تقدير إنتاجية المركبات على لوحة TLC عبر تقنية الإضاءة Blue-LED

طور هذا البروتوكول طريقة لتقدير إنتاجية المركبات على لوحة TLC باستخدام تقنية إضاءة LED الزرقاء. تتمثل مزايا هذه الطريقة في أن تقنية الإضاءة الزرقاء LED هي طريقة آمنة وفعالة ورخيصة ، وتسمح للباحث بقياس عينات متعددة في نفس الوقت. يمكن تطبيق هذه الطريقة أيضا على الكيمياء الحيوية وكيمياء المنتجات الطبيعية.

للبدء ، جفف الثقافة عند 40 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. نقل الثقافة المجففة إلى أنبوب 50 ملليلتر باستخدام ملاقط معقمة وإضافة 15 ملليلتر من خلات الإيثيل. هز الخليط بقوة عن طريق الدوامة لمدة دقيقة واحدة واحتضان الأنبوب لمدة ساعة واحدة عند 40 درجة مئوية مع الاهتزاز عند 200 دورة في الدقيقة.

ثم صوتنة الخليط باستخدام حمام بالموجات فوق الصوتية 40 كيلو هرتز عند 40 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة. بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للخليط عند 5،000 جم لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة وقم بالتصفية من خلال ورقة ترشيح 11 ميكرومتر. استخراج المرشح مع حجم متساو من الماء المعقم في قمع فصل.

بعد فصل الطور ، اجمع الطبقة العضوية ، وقم بتبخيرها في مبخر دوار ، وقم بإذابة البقايا في ملليلتر من أسيتات الإيثيل. قم بتعبئة العمود بهلام السيليكا العادي كمرحلة ثابتة ، واستخدم أسيتات إيثيل n-hexane وحمض ثلاثي فلورو أسيتيك كمرحلة متحركة. قم بتحميل ملليلتر من المستخلص على العمود وأضف مذيب الطور المتحرك بمعدل تدفق يبلغ ملليلتر واحد في الدقيقة لاستخلاص المستخلص.

بعد التحقق من النفايات السائلة بواسطة TLC لتأكيد وجود لوفاستاتين ، تتبخر في مبخر دوار عند 45 درجة مئوية حتى تتم إزالة المذيب. قم بإذابة البقايا في ملليلتر واحد من أسيتات الإيثيل ثم اخلطها مع حجم متساو من حمض ثلاثي فلورو أسيتيك 1٪. الطرد المركزي الخليط في 5،000 غرام لمدة دقيقة واحدة في درجة حرارة الغرفة ، وجمع الطبقة العضوية في أنبوب زجاجي جديد.

باستخدام ماصة شعرية بقعة خمسة ميكرولتر من العينات ومعايير لوفاستاتين على خط الأساس للوحة TLC ، وترك حد سنتيمتر واحد على جانبي لوحة TLC. ثم جفف لوحة TLC في غطاء دخان لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. ضع اللوحة برفق بواسطة ملقط في غرفة زجاجية مشبعة تحتوي على مذيب الطور المتحرك.

قم بتغطية الحجرة بغطاء زجاجي واترك اللوحة تتطور بالكامل. أخرج اللوحة من الحجرة عندما يصل خط المذيبات إلى سنتيمتر واحد من أعلى اللوحة. ضع علامة على خط المذيبات بقلم رصاص وجفف اللوحة في غطاء الدخان لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.

بعد التجفيف ، انقع اللوحة على الفور في مذيب حمض الكبريتيك بنسبة 10٪ ، ثم جفف في غطاء الدخان لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، ضع اللوحة على لوحة التسخين حتى تظهر البقع البنية. انقل اللوحة إلى مصباح LED الأزرق وقم بالمسح الضوئي باستخدام برنامج مجاني متوافق.

أظهرت النتائج التي تم الحصول عليها من طريقة المقايسة الحيوية أن مربع R بين أبعاد منطقة التثبيط ومعايير لوفاستاتين كان 0.99 ، وكان عائد العينة 0.56 ملليغرام كما تنبأ به نموذج الانحدار. تظهر طريقة الكشف عن الأشعة فوق البنفسجية أن مربع R بين معايير لوفاستاتين وأبعاد النطاقات على لوحة TLC كان 0.97 ، وكان عائد العينة الذي تنبأ به نموذج الانحدار 0.53 ملليغرام. ومع ذلك ، كانت حواف النطاق ضبابية ولوحظت نطاقات شدة إشارة منخفضة نسبيا.

بالنسبة لطريقة الإضاءة الزرقاء LED ، كان مربع R بين معايير لوفاستاتين وأبعاد النطاق على لوحة TLC 0.98 ، وكان عائد العينة 0.54 ملليغرام كما تنبأ به نموذج الانحدار. كان العائد المتوقع باستخدام مصباح LED الأزرق أقرب إلى طريقة الفحص الحيوي وتم الحصول على نطاقات واضحة. إذا كانت اللوحة محمومة ، فقد يكون من الصعب ملاحظة تصور لوفاستاتين.