يعمل هذا البروتوكول على مواءمة قياسات معدل ترسيب كرات الدم الحمراء مع أحدث نموذج فيزيائي ويوفر تحليلا أكثر قوة للاختبار. يسمح هذا البروتوكول باستخدام أكثر دقة ومنهجية لمعدل ترسيب كرات الدم الحمراء ، ولكنه يوفر أيضا القيم التقليدية. لقد أثبتنا سابقا أن هذه التقنية ذات صلة خاصة بالاضطرابات التي تقدم قيمة منخفضة لمعدل ترسيب كرات الدم الحمراء.
يمكن استخدامه للفحوصات التشخيصية لمتلازمات كثرة الخلايا العصبية. للبدء ، اجمع الدم في أنابيب EDTA القياسية 9 ملليلتر ، والمصل في أنابيب المصل القياسية 9 ملليلتر. للحصول على الضغط الأمثل لكريات الدم الحمراء المعبأة ، قم بطرد عينات الدم عند 3،000 جم لمدة سبع دقائق على الأقل ، واستنشق المادة الطافية.
الآن إعداد مخاليط من البلازما الذاتية والمصل بنسب محددة. على سبيل المثال ، عند تحضير 2.5 ملليلتر من خليط مصل البلازما 25٪ إلى 75٪ ، أضف 0.625 ملليلتر من البلازما إلى 1.875 ملليلتر من المصل. أعد تعليق الحبيبات في برنامج تلفزيوني أو سائل التعليق المطلوب ، واخلطها برفق بعد تضمين المادة الطافية للغسيل.
كرر ثلاث مرات ، وقم بإجراء الغسيل الأخير بسائل التعليق المطلوب. استخراج الحجم المطلوب من الخلايا المعبأة. قم بمعالجة الخلايا المعبأة كسائل عالي اللزوجة لعينة 4 ملليلتر عند الهيماتوكريت بنسبة 45٪ 1.8 ملليلتر من الخلايا المعبأة في حدود 2.2 ملليلتر من خليط مصل البلازما أو أي سائل آخر مرغوب فيه.
لاستخراج الكمية المطلوبة من العينة لتحديد الهيماتوكريت ، قم ببناء الشعيرات الدموية الدقيقة عن طريق غمر طرفها السفلي في السائل. عندما ترتفع الكمية المطلوبة من العينة في الأنبوب مع شفط الشعيرات الدموية ، قم بتغطية الفتحة لوقف التدفق. بعد ذلك ، قم بإغلاق الشعيرات الدموية بشمع مانع للتسرب ، وضعها في جهاز الطرد المركزي microhematocrit ، وقم بتشغيلها عند 15،000 جم لمدة خمس دقائق ، وفقا لتعليمات الشركة المصنعة.
اقرأ مستوى الهيماتوكريت على الشعيرات الدموية واكتبه كمرجع. الآن ، لتسجيل ترسيب العينة ، قم بإعداد كاميرا ثابتة أمام الحامل حيث سيتم ترك أنابيب ESR في حالة راحة ، واستخدم خلفية بيضاء مضيئة للحصول على تباين أفضل. باستخدام أنابيب Westergren فارغة بدون علامات ، اضبط التركيز ومجال رؤية الكاميرا للحصول على أعلى دقة حيث سيتم وضع العينات.
تأكد من محاذاة حدود الصور في الاتجاهين الرأسي والأفقي. ثم التقط صورة لأنبوب متدرج لاستخراج دقة البكسل. اضبط ضوء الكاميرا ووقت التعرض للحصول على خلفية بيضاء ولكن بدون تشبع.
املأ الحاوية السفلية لأنبوب Westergren بحجم العينات المقابلة لتعليمات الشركة الصانعة ، وأدخلها في الحاوية السفلية ، كما هو موضح من قبل الشركة المصنعة. بمجرد أن يصبح الأنبوب الأول جاهزا ، ضعه في الحامل وابدأ تسجيل الكاميرا. عادة ما يعطي تسجيل صورة واحدة كل دقيقة دقة جيدة للمنحنى الحركي ESR.
تحضير ووضع العينات التالية. تأكد من عدم الوقوف أمام أي عينة عند التقاط صورة. بعد التسجيل ، لاستخراج منحنى ESR باستخدام رمز MATLAB ، حدد منطقة الاهتمام حيث يكون أنبوب واحد فقط مرئيا ، وهو الجزء الموجود تحت أدنى موضع لواجهة البلازما الخالية من خلايا كرات الدم الحمراء ولكن داخل العينة.
قم بتدوين قيم X و Y و W و H ، واستخدم هذه القيم في البرنامج النصي MATLAB. قم بتحويل منطقة اهتمام صورة RGB إلى صورة أو مصفوفة بتدرج الرمادي. عادة ما يكون الجمع بين قنوات الألوان الثلاث فعالا للغاية مع خلفية واضحة.
ثم بيناري الصورة. للحصول على عينة صحية ، عادة ما يعطي استخدام عتبة ARC2 نتيجة ثابتة. بالنسبة للعينات التي تحتوي على نسبة عالية من الهيماتوكريت أو مع بعض انحلال الدم ، قد يكون من الأفضل ضبطها يدويا أو استخدام طريقة تلقائية أخرى ، اعتمادا على التباين الدقيق الذي تم الحصول عليه بين المراحل المختلفة داخل الأنبوب.
احصل على متوسط قيم البكسل ل GR على طول الاتجاه الأفقي. تقلل هذه الخطوة من الضوضاء وتحدد متوسط مخالفات الواجهة المحتملة بكفاءة. قبل حساب الاختلافات ، قم بتنعيم المنحنى بمتوسط متحرك ، خاصة إذا كانت الأنابيب تحتوي على بعض العلامات الأفقية.
ثم حدد موضع الواجهة كنقطة ذات تباين أعلى كثافة ، وكرر لكل صورة وكل عينة. لكل عينة ، استخدم أي برنامج مناسب لحفظ مواضع الواجهة بمرور الوقت بتنسيق مناسب لتناسب النموذج المادي. باستخدام أي برنامج مناسب ، ومعرفة الهيماتوكريت والارتفاع الأولي لعمود الدم ، أوجد قيم وقت التأخير ، والوقت بدون أبعاد ، والكسر الحجمي النهائي المعبأ لكريات الدم الحمراء ، مما يقلل من مجموع الانحرافات المتبقية التربيعية للنموذج المادي.
بمجرد استخراج المنحنى الكمي من الصورة ، احفظ المعلمات الفيزيائية للعينة. لا يزال من الممكن استخراج قيم ESR التقليدية في 30 دقيقة أو ساعة واحدة أو ساعتين من المنحنى كمرجع. تنخفض سرعة الترسيب مع زيادة الهيماتوكريت أو كسور الحجم الأولي.
يصبح ترسيب كريات الدم الحمراء أبطأ عندما ينخفض تركيز الفيبرينوجين. يظهر تباين سرعة الترسيب القصوى المستخرجة كدالة لعينة الهيماتوكريت والقيم التي تم الحصول عليها للوقت بدون أبعاد ، والكسر الحجمي النهائي المعبأ لكرات الدم الحمراء ووقت التأخير. يمكن ملاحظة أن التصحيح يزيل الاعتماد الكلي على الهيماتوكريت الأولي وكذلك معظم تشتت البيانات.
يتم عرض القيم المميزة للمعلمات المستخرجة لتركيزات الفيبرينوجين المختلفة. تزداد سرعة الترسيب الأولية في بداية عملية الترسيب مع زيادة تركيز الفيبرينوجين. يتناقص الوقت المميز للترسيب بدون أبعاد مع زيادة تركيز الفيبرينوجين.
الجزء الحجمي النهائي من كريات الدم الحمراء المترسبة مستقل تقريبا عن تركيز الفيبرينوجين. يتناقص وقت التأخير مع زيادة تركيز الفيبرينوجين ، مما يشير إلى أن التفاعلات الجذابة الأقوى تسرع من إعادة ترتيب هياكل كرات الدم الحمراء الأولية التي تؤدي إلى إنشاء قنوات السوائل. إحدى النقاط الحرجة فيما يتعلق بالحصول على الصورة هي الحصول على خلفية مشرقة موحدة ، أليس كذلك؟
تجنب الظلال الواضحة حول الأنابيب. يمكن استخدام هذه التقنية لتوصيف الأمراض الأخرى المرتبطة بانخفاض معدل ترسيب كرات الدم الحمراء ، مثل فقر الدم المنجلي أو مرض الجبال المزمن.
