これは、ショウジョウバエの腸内酸性化を堅牢で本物の結果で監視するための最速かつ適切なプロトコルです。この方法は、複数の生物における腸内酸性化の役割を決定するのに役立ちます。そしてこの現象は この技術の単純さが主な利点です。
そのようにして、非モデル生物に対して利用することができる。この方法は、生培養上の細胞株および3Dを含む多くの系の酸放出をモニターすることができる。この手法は、最小限の労力でシンプルです。
ブロモフェノールブルーを含む食品は新鮮に調製する必要があります。さらに、解剖中は腸を伸ばすべきではありません。pH感知ブロモフェノールブルーまたはBPB色素を用いたハエの食物の調製を伴う腸内酸性化モニタリングアッセイのための配置を開始する。
これを行うには、フライフードを電子レンジで溶かし、ぬるま湯になるまで冷まします。1ミリリットルのぬるま湯に4%BPBを1ミリリットル加えます。ピペットを使用して、BPBを含むフライ食品をシャーレの中央にある約200マイクロリットルの単一ドットに加える。
次に、生後0〜2日齢の非処女のショウジョウバエメラノガスターハエを収集し、ハエが標準的なコーンミール食品で回復できるようにします。実験の前に、約2ミリリットルの脱イオン水で浸した実験室用ワイプ組織を含むバイアル中で、ハエを室温で24時間飢えさせた。飢えたハエを、2%BPBを補充した作りたてのハエ食品の単一ドットを含むシャーレに移し、ハエが光にさらされながら室温で4時間餌を採餌できるようにする。
4時間後、ハエを採取し、その後、実体顕微鏡下で鉗子を用いて麻酔をかけられたハエの腸を1X PBSで外科的に単離する。腸内に立っている堅牢なBPBを示すハエの数を数え、式を使用してパーセンテージを計算します。解剖後、PBS中のサンプルをスライドガラスにマウントし、調製したスライドを顕微鏡下に置きます。
次に、IPSを使用してフォーカスを調整します。完了したら、IPSをシャットオフしてカメラのシャッターを開きます。腸郭清に続いて、ショウジョウバエのメラノガスター雌ハエの一部が、腸のCCRにおける黄色によって示されるように酸を生成することが見出された。
いくつかのハエの腸は青かったが、ハエが腸を酸性化できないことを示唆している。30分以内に、ハエの約20%が腸を酸性化しました。1時間後、腸内腸の40%が酸性化を示し、2〜3時間の摂食後、酸性化された腸の割合は60〜70%に増加したハエを4時間給餌すると、腸のほぼ90〜95%が酸性化した。
腸内酸性化に差は認められず、2つの異なる温度条件について観察されなかった。腸内酸性化プロトコールの効率を、様々なショウジョウバエ種において評価した。試験されたすべての種は、堅牢な腸内酸性化を示し、プロトコルが他の生物にも適用可能であることを示唆している。
覚えておくべき最も重要なことは、スターハエを酵母とブロモフェノールブルーでペトリプレートに4時間置くことです。この技術は、腸内酸性化に関与する基本的な生物学および細胞経路を理解するのに役立つであろう。また、腸内酸性化に関連する疾患を引き起こす薬物標的を特定するのにも役立つはずです。
