توفر طريقة التوحيد القياسي لمقياس التدفق الخلوي نهجا مجديا للاعتماد المتبادل لنتائج المختبر وتضمن اتساق النتائج مع المشاريع البحثية عبر مراكز متعددة. طريقة تقليل استهلاك الوقت سهلة التنفيذ ، وهي مجهزة لأتمتة وتحليل القالب ، ويمكن أن تقلل بشكل كبير من متطلبات تحليل البيانات. ابدأ في إنشاء تكوين جديد في برنامج مقياس الخلايا A ، من مختبر النقل ، بالنقر فوق زر مقياس الخلايا ، واختيار تكوينات العرض.
انقر بزر الماوس الأيمن فوق مجلد التكوينات الأساسي في قائمة التكوين ، واختر مجلدا جديدا وأعد تسميته. بعد ذلك ، قم بإنشاء تكوين جديد بالنقر بزر الماوس الأيمن فوق التكوين الأساسي ونسخه. انقر بزر الماوس الأيمن فوق المجلد الجديد والصق التكوين الأساسي قبل إعادة تسمية التكوين الجديد ، نقل الطريقة الموحدة "اسحب اسم المعلمة ، مثل ، FETC من قائمة المعلمات ، إلى الكاشف المناسب 530/30 ، وقم أيضا بتحرير معلمات إضافية للتكوين الجديد.
لتوحيد التجربة في مختبر النقل ، قم بإجراء فحص أداء باستخدام إعداد مقياس الخلايا A هذا وتتبع الخرزات للتحقق من أن مقياس الخلايا A يعمل بشكل جيد. انقر بزر الماوس الأيمن فوق إعدادات cytometer A في نافذة متصفح البرنامج وقم بإنشاء ورقة عمل عن طريق تحديد إعدادات التطبيق. ثم استخدم عينة غير ملوثة لضبط أنبوب مضاعف الصورة ، أو الفولتية PMT ، لمنطقة التشتت الأمامية ، أو FSC ، ومنطقة التشتت الجانبي ، أو SSC ، وجميع معلمات التألق.
احفظ إعدادات التطبيق بالنقر بزر الماوس الأيمن فوق إعدادات مقياس الخلايا للتجربة وتحديد إعدادات التطبيق. لإضافة عناصر التحكم في التعويض تلقائيا، انقر على زر التجربة وحدد قائمة إعداد التعويض، قبل تحديد إنشاء عناصر التحكم في التعويض. تسجيل البيانات لجميع حبات التحكم في التعويض.
بمجرد الانتهاء من ذلك ، انقر فوق التجربة وحدد إعداد التعويض ، واحسب التعويض تلقائيا ، قبل تسجيل البيانات لعناصر التحكم الملطخة بخلية واحدة. استخدم CD45 RAA APC لتعديل قيمة التعويض من R7-18 إلى 15٪ APC ، واستخدم CD19 BB700 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 14٪ BB700 ، واستخدم CD8 R7-18 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 60٪ R7-18. بعد تسجيل البيانات الخاصة بخرز CST ، قم بإنشاء ورقة عمل عالمية لقالب القيمة المستهدفة للخرز اللامع CST ، بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بتشغيل العينات على صفيف مقياس التدفق الخلوي وجمع 25،000 خلية لمفاوية.
إنشاء ورقة عمل عمومية لقالب التحليل للعينات وحفظ القالب التجريبي على مقياس الخلايا A.Export القالب التجريبي باستخدام القرص المضغوط. لنقل القالب التجريبي إلى مقياس الخلايا B في مختبر الاختبار ، قم بإجراء فحص أداء باستخدام حبات CST للتحقق من أن مقياس الخلايا B يعمل بشكل جيد. قم باستيراد القالب التجريبي من مقياس الخلايا A وإنشاء تجربة لمقياس الخلايا B باستخدام القالب.
باستخدام نفس المجموعة من حبات CST ، اضبط جهد معلمة الفلورسنت لكل قناة مضان لتتناسب مع أداة MFI السابقة. إذا لزم الأمر ، اضبط جهد FSC باستخدام العينة غير الملوثة. انقر بزر الماوس الأيمن على إعدادات مقياس الخلايا التجريبي وحدد إعدادات التطبيق لحفظ إعدادات التطبيق.
بعد ذلك ، قم بتعديل قيمة التعويض من R7-18 إلى 15٪ APC باستخدام CD45 RA APC. استخدم CD19 BB700 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 24٪ BB700. واستخدم CD8 R7-18 لتعديل قيمة تعويض APC H7 إلى 60٪ R7-18.
بعد تعديل قيمة التعويض ، قم بتشغيل العينات على مقياس التدفق الخلوي B وجمع 25،000 خلية لمفاوية. في ورقة عمل عالمية لقالب القيمة الهدف لإعداد مقياس الخلايا وتتبعه ، أو حبات CST الساطعة ، تم الحصول على مخططات الرسم البياني ل 10 قنوات مضان ، وتم عرض القيمة المستهدفة لكل معلمة من خلال إظهار الوسيط داخل بوابات الرسم البياني. أظهرت المخططات النقطية للعينة التي تم الحصول عليها باستخدام مقياس الخلايا A و B بعد توحيد الأجهزة ، اتساق البيانات بين الأدوات المختلفة باستخدام قالب التحليل التلقائي.
لم يلاحظ أي فرق كبير عند مقارنة النتائج من ست عينات عبر نموذجين مختلفين للأداة. اكتسبت نتائج 15 مجموعة فرعية لمفاوية تم الحصول عليها من أدوات مختلفة باستخدام الطريقة الموحدة بيانات قابلة للمقارنة للغاية. يعد نفس اسم التكوين وإنشاء القالب وجعل قيم التكنولوجيا البيئية لخرز الأمان في أدوات مختلفة خطوات حاسمة في هذا البروتوكول.
