מודל זה יכול לשמש לא רק כדי לחקור את הפתוגנזה של ACD, אלא גם ישים עבור האבולוציה הפרה-קלינית של שיטות טיפוליות חדשות, אשר יש משמעות חשובה. זהו מודל בעל חיים יציב ויעיל בעל יתרונות רבים, כגון תקופת ניסוי קצרה, ניתוח קל, תסמינים ברורים ואחוזי הצלחה גבוהים. פרוטוקול הניסוי שלנו מפורט מאוד וקל לתפעול.
הקפד לבצע כל שלב בפרוטוקול כראוי. לפני תחילת הדוגמנות, התאקלמו את העכברים לסביבה למשך שבוע עם גישה חופשית למזון ומים. ביום הדוגמנות, באמצעות מנורה אולטרה סגולה ו 75% אלכוהול, לנקות ולחטא את הסביבה ואת משטחי העבודה.
יש למרוח מי סבון על בטן העכברים באמצעות צמר גפן, ולגלח את האזור בכיוון צמיחת השיער בעזרת להב או מכונת גילוח. שקלו את העכבר והשוו את שינויי המשקל בין כל קבוצה. לפני ביצוע גירוי רגישות הבטן, יש לוודא החלמה מלאה של כל פגיעה קלה בעור בטן העכבר הנגרמת על ידי גילוח.
הכינו תמיסת 0.5% DNFB ודללו אותה בתערובת אצטון לשמן זית ביחס של 4 ל-1. בעזרת אקדח פיפטה, נושף וערבב 20 פעמים כדי לערבב היטב את תמיסת DNFB. יש למרוח 25 מיקרוליטר של תמיסת DNFB 0.5% על מרכז אזור גילוח הבטן בעזרת צינור, ולמרוח קלות עם הצד החלק של קצה הפילטר כדי לפזר אותו באופן אחיד.
לאחר 30 שניות של גירוי DNFB, הכנס את העכבר לכלוב ריק ללא מצעים כדי למנוע מהעכבר לשפשף את תמיסת DNFB. כאשר התמיסה יבשה לחלוטין, החזירו את העכבר לכלוב המקורי שלו עם גישה חופשית למזון ומים. לגירוי רגישות האוזן, כוונו את גוף העכבר והפכו את הגבול החיצוני של האאוריקל כלפי מטה כדי למנוע מהתמיסה להיכנס לתעלת האוזן במהלך גירוי DNFB.
בימים 4 ו-10, באמצעות צינור, יש למרוח 20 מיקרוליטר של הרכב, או תמיסת DNFB 0.2% לאט ובאופן אחיד על פני השטח הפנימיים של הפתח השמאלי, ולפזר בעדינות את התמיסה באמצעות הצד החלק של הבורר. השאירו את אוזן ימין ללא טיפול. המתן עד שתמיסת DNFB יבשה והחזיר את העכבר לכלוב.
לאחר גירוי רגישות הבטן והאוזניים, יש לשקול את העכברים כל יומיים החל מהיום הראשון. השוו את משקלו של כל עכבר ליום אפס, והעריכו את ההשפעה של ACD על משקל הגוף של העכברים כאשר המשקל משתנה. צלם תמונות ברזולוציה גבוהה של אוזני העכבר כדי לתעד תסמינים קליניים של ACD כל יומיים, החל מהיום הראשון.
באמצעות קליפרים ורנייר, למדוד את עובי auricle באותה שעה בכל יום לקבלת תוצאות מדויקות. עצור את קליפרים vernier מלהמשיך הידוק פנימה כאשר יש חסימה קלה כדי למנוע נזק רקמות לאוזן העכבר. שמור על המיקום קבוע ורשום את הנתונים עבור שתי האוזניים.
רשום את הממוצע של שלושת הנתונים ולהעריך את נפיחות האוזן במיקרומטרים. כדי להעריך את מידת הנפיחות הדלקתית ביום ה -11, הכינו תמיסת צבע כחול 0.5% של אוונס ודללו אותה עם PBS. כדי לשתק את העכבר עם קיבוע, פתח את המכסה, החזק את זנב העכבר, הפוך את ראש העכבר מול הקיבוע, ואפשר לעכבר לטפס אינסטינקטיבית לתוך הקיבוע.
מכסים את המכסה. גרום לזנב העכבר לצאת מהחור במכסה והתאם את אורך הקיבוע כדי לחשוף את זנב העכבר כולו. נגבו את הזנב שוב ושוב עם כדור צמר גפן אלכוהולי, או השרו אותו במים חמים למשך 30 שניות, וצבטו בעדינות את שורש הזנב למילוי, והרחיבו את הוורידים משני הצדדים.
הזריקו באיטיות תמיסת Evans Blue Dye לווריד זנב העכבר באמצעות מחט אינסולין 1 מ"מ תחת הקרנה של מקור אור קר. המתן 15 דקות כדי לצלם את אוזני העכבר. אוזני עכבר מקבוצת DNFB הראו תסמינים קליניים ברורים דומים ל-ACD, כאשר אזורים רגישים הראו תסמינים אופייניים של אדמומיות, יובש, שחיקה והפרשת דם.
עם זאת, מתן באוזן של מים טהורים או בקרת ממס לא גרם לתסמינים דומים לקבוצת DNFB. בקבוצת DNFB, בהשוואה לאוזן ימין שלא טופלה, עובי האוזן השמאלית גדל באופן משמעותי לאחר גירוי DNFB. לא היה הבדל משמעותי בין קבוצות הבקרה והרכב.
האוזן השמאלית של עכברי קבוצת DNFB הפכה לכחול כהה לאחר הזרקת הצבע הכחול של אוונס, שהיה שונה חזותית מאוזן ימין. האוזן השמאלית והימנית של עכברים בקבוצת ביקורת ושל קבוצות רכב היו בערך באותו צבע. העלייה במשקל של עכברים הואטה מעט על ידי DNFB, או גירוי פשוט של הרכב, אך לא הביאה לירידה משמעותית במשקל.
גירוי DNFB חוזר באוזן העכבר הביא להגדלת הטחול ולעלייה במדד הטחול. לעומת זאת, מדד הטחול של עכברים בקבוצת הרכב לא השתנה באופן משמעותי. ודא שתמיסת DINFB מעורבבת במלואה ונמרחת באופן שווה על אוזן העכבר מבלי לזרום לתעלת האוזן.
זהו המפתח להצלחת הדוגמנות.
