זהו הפרוטוקול המהיר והנכון ביותר לניטור החמצת המעיים Drosophila עם תוצאות חזקות ואותנטיות. שיטה זו תסייע לקבוע את התפקיד של החמצת המעיים באורגניזמים מרובים. ותופעה זו היא הפשטות של טכניקה זו היא היתרון העיקרי.
ככזה, זה יכול להיות מנוצל עבור אורגניזמים שאינם מודל. שיטה זו יכולה לפקח על שחרור החומצה עבור מערכות רבות כולל קווי התא ותלת-ממד בתרביות חיות. טכניקה זו היא פשוטה עם מאמץ מינימלי.
מזון המכיל ברומופנול כחול צריך להיות מוכן טרי. בנוסף, בעוד המעי הגס לא צריך להיות מתוח. התחל לארגן את בדיקת ניטור החמצת המעיים עם הכנת מזון זבוב עם pH חישת ברומופנול כחול או צבע BPB.
כדי לעשות זאת, להמיס את מזון זבובים במיקרוגל ולתת לו להתקרר עד פושר. מוסיפים מיליליטר אחד של 4% BPB למיליליטר אחד של מזון פושר עם באר ערבוב. בעזרת פיפטה, מוסיפים את מזון הזבובים המכיל BPB לנקודה אחת של כ-200 מיקרוליטרים במרכז צלחת פטרי.
לאחר מכן, לאסוף אפס עד יומיים נקבה לא בתולה נקבה Drosophila melanogaster זבובים, ולאפשר לזבובים להתאושש על מזון ארוחת תירס סטנדרטי. לפני הניסוי, הרעיבו את הזבובים במשך 24 שעות בטמפרטורת החדר בבקבוקון המכיל רקמת ניגוב מעבדה ספוגה בכשני מיליליטרים של מים שעברו דה-יוניטר. מעבירים זבובים מורעבים לצלחת פטרי המכילה נקודות בודדות של מזון הזבוב הטרי, בתוספת 2% BPB, כדי לאפשר לזבובים לחפש מזון במשך ארבע שעות בטמפרטורת החדר בעודם חשופים לאור.
לאחר ארבע שעות לאסוף את הזבובים, ולאחר מכן להמשיך לבודד בניתוח את המעיים של זבובים מרדימים ב 1X PBS עם מלקחיים תחת מיקרוסקופ סטריאו. ספור את מספר הזבובים המציגים BPB חזק עומד במעיים, וחשב את האחוז באמצעות המשוואה. לאחר הניתוח, הרם את הדגימות ב- PBS על שקופית זכוכית והנח את השקופית המוכנה מתחת למיקרוסקופ.
לאחר מכן התאם את המוקד באמצעות IPS. לאחר שתסיים, כבה את שב"ס כדי לפתוח את התריס למצלמה. לאחר ניתוח המעיים, כמה זבובים נקבות Drosophila melanogaster נמצאו לייצר חומצה כפי שצוין על ידי הצבע הצהוב ב- CCR של המעיים.
בעוד שהמעיים של כמה זבובים היו כחולים מה שמרמז על כישלון של הזבובים כדי להחמיר את המעיים שלהם. בתוך 30 דקות, כ -20% מהזבובים החמיצו את המעיים. לאחר שעה, 40% ממעי המעיים הראו החמצה, ואילו לאחר שעתיים עד שלוש שעות של האכלה, אחוז המעיים החומציים עלה ל -60 עד 70%כמעט 90 עד 95% מהעיים היו חומציים כאשר זבובים הוזנו במשך ארבע שעות.
לא נצפתה הבדל בהחמצת המעיים בשני תנאי טמפרטורה שונים. היעילות של פרוטוקול החמצת המעיים הוערכה במינים שונים של דרוזופילה. כל המינים שנבדקו הראו החמצת מעיים חזקה, דבר המצביע על כך שניתן להחיל את הפרוטוקול על אורגניזמים אחרים.
הדבר החשוב ביותר שיש לזכור, הוא למקם את הכוכב עף לתוך צלחת פטרי עם שמרים וכחול Bromophenol במשך ארבע שעות. טכניקה זו תעזור להבין את הביולוגיה הבסיסית ואת המסלול התאי המעורבים החמצת המעיים. זה גם צריך לעזור לזהות את היעד התרופה כדי ליצור את המחלות הקשורות החמצת המעיים.
