تشريح اليد لأمعاء إليجان هذه هي تقنية قوية ولكنها بسيطة تمكن من التحقيق في جوانب مختلفة من علم الأحياء عن طريق عزل الأنسجة في مجموعات سكانية خاصة بالخلايا. تقنية تشريح الأنسجة الدقيقة هذه سهلة الأداء وتستخدم معدات المختبرات القياسية ، مما يجعلها طريقة قوية ويمكن الوصول إليها للكثيرين. ابدأ بسحب الشعيرات الدموية الزجاجية القياسية التي يبلغ طولها 4 بوصات وقطرها الخارجي 1.2 ملم إلى شكل إبرة حقن باستخدام مجتذب إبرة.
تحضير ما لا يقل عن 5 50 و 100 ميكرومتر ماصات شعرية صغيرة. استخدم الحدادة الدقيقة لتشكيل الماصات الشعرية الدقيقة إما إلى 50 ميكرومتر أو 100 ميكرومتر عن طريق وضع علامة 3 أو 5 علامات على التوالي كما هو موضح بواسطة مسطرة العين الدقيقة تحت العدسة الموضوعية 5X. ثم قم بتثبيت ماصة شعرية دقيقة على أنبوب شفاط الفم.
قم بإعداد حمام M9 واحد وحمام عازل تشريح واحد عن طريق إضافة 2 ملليلتر من M9 في طبق بتري معقم بقطر 35 ملم و 2 ملليلتر من محلول التشريح إلى طبق بتري المعقم الآخر بقطر 35 ملم. أخيرا ، أضف 100 ميكرولتر من ألبومين مصل الأبقار العامل أو محلول BSA إلى كل حمام ، واخلطه عن طريق الدوامة. لتحضير صفيف التشريح ، أضف 150 ميكرولترا من محلول ليفاميزول العامل إلى البئر الأول من شريحة تقعر البئر و 150 ميكرولتر من محلول التشريح إلى البئر الثاني.
أضف 20 ميكرولتر من محلول BSA العامل إلى كل بئر. لتشريح الأمعاء الدومية caenorhabditis elegans CL2122 ، انقل 20 دودة بالغة من وسط نمو الديدان الخيطية أو صفيحة NGM إلى حمام M9 باستخدام معول دودة. ثم انقل جميع الديدان ال 20 من حمام M9 إلى الحمام العازل للتشريح.
الخطوة التالية دفعات من 10 ديدان من الحمام العازل للتشريح إلى البئر الذي يحتوي على محلول الليفاميزول. بمجرد أن تتباطأ حركة الدودة بسرعة ، انقلها من بئر ليفاميزول إلى البئر الذي يحتوي على المخزن المؤقت للتشريح. اسمح للديدان بالبدء في التحرك قليلا في المخزن المؤقت للتشريح جيدا قبل بدء التشريح.
تحت منظار تشريح الفلورسنت ، قم بعمل قطع واحد خلف البلعوم مباشرة أو أمام المستقيم باستخدام إبرة تحت الجلد لإنتاج عدد متساو من النصف الأوسط الأمامي والنصف الخلفي الأوسط من الأمعاء. أثناء الانتظار لمدة دقيقة واحدة تقريبا حتى تنبثق الأمعاء إلى أقصى حد من الجسم ، أضف 50 ميكرولترا من مخزن الاستخلاب إلى البئر للمساعدة في تقليل تدهور الحمض النووي الريبي. لتسهيل قذف الأمعاء ، استخدم ماصة شعرية دقيقة 100 ميكرومتر متصلة بشفاط الفم وارسم الدودة داخل وخارج الماصة.
بمجرد بثق الأمعاء بشكل كاف ، استخدم إبرة تحت الجلد قياس 27 لقطعها بعيدا عن بقية الجسم وأي غدد تناسل متبقية. نضح قسم الأمعاء باستخدام ماصة الشعيرات الدموية الدقيقة ونقلها إلى أنبوب الطرد المركزي الصغير الذي يحتوي على كاشف عزل الحمض النووي. الحفاظ على الأمعاء المعزولة على الجليد وكرر الإجراء للأمعاء المتبقية.
أظهرت هذه الطريقة تشريح وعزل الأمعاء بنجاح. أبلغت الطريقة أيضا عن عزل الحمض النووي الريبي والمراقبة الميكروبية من الأمعاء المعزولة. نظرا لأن ديدان CL2122 تؤوي مروجين معدنيين محددين للأمعاء يندمجان في GFP ، فقد لوحظت الأمعاء على أنها توهج أخضر تحت نطاق تشريح الفلورسنت.
أظهر تشريح الدودة البالغة أمعاء مقذوفة بعد إجراء شق أولي خلف البلعوم مباشرة. بدا التشريح الناجح للجزء المعوي خاليا من الملوثات المرئية مثل الحطام من الغدد التناسلية أو الذبيحة. في المقابل ، أظهر التشريح غير الناجح الغدد التناسلية والذبيحة المرتبطة بالجزء المعوي.
كانت غلة الحمض النووي الريبي من تشريح اليد أكثر كفاءة حيث أسفرت العينة النهائية المكونة من 60 قسما من الأمعاء الكلية عن حوالي 15 نانوجراما من إجمالي الحمض النووي الريبي عالي الجودة. كان تصنيف الديدان وعزل الخلايا المعوية FACS أقل كفاءة لأنها تتطلب مئات الآلاف من الخلايا المعوية للحصول على كميات متناسبة من إجمالي الحمض النووي الريبي. أظهر تضخيم الحمض النووي الجينومي الميكروبي الكلي باستخدام مقايسة الكشف البكتيري الشامل أن العينة النهائية المكونة من 40 قسما من الأمعاء الكلية من المناطق الأمامية والمتوسطة والمتوسطة الخلفية أسفرت عن كمية منخفضة ولكن يمكن اكتشافها تبلغ حوالي 0.009 بيكوجرام من إجمالي الحمض النووي الميكروبي.
أهم شيء يجب تذكره عند تنفيذ هذا الإجراء هو عدم الإفراط في شل الديدان قبل التشريح لأن هذا يمكن أن يمنع قذف الأمعاء القصوى.
