هذا هو البروتوكول الأسرع والصحيح لمراقبة تحمض الأمعاء ذبابة الفاكهة مع نتائج قوية وأصيلة. ستساعد هذه الطريقة في تحديد دور تحمض الأمعاء في الكائنات الحية المتعددة. وهذه الظاهرة هي بساطة هذه التقنية هي الميزة الرئيسية.
على هذا النحو ، يمكن استخدامه للكائنات الحية غير النموذجية. يمكن لهذه الطريقة مراقبة إطلاق الحمض للعديد من الأنظمة بما في ذلك خطوط الخلايا و 3D على الثقافات الحية. هذه التقنية بسيطة بأقل جهد ممكن.
يجب إعداد الطعام الذي يحتوي على بروموفينول الأزرق طازجا. بالإضافة إلى ذلك ، في حين لا ينبغي أن تمتد تشريح الأمعاء. ابدأ في الترتيب لفحص مراقبة تحمض الأمعاء مع إعداد طعام الذبابة مع استشعار درجة الحموضة بروموفينول الأزرق أو صبغة BPB.
للقيام بذلك ، قم بإذابة طعام الذبابة في الميكروويف واتركه يبرد حتى يصبح فاترا. أضف ملليلتر واحد من 4٪ BPB إلى ملليلتر واحد من الطعام الفاتر مع بئر الخلط. باستخدام ماصة ، أضف طعام الذبابة الذي يحتوي على BPB إلى نقطة واحدة تبلغ حوالي 200 ميكرولتر في وسط طبق بتري.
بعد ذلك ، اجمع ذبابة الفاكهة غير البكر من صفر إلى يومين من ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر ، واسمح للذباب بالتعافي على طعام وجبة الذرة القياسي. قبل التجربة، تجويع الذباب لمدة 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة في قارورة تحتوي على مناديل مخبرية منقوعة بحوالي ملليلترين من الماء منزوع الأيونات. انقل الذباب الجائع إلى طبق بتري يحتوي على نقاط مفردة من طعام الذباب الطازج ، مع استكماله بنسبة 2٪ BPB ، للسماح للذباب بالعلف لمدة أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة أثناء تعرضه للضوء.
بعد أربع ساعات من جمع الذباب ، ثم المضي قدما في عزل أحشاء الذباب المخدر جراحيا في 1X PBS مع ملقط تحت المجهر ستيريو. احسب عدد الذباب الذي يظهر قوة BPB في الأحشاء ، واحسب النسبة المئوية باستخدام المعادلة. بعد التشريح ، قم بتركيب العينات في PBS على شريحة زجاجية ووضع الشريحة المعدة تحت المجهر.
ثم اضبط التركيز باستخدام IPS. بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإيقاف تشغيل IPS لفتح الغالق للكاميرا. بعد تشريح الأمعاء ، تم العثور على بعض ذبابة الفاكهة الميلانوغاستر الإناث لإنتاج حمض كما هو موضح في اللون الأصفر في CCR من الأمعاء.
في حين أن أمعاء بعض الذباب كانت زرقاء مما يشير إلى فشل الذباب في تحمض أحشائه. في غضون 30 دقيقة ، قام ما يقرب من 20٪ من الذباب بتحمض الأمعاء. بعد ساعة ، أظهرت 40٪ من أمعاء الأمعاء تحمض ، بينما بعد ساعتين إلى ثلاث ساعات من التغذية ، زادت نسبة الأمعاء المحمضة إلى 60 إلى 70٪ تم تحمض ما يقرب من 90 إلى 95٪ من الأمعاء عندما تم تغذية الذباب لمدة أربع ساعات.
لم يلاحظ أي فرق في تحمض الأمعاء لظروفين مختلفتين لدرجة الحرارة. تم تقييم كفاءة بروتوكول تحمض الأمعاء في مختلف أنواع ذبابة الفاكهة. أظهرت جميع الأنواع التي تم اختبارها تحمض الأمعاء القوي ، مما يشير إلى أنه يمكن تطبيق البروتوكول على الكائنات الحية الأخرى.
أهم شيء يجب تذكره ، هو وضع النجم يطير في صفيحة بتري مع الخميرة وبروموفينول الأزرق لمدة أربع ساعات. ستساعد هذه التقنية على فهم البيولوجيا الأساسية والمسار الخلوي المتضمن في تحمض الأمعاء. يجب أن يساعد أيضا في تحديد هدف الدواء لإنشاء الأمراض المتعلقة بتحمض الأمعاء.
