פרוטוקול זה מיישר את מדידות קצב שקיעת כדורית הדם עם המודל הפיזיקלי העדכני ביותר ומספק ניתוח חזק יותר של הבדיקה. פרוטוקול זה מאפשר שימוש מדויק ושיטתי יותר בקצב שקיעת כדורית הדם, אך גם מספק את הערכים המקובלים. בעבר הוכחנו כי טכניקה זו רלוונטית במיוחד להפרעות המציגות ערך שקיעת דם אריתרוציטים נמוך.
זה יכול לשמש עבור הקרנות אבחון עבור תסמונות neuroacanthocytosis. כדי להתחיל, לאסוף את הדם בצינורות EDTA סטנדרטיים של 9 מיליליטר, ואת הסרום בצינורות סרום סטנדרטיים של 9 מיליליטר. לקבלת דחיסה אופטימלית של אריתרוציטים ארוז, צנטריפוגה דגימות הדם ב 3, 000 גרם לפחות שבע דקות, ולשאוף supernatant.
עכשיו להכין תערובות של פלזמה אוטולוגית סרום עם פרופורציות קבועות. לדוגמה, בעת הכנת 2.5 מיליליטר של תערובת סרום פלזמה 25% עד 75%, להוסיף 0.625 מיליליטר של פלזמה ל 1.875 מיליליטר של סרום. יש להשהות מחדש את הגלולה ב-PBS או בנוזל המרחף הרצוי, ולערבב בעדינות לאחר הכללת הסופרנאטנט לשטיפה.
חזרו על הפעולה שלוש פעמים, ובצעו את השטיפה האחרונה עם נוזל ההרחיה הרצוי. חלץ את הנפח הנדרש של תאים ארוזים. עבד את התאים הארוזים כנוזל צמיג מאוד עבור דגימה של 4 מיליליטר בהמטוקריט של 45% להשהות 1.8 מיליליטר של תאים ארוזים בתוך 2.2 מיליליטר של תערובת סרום פלזמה או כל נוזל רצוי אחר.
כדי לחלץ את כמות הדגימה הנדרשת לקביעת המטוקריט, לבנות את נימי microhematocrit על ידי טבילת הקצה התחתון שלה בנוזל. כאשר כמות הדגימה הנדרשת עולה בצינור עם יניקה נימית, לכסות את הפתח כדי לעצור את הזרימה. לאחר מכן, לאטום את הנימים עם שעווה איטום, מניחים אותם בצנטריפוגה microhematocrit, ולהפעיל אותם ב 15, 000 גרם במשך חמש דקות, על פי הוראות היצרן.
קרא את רמת המטוקריט על הנימים ולרשום אותו לעיון. כעת, כדי לתעד את שקיעת הדגימה, הציבו מצלמה יציבה מול המחזיק במקום שבו צינורות ה-ESR יישארו במנוחה, והשתמשו ברקע לבן ומואר לניגודיות טובה יותר. באמצעות שפופרות Westergren ריקות ללא סימונים, הגדר את המיקוד ואת שדה הראייה של המצלמה כדי לקבל את הרזולוציה הגבוהה ביותר שבה ימוקמו הדגימות.
ודא שגבולות התמונות מיושרים לכיוונים אנכיים ואופקיים. לאחר מכן צלם תמונה של צינור שקנה המידה שלו השתנה כדי לחלץ את רזולוציית הפיקסל. הגדר את האור ואת זמן החשיפה של המצלמה כך שיהיה רקע לבן אך ללא רוויה.
מלא את המיכל התחתון של צינור Westergren עם נפח הדגימות המתאים להוראות היצרן, והכנס אותם במיכל התחתון, כפי שצוין על ידי היצרן. ברגע שהצינור הראשון מוכן, הניחו אותו במחזיק והתחילו להקליט את המצלמה. הקלטת תמונה אחת בכל דקה בדרך כלל נותנת רזולוציה טובה של העקומה הקינטית ESR.
הכינו והניחו את הדגימות הבאות. הקפד לא לעמוד לפני כל דגימה בעת צילום תמונה. לאחר ההקלטה, כדי לחלץ את עקומת ESR באמצעות קוד MATLAB, בחר אזור עניין שבו רק צינור אחד גלוי, החלק הממוקם תחת המיקום הנמוך ביותר של ממשק פלזמה ללא תאי אריתרוציטים אך בתוך הדגימה.
רשום לעצמך את הערכים של X, Y, W ו- H והשתמש בערכים אלה בסקריפט MATLAB. המר את אזור העניין של תמונת RGB לתמונה או מטריצה בגווני אפור. בדרך כלל, שילוב שלושת ערוצי הצבע יעיל מאוד עם רקע ברור.
לאחר מכן בצע בינאריזציה של התמונה. עבור דגימה בריאה, שימוש בסף ARC2 בדרך כלל נותן תוצאה עקבית. עבור דגימות עם המטוקריט גבוה או עם קצת המוליזה, ייתכן שעדיף להתאים אותו ידנית או להשתמש בשיטה אוטומטית אחרת, בהתאם לניגודיות המדויקת המתקבלת בין השלבים השונים בתוך הצינור.
קבל את הממוצע של ערכי הפיקסלים של GR לאורך הכיוון האופקי. שלב זה ממזער את הרעש וממוצע ביעילות את אי הסדירות האפשרית בממשק. לפני חישוב הווריאציות, החלק את העקומה עם ממוצע נע, במיוחד אם הצינורות מכילים כמה סימונים אופקיים.
לאחר מכן זהה את מיקום הממשק כנקודה עם שונות העוצמה הגבוהה ביותר, וחזור על הפעולה עבור כל תמונה וכל דגימה. עבור כל מדגם, השתמש בכל תוכנה מתאימה כדי לשמור את המיקומים של הממשק לאורך זמן בפורמט מתאים כדי להתאים את המודל הפיזי. באמצעות כל תוכנה מתאימה, לדעת את המטוקריט ואת הגובה ההתחלתי של עמודת הדם, למצוא את הערכים של זמן השהיה, הזמן חסר הממד, ואת חלק נפח ארוז הסופי של אריתרוציטים, אשר למזער את סכום סטיות שיורית בריבוע עבור המודל הפיזי.
לאחר חילוץ העקומה הכמותית מהתמונה, שמור את הפרמטרים הפיזיים של המדגם. ערכי ESR מסורתיים של 30 דקות, שעה או שעתיים עדיין ניתנים לחילוץ מהעקומה לצורך הפניה. מהירות השקיעה פוחתת עם הגדלת המטוקריט או שברי נפח התחלתיים.
שקיעת אריתרוציטים הופכת איטית יותר כאשר ריכוז הפיברינוגן פוחת. מוצגת וריאציה של מהירות השקיעה המקסימלית המופקת כפונקציה של המטוקריט הדגימה וערכים המתקבלים עבור הזמן חסר הממד, חלק הנפח הארוז הסופי של אריתרוציטים וזמן ההשהיה. ניתן היה לראות כי התיקון מסיר את התלות הכוללת בהמטוקריט הראשוני וכן את רוב פיזור הנתונים.
מוצגים ערכים אופייניים של הפרמטרים שחולצו עבור ריכוזי פיברינוגן שונים. מהירות השקיעה הראשונית בתחילת תהליך השקיעה עולה עם עלייה בריכוז הפיברינוגן. הזמן האופייני חסר הממדים של שקיעה פוחת עם הגדלת ריכוז הפיברינוגן.
חלק הנפח הסופי של אריתרוציטים משוקעים הוא כמעט בלתי תלוי בריכוז פיברינוגן. זמן העיכוב פוחת עם הגדלת ריכוז הפיברינוגן, מה שמצביע על כך שאינטראקציות אטרקטיביות חזקות יותר מאיצות את הסידור מחדש של מבני אריתרוציטים ראשוניים שמובילים להקמת ערוצי נוזלים. אחת הנקודות הקריטיות לגבי רכישת תמונה היא שיהיה רקע בהיר אחיד, נכון?
הימנע מצללים בולטים סביב הצינורות. הטכניקה יכולה לשמש לאפיון מחלות אחרות הקשורות לשקיעת דם אריתרוציטית נמוכה יותר, כגון אנמיה חרמשית או מחלת הרים כרונית.
