟醚应逐渐降低滴定，同时推注丙泊酚以防止过度镇静。

该方法可用于研究丙泊酚麻醉对心脏手术或危重疾病（如败血症）小鼠模型的影响。