Dieses Modell kann nicht nur zur Erforschung der Pathogenese der ACD verwendet werden, sondern ist auch für die präklinische Evolution neuer therapeutischer Methoden anwendbar, was eine wichtige Bedeutung hat. Dies ist ein stabiles und effizientes Tiermodell mit vielen Vorteilen, wie z. B. einer kurzen Versuchszeit, einfacher Bedienung, offensichtlichen Symptomen und einer hohen Erfolgsquote. Unser Versuchsprotokoll ist sehr detailliert und einfach zu bedienen.
Stellen Sie sicher, dass Sie jeden Schritt des Protokolls korrekt befolgen. Bevor Sie mit der Modellierung beginnen, gewöhnen Sie die Mäuse eine Woche lang an die Umgebung mit freiem Zugang zu Nahrung und Wasser. Reinigen und desinfizieren Sie am Tag der Modellierung mit einer UV-Lampe und 75% Alkohol die Umgebung und die Arbeitsplatten.
Tragen Sie Seifenwasser mit einem Wattestäbchen auf den Bauch der Mäuse auf und rasieren Sie den Bereich mit einer Klinge oder einem Rasierer in Haarwuchsrichtung. Wiegen Sie die Maus und vergleichen Sie die Gewichtsänderungen zwischen den einzelnen Gruppen. Bevor Sie eine Sensibilisierungsstimulation des Bauches durchführen, stellen Sie sicher, dass sich jede kleinere Verletzung der Bauchhaut der Maus, die durch die Rasur verursacht wurde, vollständig erholt hat.
Bereiten Sie eine 0,5%ige DNFB-Lösung vor und verdünnen Sie sie mit einer Aceton-Olivenöl-Mischung im Verhältnis 4 zu 1. Blasen und mischen Sie mit einer Pipettenpistole 20 Mal, um die DNFB-Lösung gründlich zu mischen. Tragen Sie 25 Mikroliter der 0,5%igen DNFB-Lösung mit einem Pipetter auf die Mitte des Bauchrasierbereichs auf und verteilen Sie sie leicht mit der glatten Seite der Pipettenspitze, um sie gleichmäßig zu verteilen.
Legen Sie die Maus nach 30 Sekunden DNFB-Stimulation in einen leeren Käfig ohne Einstreu, um zu verhindern, dass die Maus die DNFB-Lösung abreibt. Wenn die Lösung vollständig getrocknet ist, setzen Sie die Maus in ihren ursprünglichen Käfig mit freiem Zugang zu Futter und Wasser zurück. Um die Ohrsensibilisierung zu stimulieren, richten Sie den Mauskörper aus und richten Sie den äußeren Rand der Ohrmuschel nach unten aus, um zu verhindern, dass die Lösung während der DNFB-Stimulation in den Gehörgang gelangt.
Tragen Sie an den Tagen 4 und 10 mit einem Pipetter 20 Mikroliter des Vehikels oder eine 0,2%ige DNFB-Lösung langsam und gleichmäßig auf die Innenfläche der linken Ohrmuschel auf und verteilen Sie die Lösung vorsichtig mit der glatten Seite des Pipettengebers. Lassen Sie das rechte Ohr unbehandelt. Warten Sie, bis die DNFB-Lösung trocken ist, und setzen Sie die Maus wieder in den Käfig ein.
Nach der Sensibilisierung des Bauches und der Ohren werden die Mäuse ab dem ersten Tag alle zwei Tage gewogen. Vergleichen Sie das Gewicht jeder Maus mit dem Tag Null und bewerten Sie die Wirkung von ACD auf das Körpergewicht der Mäuse, wenn sich das Gewicht ändert. Nehmen Sie hochauflösende Fotos der Mausohren auf, um die klinischen Symptome der ACD alle zwei Tage aufzuzeichnen, beginnend mit dem ersten Tag.
Messen Sie die Ohrmuscheldicke mit Messschiebern jeden Tag zur gleichen Zeit, um genaue Ergebnisse zu erzielen. Verhindern Sie, dass die Messschieber weiter nach innen geklemmt werden, wenn eine leichte Verstopfung vorliegt, um Gewebeschäden am Mausohr zu vermeiden. Halten Sie die Position fest und zeichnen Sie die Daten für beide Ohren auf.
Erfassen Sie den Mittelwert der drei Daten und werten Sie die Ohrschwellung in Mikrometern aus. Um den Grad der entzündlichen Schwellung an Tag 11 zu beurteilen, bereiten Sie 0,5%ige Evans Blue-Farbstofflösung vor und verdünnen Sie sie mit PBS. Um die Maus mit einem Fixateur ruhigzustellen, öffnen Sie den Deckel, halten Sie den Mausschwanz fest, machen Sie den Kopf der Maus zum Fixateur und lassen Sie die Maus instinktiv in den Fixateur klettern.
Decken Sie den Deckel ab. Lassen Sie den Mausschwanz aus dem Loch auf dem Deckel herausragen und passen Sie die Länge des Fixateurs an, um den gesamten Mausschwanz freizulegen. Wischen Sie den Schwanz wiederholt mit einem Alkohol-Wattebausch ab oder weichen Sie ihn 30 Sekunden lang in warmem Wasser ein und drücken Sie die Schwanzwurzel vorsichtig zusammen, um sie zu füllen und die Venen auf beiden Seiten zu erweitern.
Injizieren Sie die Evans Blue Dye-Lösung langsam mit einer 1-mm-Insulinnadel unter der Bestrahlung einer Kaltlichtquelle in die Mausschwanzvene. Warten Sie 15 Minuten, um Fotos von den Mäuseohren zu machen. Mausohren der DNFB-Gruppe zeigten deutliche klinische Symptome, die mit ACD vergleichbar waren, wobei empfindliche Bereiche die typischen Symptome wie Rötung, Trockenheit, Erosion und Exsudation aufwiesen.
Die Verabreichung von reinem Wasser oder Lösungsmittelkontrolle am Ohr führte jedoch zu keinen Symptomen, die denen der DNFB-Gruppe ähnelten. In der DNFB-Gruppe nahm die Dicke des linken Ohrs im Vergleich zum unbehandelten rechten Ohr nach DNFB-Stimulation signifikant zu. Es gab keinen signifikanten Unterschied in der Kontroll- und Fahrzeuggruppe.
Das linke Ohr der Mäuse der DNFB-Gruppe färbte sich nach der Injektion des Farbstoffs Evans Blue dunkelblau, was sich optisch vom rechten Ohr unterschied. Das linke und rechte Ohr von Mäusen in Kontroll- und Fahrzeuggruppen hatten ungefähr die gleiche Farbe. Die Gewichtszunahme der Maus wurde durch DNFB oder einfache Vehikelstimulation leicht verlangsamt, führte aber nicht zu einem signifikanten Gewichtsverlust.
Wiederholte DNFB-Stimulation im Mausohr führte zu einer Milzvergrößerung und einem Anstieg des Milzindexes. Im Gegensatz dazu veränderte sich der Milzindex der Mäuse in der Fahrzeuggruppe nicht signifikant. Stellen Sie sicher, dass die DINFB-Lösung vollständig gemischt und gleichmäßig auf das Mausohr aufgetragen wird, ohne in den Gehörgang zu fließen.
Dies ist der Schlüssel zum Erfolg der Modellierung.
