이것은 견고하고 본격적인 결과로 Drosophila 창자 산성화를 모니터링하는 가장 빠르고 올바른 프로토콜입니다. 이 방법은 다중 유기체에서 창 자 산 성화의 역할을 결정 하는 데 도움이 됩니다. 그리고이 현상은이 기술의 단순함이 주요 장점입니다.
따라서, 비모델 유기체에 활용될 수 있다. 이 방법은 살아있는 배양에 세포주 및 3D를 포함하는 많은 시스템에 대한 산 방출을 모니터링할 수 있다. 이 기술은 최소한의 노력으로 간단합니다.
브로모페놀 블루가 함유된 음식은 신선하게 준비해야 합니다. 또한, 해부 장 스트레칭 해서는 안 됩니다. pH 감지 브로모페놀 블루 또는 BPB 염료와 플라이 푸드의 준비와 함께 창자 산성화 모니터링 분석에 대한 배열을 시작합니다.
이렇게하려면 전자 레인지에 플라이 푸드를 녹여 미지근할 때까지 식힙니다. 미지근한 음식의 1 밀리리터에 4%BPB의 1밀리리터를 잘 섞어 넣습니다. 파이펫을 사용하여 BPB가 함유된 플라이 푸드를 페트리 접시 중앙에 약 200 마이크로리터의 단일 점에 추가합니다.
다음으로, 0에서 이틀 에 비 처녀 여성 Drosophila 멜라노가스터 파리를 수집하고, 파리가 표준 옥수수 식사 음식에 복구 할 수 있도록. 실험 전에, 실온에서 24 시간 동안 파리를 굶어 바닷가에 실온에서 약 2 밀리리터의 탈온화 된 물로 담근 실험실 닦아 조직을 포함하는 유리병에. 굶주림을 가진 파리를 2%BPB로 보충한 갓 준비된 플라이 푸드의 단일 점이 들어 있는 페트리 접시에 파리를 옮기면 파리가 실온에서 4시간 동안 사료를 먹을 수 있도록 합니다.
4 시간 후 파리를 수집 한 다음 스테레오 현미경으로 집게로 1X PBS에서 마취 된 파리의 내장을 외과적으로 분리합니다. 용기에 견고한 BPB가 서 있는 것을 보여주는 플라이 수를 계산하고 방정식을 사용하여 백분율을 계산합니다. 해부 후 PBS의 샘플을 유리 슬라이드에 장착하고 준비된 슬라이드를 현미경 아래에 놓습니다.
그런 다음 IPS를 사용하여 포커스를 조정합니다. 완료되면 IPS를 차단하여 카메라의 셔터를 엽니다. 창 자 해 부 다음, 일부 Drosophila 멜 라 노 가 스터 여성 파리 창 자의 CCR에 노란색 색에 의해 표시 된 산을 생산 하는 것으로 나타났습니다.
일부 파리의 창자는 파장이 내장을 산성화하지 못했다는 것을 암시하는 파란색이었습니다. 30분 이내에 파리의 약 20%가 용기를 산성화했습니다. 한 시간 후, 장내 40%는 산성화를 보였고, 2~3시간 동안 산성화된 내장의 비율은 60~70%로 증가하여 4시간 동안 파리를 먹일 때 장의 90~95%가 산성화되었다.
두 개의 다른 온도 조건에 대 한 창 자 산성화에 차이가 관찰 되었다. 장산성화 프로토콜의 효율은 다양한 드로소필라 종에서 평가되었다. 모든 시험된 종은 강력한 창자 산성화를 보여주었으며, 프로토콜이 다른 유기체에 적용될 수 있음을 시사했습니다.
기억해야 할 가장 중요한 것은, 별이 효모와 브로모페놀 블루를 4시간 동안 페트리 플레이트에 넣는 것입니다. 이 기술은 창 자 산 성화에 관련 된 기본 생물학 및 세포 통로 이해 하는 데 도움이 됩니다. 그것은 또한 창 자 산 성 화와 관련 된 질병을 만들 약물 목표를 식별 하는 데 도움이 해야 합니다.
