이 모델은 ACD의 발병기전을 탐색하는 데 사용할 수 있을 뿐만 아니라 중요한 의미를 갖는 새로운 치료 방법의 전임상 진화에도 적용할 수 있습니다. 짧은 실험 기간, 쉬운 조작, 명백한 증상, 높은 성공률 등 많은 장점을 가진 안정적이고 효율적인 동물 모델입니다. 우리의 실험 프로토콜은 매우 상세하고 작동하기 쉽습니다.
프로토콜의 각 단계를 올바르게 수행해야 합니다. 모델링을 시작하기 전에 생쥐를 음식과 물에 자유롭게 접근하여 일주일 동안 환경에 순응시킵니다. 모델링 당일에는 자외선 램프와 75% 알코올을 사용하여 환경과 조리대를 청소하고 소독합니다.
면봉을 사용하여 생쥐의 복부에 비눗물을 바르고 면도날이나 면도기로 모발이 자라는 방향으로 면도하십시오. 마우스의 체중을 측정하고 각 그룹 간의 체중 변화를 비교합니다. 복부 감작 자극을 수행하기 전에, 면도에 의해 유발된 마우스 복부 피부에 대한 임의의 경미한 손상의 완전한 회복을 보장한다.
0.5%DNFB 용액을 준비하고 아세톤과 올리브 오일 혼합물을 4:1의 비율로 희석합니다. 피펫 건을 사용하여 불고 20회 혼합하여 DNFB 용액을 완전히 혼합합니다. 25마이크로리터의 0.5%DNFB 용액을 피펫터로 복부 면도 부위 중앙에 바르고 피펫 팁의 매끄러운 면을 가볍게 펴서 균일하게 분산시킵니다.
DNFB 자극 30초 후 마우스가 DNFB 용액을 문지르는 것을 방지하기 위해 침구가 없는 빈 케이지에 마우스를 넣습니다. 용액이 완전히 건조되면 마우스를 원래 케이지로 되돌려 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있습니다. 귀 감작 자극의 경우 DNFB 자극 중에 용액이 외이도로 들어가는 것을 방지하기 위해 마우스 몸의 방향을 향하고 귓바퀴의 바깥쪽 경계가 아래를 향하도록 합니다.
4일째 및 10일째에, 피펫터를 이용하여, 20 마이크로리터의 비히클 또는 0.2%DNFB 용액을 좌측 귓바퀴의 내부 표면에 천천히 균일하게 도포하고, 피펫터의 매끄러운 면을 이용하여 용액을 부드럽게 분배한다. 오른쪽 귀는 치료하지 않고 그대로 두십시오. DNFB 용액이 마를 때까지 기다렸다가 마우스를 케이지에 다시 넣습니다.
복부 및 귀 감작 자극 후, 첫날부터 이틀마다 마우스의 체중을 측정합니다. 각 마우스의 체중을 0일째와 비교하고, 체중 변화에 따른 마우스의 체중에 대한 ACD의 효과를 평가한다. 생쥐 귀의 고해상도 사진을 캡처하여 첫날부터 이틀에 한 번씩 ACD 임상 증상을 기록합니다.
버니어 캘리퍼스를 사용하여 정확한 결과를 위해 매일 같은 시간에 귓바퀴 두께를 측정합니다. 마우스 귀의 조직 손상을 방지하기 위해 약간의 막힘이 있을 때 버니어 캘리퍼가 안쪽으로 계속 클램핑하는 것을 중지합니다. 위치를 고정하고 양쪽 귀의 데이터를 기록합니다.
세 가지 데이터의 평균을 기록하고 귀 부종을 마이크로미터 단위로 평가합니다. 11일째 염증성 부종의 정도를 평가하기 위해 0.5%Evans Blue 염료 용액을 준비하고 PBS로 희석합니다. 고정 장치로 마우스를 고정하려면 뚜껑을 열고 마우스 꼬리를 잡고 마우스 머리가 고정 장치를 향하도록 하고 마우스가 본능적으로 고정 장치에 올라갈 수 있도록 합니다.
뚜껑을 덮으십시오. 뚜껑의 구멍에서 마우스 꼬리가 나오도록 하고 고정 장치의 길이를 조정하여 마우스 꼬리 전체가 노출되도록 합니다. 알코올 면봉으로 꼬리를 반복해서 닦거나 따뜻한 물에 30 초 동안 담가 꼬리의 뿌리를 부드럽게 꼬집어 채우고 양쪽의 정맥을 확장하십시오.
차가운 광원을 조사한 상태에서 1mm 인슐린 바늘을 사용하여 Evans Blue Dye 용액을 마우스 꼬리 정맥에 천천히 주입합니다. 마우스 귀 사진을 찍으려면 15분 동안 기다립니다. DNFB 그룹의 마우스 귀는 ACD에 필적하는 명백한 임상 증상을 보였으며 민감한 부위는 발적, 건조, 미란 및 삼출의 전형적인 증상을 보였습니다.
그러나 순수 또는 용매 대조군의 귀 투여는 DNFB 그룹과 유사한 증상을 나타내지 않았다. DNFB 그룹에서는 치료하지 않은 오른쪽 귀에 비해 DNFB 자극 후 왼쪽 귀의 두께가 크게 증가했습니다. 대조군과 비히클 그룹에는 유의한 차이가 없었다.
DNFB 그룹 마우스의 왼쪽 귀는 오른쪽 귀와 시각적으로 다른 Evans Blue 염료 주입 후 짙은 파란색으로 변했습니다. 대조군 및 비히클 군에서 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 귀는 거의 동일한 색이었다. 마우스의 체중 증가는 DNFB 또는 단순 비히클 자극에 의해 약간 느려졌지만, 유의한 체중 감소를 초래하지는 않았다.
마우스 귀에서 반복적인 DNFB 자극은 비장 비대와 비장 지수의 증가를 초래했습니다. 대조적으로, 비히클 군에서 마우스의 비장 지수는 유의하게 변화하지 않았다. DINFB 용액이 완전히 혼합되고 외이도로 흘러 들어가지 않고 마우스 귀에 고르게 도포되었는지 확인하십시오.
이것이 모델링 성공의 열쇠입니다.
