通过蓝光LED照明技术 估算 TLC板上化合物的产量

该协议开发了一种使用蓝光LED照明技术估计TLC板上化合物产量的方法。这种方法的优点是蓝光LED照明技术是一种安全，有效和廉价的方法，并且允许研究人员同时测量多个样品。该方法也可以应用于生物化学和天然产物化学。

首先，将培养物在40摄氏度下干燥24小时。使用灭菌的镊子将干燥的培养物转移到50毫升管中，并加入15毫升乙酸乙酯。通过涡旋一分钟剧烈摇动混合物，并在 40 摄氏度下以 200 RPM 振荡将试管孵育一小时。

然后使用40千赫兹超声波浴在40摄氏度下超声处理混合物一小时。接下来，在室温下以5， 000g离心混合物一分钟，并通过11微米滤纸过滤。在分离漏斗中用等体积的无菌水提取滤液。

相分离后，收集有机层，在旋转蒸发器中蒸发，将残余物溶解在两毫升乙酸乙酯中。以正相硅胶为固定相包装色谱柱，以正己烷乙酸乙酯和三氟乙酸为流动相。将两毫升提取物加载到色谱柱上，并以每分钟1毫升的流速加入流动相溶剂以洗脱提取物。

在通过TLC验证流出物以确认洛伐他汀的存在后，在45摄氏度的旋转蒸发器中蒸发，直到溶剂被除去。将残留物溶解在一毫升乙酸乙酯中，然后与等体积的1%三氟乙酸混合。在室温下以5， 000g离心混合物一分钟，并将有机层收集在新玻璃管中。

使用毛细管移液管将五微升样品和洛伐他汀标准品点在TLC板的基线上，在TLC板的侧面留下一厘米的边界。然后在室温下将TLC板在通风橱中干燥五分钟。用镊子将板轻轻放入含有流动相溶剂的饱和玻璃室中。

用玻璃盖盖住腔室，让板充分展开。当溶剂管线距离板顶部一厘米时，将板从腔室中取出。用铅笔标记溶剂线，并在室温下将盘子在通风橱中干燥10分钟。

干燥后，立即将板浸泡在10%硫酸溶剂中，然后在室温下在通风橱中干燥10分钟。接下来，将板放在加热板上，直到出现棕色斑点。将印版转移到蓝色LED照明器并使用兼容的免费软件进行扫描。

生物测定法结果表明，抑制区与洛伐他汀标准品尺寸之间的R平方为0.99，样品产率为回归模型预测的0.56 mg。紫外检测方法表明，洛伐他汀标准品与TLC板上条带维数的R平方为0.97，回归模型预测的样品产率为0.53 mg。然而，波段的边缘模糊，观察到相对较低的信号强度波段。

对于蓝光LED照明方法，洛伐他汀标准品与TLC板上的条带尺寸之间的R平方为0.98，样品产率为回归模型预测的0.54毫克。使用蓝光LED照明器的预测产量更接近生物测定方法，并获得清晰的条带。如果板过热，洛伐他汀的可视化可能难以观察到。