لا يمكن استخدام هذا النموذج لاستكشاف التسبب في ACD فحسب ، بل ينطبق أيضا على التطور قبل السريري للطرق العلاجية الجديدة ، والتي لها معنى مهم. هذا نموذج حيواني مستقر وفعال مع العديد من المزايا ، مثل فترة تجريبية قصيرة ، وعملية سهلة ، وأعراض واضحة ، ومعدل نجاح مرتفع. بروتوكولنا التجريبي مفصل للغاية وسهل التشغيل.
تأكد من اتباع كل خطوة من خطوات البروتوكول بشكل صحيح. قبل البدء في النمذجة ، تأقلم الفئران مع البيئة لمدة أسبوع واحد مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. في يوم النمذجة ، باستخدام مصباح الأشعة فوق البنفسجية و 75 ٪الكحول ، وتنظيف وتطهير البيئة وكونترتوب.
ضع الماء والصابون على بطن الفئران باستخدام قطعة قطن ، وحلق المنطقة في اتجاه نمو الشعر بشفرة أو ماكينة حلاقة. وزن الماوس ومقارنة تغيرات الوزن بين كل مجموعة. قبل إجراء تحفيز حساسية البطن ، تأكد من الشفاء التام لأي إصابة طفيفة في جلد بطن الفأر الناجم عن الحلاقة.
تحضير محلول DNFB 0.5٪ وتخفيفه بخليط الأسيتون إلى زيت الزيتون بنسبة 4 إلى 1. باستخدام مسدس ماصة ، قم بالنفخ والخلط 20 مرة لخلط محلول DNFB جيدا. ضع 25 ميكرولترا من محلول DNFB 0.5٪ على منتصف منطقة حلاقة البطن باستخدام ماصة ، وانتشر برفق مع الجانب الأملس من طرف الماص لتفريقه بشكل موحد.
بعد 30 ثانية من تحفيز DNFB ، ضع الماوس في قفص فارغ بدون فراش لمنع الماوس من فرك محلول DNFB. عندما يجف المحلول تماما ، أعد الماوس إلى قفصه الأصلي مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. لتحفيز حساسية الأذن ، قم بتوجيه جسم الماوس واجعل الحد الخارجي للأذن متجها لأسفل لمنع المحلول من دخول قناة الأذن أثناء تحفيز DNFB.
في اليومين 4 و 10 ، باستخدام أنبوب ، ضع 20 ميكرولترا من السيارة ، أو محلول DNFB بنسبة 0.2٪ ببطء وبشكل موحد على السطح الداخلي للأذن الأيسر ، وقم بتوزيع المحلول برفق باستخدام الجانب الأملس من الماصب. اترك الأذن اليمنى دون علاج. انتظر حتى يجف محلول DNFB ثم ضع الماوس مرة أخرى في القفص.
بعد تحفيز حساسية البطن والأذن ، قم بوزن الفئران كل يومين بدءا من اليوم الأول. قارن وزن كل فأر باليوم صفر ، وقم بتقييم تأثير ACD على وزن جسم الفئران مع تغير الوزن. التقط صورا عالية الدقة لآذان الفأر لتسجيل الأعراض السريرية لاضطراب ACD كل يومين ، بدءا من اليوم الأول.
باستخدام ملاقط الورنية ، قم بقياس سمك الأذن في نفس الوقت كل يوم للحصول على نتائج دقيقة. أوقف الفرجار ذو الورنية من الاستمرار في التثبيت الداخلي عندما يكون هناك انسداد طفيف لمنع تلف الأنسجة في أذن الفأر. حافظ على الموضع ثابتا وسجل البيانات لكلتا الأذنين.
سجل متوسط البيانات الثلاثة وتقييم تورم الأذن بالميكرومتر. لتقييم درجة التورم الالتهابي في اليوم 11 ، قم بإعداد محلول صبغة Evans Blue بنسبة 0.5٪ وقم بتخفيفه باستخدام برنامج تلفزيوني. لشل حركة الماوس باستخدام مثبت ، افتح الغطاء ، وأمسك ذيل الماوس ، واجعل رأس الماوس يواجه المثبت ، واسمح للماوس بالصعود غريزيا إلى المثبت.
قم بتغطية الغطاء. اجعل ذيل الماوس يخرج من الفتحة الموجودة على الغطاء واضبط طول المثبت لفضح ذيل الماوس بالكامل. امسح الذيل بشكل متكرر باستخدام كرة قطنية كحولية ، أو انقعها في ماء دافئ لمدة 30 ثانية ، واضغط برفق على جذر الذيل لملئه ، وقم بتوسيع الأوردة على كلا الجانبين.
قم بحقن محلول Evans Blue Dye ببطء في وريد ذيل الفأر باستخدام إبرة أنسولين 1 مم تحت تشعيع مصدر ضوء بارد. انتظر لمدة 15 دقيقة لالتقاط صور لآذان الماوس. أظهرت آذان الفئران من مجموعة DNFB أعراضا سريرية واضحة مماثلة ل ACD ، مع المناطق الحساسة التي تظهر الأعراض النموذجية للاحمرار والجفاف والتآكل والنضح.
ومع ذلك ، فإن إعطاء الأذن للماء النقي أو التحكم في المذيبات لم ينتج عنه أي أعراض مشابهة لمجموعة DNFB. في مجموعة DNFB ، مقارنة بالأذن اليمنى غير المعالجة ، زاد سمك الأذن اليسرى بشكل ملحوظ بعد تحفيز DNFB. لم يكن هناك فرق كبير في مجموعات التحكم والمركبات.
تحولت الأذن اليسرى لفئران مجموعة DNFB إلى اللون الأزرق الداكن بعد حقن صبغة Evans Blue ، والتي كانت مختلفة بصريا عن الأذن اليمنى. كانت الآذان اليسرى واليمنى للفئران في مجموعات التحكم والمركبات من نفس اللون تقريبا. تباطأت زيادة وزن الفئران قليلا بسبب DNFB ، أو التحفيز البسيط للمركبة ، ولكنها لم تؤد إلى فقدان الوزن بشكل كبير.
أدى التحفيز المتكرر DNFB في أذن الفأر إلى تضخم الطحال وزيادة مؤشر الطحال. في المقابل ، لم يتغير مؤشر الطحال للفئران في مجموعة المركبات بشكل كبير. تأكد من خلط محلول DINFB بالكامل وتطبيقه بالتساوي على أذن الماوس دون التدفق إلى قناة الأذن.
هذا هو مفتاح نجاح النمذجة.
