单纯疱疹病毒的扁平化

该协议可帮助学生清楚地识别个体感染并轻松进行测定，从而更有效地量化病毒滴度。该协议结合了简单的固定和染色程序，可产生可靠且可重复的结果。这种方法可以深入了解抗病毒治疗疾病的准确性和有效性。

这种整理方案更困难的障碍是接种板的细胞计数，确保细胞在整个过程中不会过度拥挤，干燥或被划伤。人们也可能发现该协议的整体细致性质有困难。然而，实践是这个实验成功的主要贡献者。

首先，在一次实验室会话中将病毒添加到细胞中完成样品稀释。连续稀释在PBS中斑块的每个病毒样品。通常使用 10 倍稀释液进行最精确的跟踪。

将所有病毒稀释液保持在冰上，直到准备好将这些稀释的病毒样品添加到细胞中。使用移液器从一个或两个孔中取出细胞培养基。小心地将稀释的病毒样品滴加到每个单层细胞中，通过每个孔的侧面滴加。

每一个或两个孔重复该过程，直到整个板中充满被斑块的病毒样品。用手轻轻摇动整个盘子。然后将板在37摄氏度下孵育一小时，以使病毒吸附。

每10分钟后，从培养箱中取出培养皿，再次轻轻摇晃以将病毒更均匀地传播到每个孔中，然后将其放回培养箱中。为了减少无意中计数未吸收的接种物的可能性，请使用1000微升移液器吸头从孔中取出病毒样品，并将样品丢弃在废烧杯中。将2.5毫升甲基纤维素覆盖物放在板上，然后将其放回培养箱中。

对废烧杯进行消毒，通常添加漂白剂，碘伏或类似的杀病毒剂，然后将其从生物安全柜中取出。在为期两天的孵育后，使用移液器一次从一个或两个孔中取出甲基纤维素覆盖物，并将其放入废烧杯中。向每个孔中加入约2毫升1%结晶紫在50%乙醇中。

将板中装满污渍的所有孔在37摄氏度下孵育30分钟。此时，如前所述，对废烧杯进行消毒。用自来水大力清洗板，直到径流清除。

确保每个稀释系列的斑块数量差异约为10倍。该图描绘了斑块计数减少10倍，其中所有三个重复的可计数斑块数量都在10到负4范围内。图中的前三幅图像描绘了斑块在10到负3稀释。

然而，当斑块测定未良好进行时，底行显示结果。从顶部周围可见区域的任何稀释中可以看到很少的斑块，Vero细胞已完全从底物中抬起。同样，该图显示了斑块测定过程中细胞干燥或处理不当的问题。

然而，这个数字严重表明Vero细胞接种不良。每个孔都显示出较深的紫色斑点，表明细胞没有很好地分布在整个孔中，并且成簇堆叠在一起。为获得最佳结果，请确保病毒均匀地分布在板上，以避免斑块聚集斑块测定比其他定量方法更有效，因为它只计算活病毒。

这样，就可以建立真正的抗病毒功效。此外，这项技术使我们能够量化污染物上的病毒存在，并探索我们疱疹病毒研究领域内新型医疗设备药物递送的有效性。