이 프로토콜은 적혈구 침강 속도 측정값을 최신 물리적 모델과 일치시키고 테스트에 대한 보다 강력한 분석을 제공합니다. 이 프로토콜은 적혈구 침강 속도의 보다 정확하고 체계적인 사용을 가능하게 하지만, 또한 종래의 값을 제공한다. 우리는 이전에 이 기술이 낮은 적혈구 침강 속도 값을 나타내는 장애와 특히 관련이 있음을 입증했습니다.
neuroacanthocytosis 증후군에 대한 진단 스크리닝에 사용할 수 있습니다. 시작하려면 표준 9 밀리리터 EDTA 튜브에 혈액을 수집하고 표준 9 밀리리터 혈청 튜브에 혈청을 수집하십시오. 포장 된 적혈구의 최적 압축을 위해, 적어도 7 분 동안 3, 000 g에서 혈액 샘플을 원심 분리하고, 상청액을 흡인한다.
이제자가 혈장과 혈청의 혼합물을 결정된 비율로 준비하십시오. 예를 들어, 25 % 내지 75 % 혈장 혈청 혼합물 2.5 밀리리터를 제조 할 때, 혈청 1.875 밀리리터에 혈장 0.625 밀리리터를 첨가한다. 펠릿을 PBS 또는 원하는 현탁액에 재현탁하고 세척을 위해 상청액을 포함시킨 후 부드럽게 혼합합니다.
세 번 반복하고 원하는 현탁액으로 마지막 세척을 수행하십시오. 필요한 양의 패킹된 셀을 추출합니다. 45%의 헤마토크릿에서 4밀리리터 샘플에 대해 고점도 액체로 포장된 세포를 처리혈장 혈청 혼합물 또는 기타 원하는 액체의 2.2밀리리터 이내에 1.8밀리리터의 포장된 세포를 현탁합니다.
헤마토크릿 측정에 필요한 양의 샘플을 추출하려면 하단 팁을 액체에 담가 미세헤마토크릿 모세관을 만듭니다. 모세관 흡입으로 튜브에서 필요한 양의 샘플이 상승하면 개구부를 덮어 흐름을 멈춥니다. 다음으로, 밀봉 왁스로 모세관을 밀봉하고, 미세 헤마토크릿 원심 분리기에 넣고, 제조자의 지시에 따라 5 분 동안 15, 000 g에서 작동시킨다.
모세관의 헤마토크릿 수준을 읽고 참고용으로 기록해 두십시오. 이제 샘플의 침전을 기록하려면 ESR 튜브가 정지 상태로 유지될 홀더 앞에 안정적인 카메라를 설치하고 더 나은 대비를 위해 조명이 켜진 흰색 배경을 사용합니다. 표시가 없는 빈 Westergren 튜브를 사용하여 카메라의 초점과 시야를 설정하여 샘플을 배치할 위치에 가장 높은 해상도를 얻습니다.
그림의 테두리가 수직 및 수평 방향으로 정렬되어 있는지 확인합니다. 그런 다음 크기가 조정된 튜브의 사진을 찍어 픽셀 해상도를 추출합니다. 카메라의 조명과 노출 시간을 흰색 배경으로 설정하지만 채도는 설정하지 않습니다.
Westergren 튜브의 하단 용기에 제조업체의 지침에 해당하는 샘플의 부피를 채우고 제조업체가 표시한대로 하단 용기에 삽입하십시오. 첫 번째 튜브가 준비되면 홀더에 넣고 카메라 녹화를 시작합니다. 1분에 한 장의 사진을 녹화하면 일반적으로 ESR 운동 곡선의 좋은 해상도를 얻을 수 있습니다.
다음 샘플을 준비하고 배치하십시오. s에 서지 마십시오.amp사진을 찍을 때. 기록 후 MATLAB 코드를 사용하여 ESR 곡선을 추출하려면 하나의 튜브만 보이는 관심 영역, 즉 적혈구 cell-free 혈장 계면의 가장 낮은 위치 아래에 있지만 샘플 내에 있는 부분을 선택합니다.
X, Y, W, H의 값을 기록하고 MATLAB 스크립트에서 이 값을 사용합니다. RGB 그림의 관심 영역을 회색 음영 그림 또는 행렬로 변환합니다. 일반적으로 세 가지 색상 채널을 결합하는 것은 선명한 배경에서 매우 효율적입니다.
그런 다음 그림을 이진화하십시오. 건강한 샘플의 경우 ARC2 임계값을 사용하면 일반적으로 일관된 결과를 얻을 수 있습니다. 헤마토크릿이 높거나 용혈이 심한 샘플의 경우 튜브 내부의 다양한 상 사이에서 얻은 정확한 대비에 따라 수동으로 조정하거나 다른 자동 방법을 사용하는 것이 더 나을 수 있습니다.
수평 방향에 따른 GR의 픽셀 값의 평균을 구합니다. 이 단계는 노이즈를 최소화하고 가능한 인터페이스 불규칙성을 효율적으로 평균화합니다. 변동을 계산하기 전에, 특히 튜브에 수평 표시가 있는 경우 이동 평균으로 곡선을 매끄럽게 합니다.
그런 다음 인터페이스 위치를 강도 변화가 가장 큰 지점으로 식별하고 각 그림과 각 샘플에 대해 반복합니다. 각 샘플에 대해 적절한 소프트웨어를 사용하여 시간 경과에 따른 인터페이스의 위치를 물리적 모델에 맞는 적절한 형식으로 저장합니다. 적절하게 맞는 소프트웨어를 사용하여 헤마토크릿과 혈주의 초기 높이를 알고 지연 시간, 무차원 시간 및 적혈구의 최종 충전 부피 분율 값을 찾아 물리적 모델에 대한 잔류 편차 제곱의 합을 최소화합니다.
그림에서 정량적 곡선이 추출되면 샘플의 물리적 매개변수를 저장합니다. 30분, 1시간 또는 2시간의 기존 ESR 값은 참조를 위해 곡선에서 추출할 수 있습니다. 침강 속도는 헤마토크릿 또는 초기 부피 분율이 증가함에 따라 감소합니다.
적혈구의 침전은 피브리노겐의 농도가 감소하면 느려집니다. 추출된 최대 침강 속도의 변화는 시료 헤마토크릿의 함수로서 무차원 시간, 적혈구의 최종 충전 부피 분율 및 지연 시간 동안 얻어진 값으로서 보여진다. 보정은 초기 헤마토크릿에 대한 전반적인 의존성과 대부분의 데이터 분산을 제거한다는 것을 알 수 있습니다.
다양한 피브리노겐 농도에 대해 추출된 파라미터의 물성값이 도시되어 있다. 침강 과정 초기의 초기 침강 속도는 피브리노겐 농도가 증가함에 따라 증가합니다. 침전의 무차원 특성 시간은 피브리노겐 농도가 증가함에 따라 감소합니다.
침전된 적혈구의 최종 부피 분율은 피브리노겐 농도와 거의 무관합니다. 지연 시간은 피브리노겐 농도가 증가함에 따라 감소하며, 이는 더 강한 인력 상호 작용이 유체 채널의 확립으로 이어지는 초기 적혈구 구조의 재배열을 가속화한다는 것을 나타냅니다. 이미지 획득과 관련하여 중요한 점 중 하나는 균일한 밝은 배경을 갖는 것입니다.
튜브 주위에 뚜렷한 그림자를 피하십시오. 이 기술은 겸상 적혈구 빈혈이나 만성 산병과 같은 낮은 적혈구 침강 속도와 관련된 다른 질병의 특성화에 사용될 수 있습니다.
