Bu model sadece AKB'nin patogenezini araştırmak için değil, aynı zamanda önemli bir anlamı olan yeni terapötik yöntemlerin klinik öncesi evrimi için de uygulanabilir. Bu, kısa bir deney süresi, kolay kullanım, belirgin semptomlar ve yüksek başarı oranı gibi birçok avantajı olan istikrarlı ve verimli bir hayvan modelidir. Deneysel protokolümüz çok ayrıntılı ve kullanımı kolaydır.
Protokolün her adımını doğru bir şekilde takip ettiğinizden emin olun. Modellemeye başlamadan önce, fareleri yiyecek ve suya serbest erişim ile bir hafta boyunca çevreye alıştırın. Modelleme gününde, ultraviyole lamba ve% 75 alkol kullanarak, çevreyi ve tezgahları temizleyin ve dezenfekte edin.
Bir pamuklu çubuk kullanarak farelerin karnına sabunlu su uygulayın ve bölgeyi bir bıçak veya tıraş makinesi ile saç büyümesi yönünde tıraş edin. Fareyi tartın ve her grup arasındaki ağırlık değişikliklerini karşılaştırın. Karın hassasiyeti stimülasyonu yapmadan önce, tıraştan kaynaklanan fare karın derisindeki herhangi bir küçük yaralanmanın tamamen iyileşmesini sağlayın.
% 0.5 DNFB çözeltisi hazırlayın ve 4 ila 1 oranında aseton-zeytinyağı karışımı ile seyreltin. Bir pipet tabancası kullanarak, DNFB çözeltisini iyice karıştırmak için 20 kez üfleyin ve karıştırın. 25 mikrolitre %0,5 DNFB çözeltisini karın tıraş alanının ortasına bir pipetter ile uygulayın ve pipetter ucunun pürüzsüz tarafıyla hafifçe yayınlayarak eşit şekilde dağıtın.
30 saniyelik DNFB stimülasyonundan sonra, farenin DNFB çözeltisini ovalamasını önlemek için fareyi yataksız boş bir kafese yerleştirin. Çözelti tamamen kuruduğunda, fareyi yiyecek ve suya serbest erişim ile orijinal kafesine geri getirin. Kulak hassaslaştırma stimülasyonu için, fare gövdesini yönlendirin ve DNFB stimülasyonu sırasında çözeltinin kulak kanalına girmesini önlemek için kulak kepçesinin dış kenarlığını aşağı bakacak şekilde yapın.
4. ve 10. günlerde, bir pipetleyici kullanarak, aracın 20 mikrolitresini veya %0,2 DNFB çözeltisini sol kulak kepçesinin iç yüzeyine yavaşça ve eşit bir şekilde uygulayın ve pipetleyicinin pürüzsüz tarafını kullanarak çözeltiyi yavaşça dağıtın. Sağ kulağı tedavi edilmeden bırakın. DNFB çözeltisi kuruyana kadar bekleyin ve fareyi tekrar kafese yerleştirin.
Karın ve kulak hassasiyeti stimülasyonundan sonra, fareleri ilk günden başlayarak her iki günde bir tartın. Her farenin ağırlığını sıfır günüyle karşılaştırın ve ağırlık değiştikçe ACD'nin farelerin vücut ağırlığı üzerindeki etkisini değerlendirin. İlk günden başlayarak her iki günde bir ACD klinik semptomlarını kaydetmek için fare kulaklarının yüksek çözünürlüklü fotoğraflarını çekin.
Vernier kaliperlerini kullanarak, doğru sonuçlar için kulak kepçesi kalınlığını her gün aynı saatte ölçün. Fare kulağında doku hasarını önlemek için hafif bir tıkanıklık olduğunda vernier kaliperlerinin içe doğru sıkıştırmaya devam etmesini durdurun. Konumu sabit tutun ve her iki kulak için verileri kaydedin.
Üç verinin ortalamasını kaydedin ve kulak şişmesini mikrometre cinsinden değerlendirin. 11. günde enflamatuar şişlik derecesini değerlendirmek için,% 0.5 Evans Blue boya çözeltisi hazırlayın ve PBS ile seyreltin. Fareyi bir fiksatörle hareketsiz hale getirmek için kapağı açın, fare kuyruğunu tutun, farenin kafasını fiksatöre bakacak şekilde yapın ve farenin içgüdüsel olarak fiksatöre tırmanmasına izin verin.
Kapağı kapatın. Fare kuyruğunun kapaktaki delikten çıkmasını sağlayın ve tüm fare kuyruğunu ortaya çıkarmak için fiksatörün uzunluğunu ayarlayın. Kuyruğu alkollü bir pamuk topu ile tekrar tekrar silin veya 30 saniye boyunca ılık suya batırın ve doldurmak için kuyruğun kökünü hafifçe sıkıştırın ve her iki taraftaki damarları genişletin.
Evans Blue Boya çözeltisini, soğuk bir ışık kaynağının ışınlaması altında 1 mm'lik bir insülin iğnesi kullanarak fare kuyruğu damarına yavaşça enjekte edin. Fare kulaklarının fotoğraflarını çekmek için 15 dakika bekleyin. DNFB grubunun fare kulakları, ACD ile karşılaştırılabilir belirgin klinik semptomlar gösterdi ve hassas bölgeler tipik kızarıklık, kuruluk, erozyon ve eksüdasyon belirtileri gösterdi.
Bununla birlikte, saf suyun veya çözücü kontrolünün kulağa uygulanması, DNFB grubuna benzer herhangi bir semptom üretmedi. DNFB grubunda, tedavi edilmeyen sağ kulağa kıyasla, DNFB stimülasyonundan sonra sol kulağın kalınlığı önemli ölçüde artmıştır. Kontrol ve araç gruplarında anlamlı fark saptanmadı.
DNFB grubu farelerin sol kulağı, sağ kulaktan görsel olarak farklı olan Evans Blue boyasının enjeksiyonundan sonra koyu maviye döndü. Kontrol ve araç gruplarındaki farelerin sol ve sağ kulakları yaklaşık olarak aynı renkteydi. Fare ağırlık artışı, DNFB veya basit araç stimülasyonu ile hafifçe yavaşlatıldı, ancak önemli kilo kaybına neden olmadı.
Fare kulağında tekrarlanan DNFB stimülasyonu, dalak büyümesine ve dalak indeksinde artışa neden oldu. Buna karşılık, araç grubundaki farelerin dalak indeksi önemli ölçüde değişmedi. DINFB çözeltisinin tamamen karıştırıldığından ve kulak kanalına akmadan fare kulağına eşit şekilde uygulandığından emin olun.
Bu, modellemenin başarısının anahtarıdır.
