我们的协议与其他分子分析方法兼容，允许评估药物如何影响触觉内组织切片的生存能力和中等通量筛选的性能。该技术的主要优点是，我们可以测量整个组织切片的实时可行性与很少的预处理或后处理。该技术通过测试直接从患者肿瘤组织样本获得的候选药物或组织切片来加速临床前药物开发和肿瘤学。
我们的实时组织可行性评估方法非常通用，可应用于癌症生物学、神经科学和发育生物学研究。准备在触觉上可行的组织切片是程序成功的关键。中等成分中的振动器设置应根据组织类型和硬度进行调整。
在肿瘤组织切片采集的当天，每井24个井中每井有250微升组织切片培养，并将一个组织培养物插入到每一个井中。然后将板放在37摄氏度的加湿培养箱中，再加气5%的二氧化碳，直到使用。为了获得肿瘤组织片段，将肿瘤组织淹没在10厘米培养板中的冰冷HSS中，并使用手术刀将组织切成两半。
使用六毫米活检冲孔获取肿瘤组织的圆柱体，并修剪每个圆柱的一端以创建一个平坦的表面。将组织件放在新鲜、冰冷的 HBSS 中，然后打开振动器。用 70% 乙醇对所有设备进行消毒，将振动缓冲盘（覆盖着丙烯酸玻璃盖）放在振动池冰浴的中心。
在浴缸中加入冰，用冷的HBSS填充缓冲盘。将剃须刀刀片装入刀片架，并使用齿形钳子仔细选择活检冲孔肿瘤样本。在试样板上加入一滴医用级氰丙烯酸酯。
将纸巾涂抹在一块无绒纸巾上，以去除多余的缓冲液，将纸巾的圆柱放在直立稳定的位置上。经过两到三分钟的空气干燥后，将板放入缓冲盘中，并在托盘中加入额外的 HBSS，直到组织完全浸入缓冲器中。然后将冰盘和缓冲托盘组件放在振动器上并锁定臂，组装振动器。
将振动器切割厚度设置为 250 微米，振幅设置为 3 毫米，切片速度设置为 0.01 至 0.25 毫米/秒，刀片角度设置为 15 至 21 度。设置铲刀的开始和结束位置并调整舞台的高度。在连续模式下运行仪器，切割切片进行多次循环，直到组织均匀切割。
使用宽尖端转移 Biped 将切片和少量 HBSS 转移到先前准备的 24 孔板的每个孔中的单个细胞培养中，并使用精细尖端转移 Biped 从孔中去除任何多余的缓冲液。当样品到达终点时，安装一个新的组织并获取额外的切片，直到获得足够的样品。然后在细胞培养培养箱中培养组织切片24至48小时。
为了测量组织切片的可行性，根据制造商的说明，在新鲜组织切片培养培养基中，以一至一千次稀释，准备一种基于发光的活性测量试剂，然后用混合物替换24井板每个井中的介质。在每个组织切片上加入50微升酶基质混合物，并将板放在加湿培养箱内的轨道摇床上，在37摄氏度和5%的二氧化碳过夜时轻轻搅拌。第二天早上，使用适当的设置测量微孔读取器上每个孔的发光信号。
确定组织切片的基线生存能力后，溶解组织切片培养培养介质中感兴趣的药物，获得 10 倍库存溶液，并将每个 10 倍药物溶液添加到每个组织切片井底部的培养介质中。将50微升的药物补充介质从每一井的底部转移到每个组织切片上，并在夜间将切片返回轨道摇床。第二天早上，将培养板转移到亚培养箱，无需摇晃，并在适当的实验时间点测量微孔板读卡器上每个组织样本的发光强度。
然后，可以使用指示的方程计算每个时间点治疗的肿瘤组织的可行性。从小鼠乳腺癌肿瘤样本中制备的组织切片的可行性可以保持至少21天，偶尔进行中等交流。与用二甲基硫化物治疗的肿瘤组织相比，用多激酶抑制剂治疗四天，使发光信号强度降低100倍。
同一抑制剂浓度的一半的治疗早在第一天就会降低亮度，并在第四天达到最低水平，在随后的每个测量时间点中保持较低水平。相比之下，受控肿瘤组织群的发光强度在整个六天培养中保持稳定。此外，用连续剂量的抑制剂治疗小鼠乳腺癌肿瘤切片四天，说明药物半最大有效浓度中切片活性的剂量依赖性变化。
使用多索鲁比辛（一种标准的化疗药物）治疗的患者衍生异种移植也表现出剂量依赖性的可行性变化。此外，在从单个散装患者衍生的异种移植中编写的组织切片上对 17 种临床前和临床批准的药物进行三钙化测试，为使用原生肿瘤微环境对肿瘤切片进行中通量药物筛查提供了概念验证。在准备肿瘤组织样本时，注意尽量减少与组织切片的接触，以避免损害组织。
我们的方法可以与其他方法（如 IHC、流式细胞学或单细胞测序）相结合，从组织中获取空间和单细胞信息。我们的技术允许测试多种感兴趣的药物在生理条件下不同剂量的效果随着时间的推移。在准备肿瘤中具有未知病原体状态的组织切片时，请务必在生物安全柜中执行所有程序。
