早期播种嫁接是在植物中设置长距离信号的有力工具。我们希望这种方法将有助于成功采用播种嫁接,而无需动手培训。首先准备方形培养皿,尺寸为100x100毫米,用于浇注有机硅弹性体。
用丙酮去除电线上的外层纸涂层后,取 29 号线扎带。并通过在坚硬、均匀的表面上滚动金属丝来完全拉直电线,并带有沉重的扁平物体,例如金属管架。然后,在方形培养皿中等距放置四根拉直的电线,确保电线平放在培养皿底部。
将混合硅弹性体溶液倒在培养皿中的电线顶部,然后将盖子放在培养皿上。让硅胶在室温下固化 24 至 48 小时后,使用干净的镊子从培养皿中取出硅胶片,然后将其移动到干净、平坦的表面上。从硅胶片上取下电线。
为确保通道一侧打开,请使用细点镊子清除堵塞通道开放侧的薄层硅胶。使用干净的剪刀将垂直于通道的硅胶片切成三毫米的条状。将每条纸条放入铝箔信封中,并用高压釜胶带密封.
将条带在 121 摄氏度下高压灭菌至少 30 分钟,然后存放直到需要为止.要对种子进行灭菌和春化,请在1.5毫升微量离心管中取一毫升含有0.1%吐温20的50%漂白剂溶液,并将多达100个拟南芥种子悬浮在其中。将种子悬液在室温下孵育5至10分钟。
孵育后,在无菌条件下吸出或移出漂白剂溶液。用一毫升灭菌的蒸馏水冲洗种子。冲洗种子时,请务必充分倒置试管。
要去除留在管顶部的任何漂白剂溶液,请重复冲洗四次。将种子留在管中约250微升的水,并将种子在黑暗中以4摄氏度的温度储存三天。接下来,在接种种子之前,将无菌条放在准备好的MS板的表面上,以引导种子与条带上的通道对齐。
然后,在无菌条件下工作,使用20微升移液器吸头吸出并将适当数量的准备好的种子转移到平板上。种子接种后,取出无菌条。盖上盘子。
并用封口膜密封与种子行平行的板的一面。将透气胶带缠绕在封口膜的顶部和板的所有其他边缘周围,以便在孵育过程中进行空气交换。小心地将两块板垂直定向,其封口膜密封的侧面朝下。
通过在两者之间水平放置一个 15 毫升的离心管,同时用橡皮筋将它们固定在顶部,在底部将它们分开。确保板表面与台面形成 100 到 110 的角度。将板以这个方向储存在21摄氏度的完全黑暗中72小时,以使幼苗下胚轴长约5毫米长。
之后,从黑暗中取出设置,并在移植前在相同温度下将其保持在 16 小时的光照和 8 小时的黑暗循环下两到四天。在盘子后五到七天之间嫁接幼苗。在幼苗上放置嫁接条,将它们的下胚轴放入通道中。
轻轻定位幼苗,使根-下胚轴连接保持在硅胶条的底部,以准备苗进行切割。借助解剖镜在无菌罩中工作,准备接穗进行嫁接。使用新鲜的手术刀刀片,在下胚轴上做一个笔直、干净、垂直的切口。
避免向下按压并将幼苗推入琼脂中。接下来,卸下溜槽,并通过确保与介质表面接触来保持溜槽的切割部分水分。或者,可以将溜槽移动到装有无菌蒸馏水的培养皿中。
要准备砧木,请小心地抓住闭合镊子之间的空间内的根部,然后轻轻转动以拉动它,将砧木的切割部分留在条带的中间。然后,使用细尖镊子轻轻拿起所需的滑槽并将其插入通道顶部。在视觉上,确认接穗和砧木之间的接触以获得成功的移植。
完成所有移植物后,用封口膜和透气胶带包裹板,并以与之前演示相同的方式设置板,而不会干扰幼苗或硅胶条。小心地将板移动到设置为26摄氏度的生长室中,具有16小时的光照和8小时的黑暗周期。7至10天后,使用镊子小心地从一侧剥离硅胶条并将幼苗从通道中释放出来,从而在无菌条件下评估嫁接的幼苗。
用新鲜的手术刀刀片切割接穗或用细尖镊子压碎它们,去除从接穗上生长的任何不定根。再次,目视评估砧木是否已牢固地附着在形成成功移植物的接穗上。将成功的嫁接物移到幼苗繁殖土壤中,并用透明塑料覆盖土壤几天,同时幼苗建立。
让植物在前面提到的 21 摄氏度的光照和黑暗循环下生长。确定最佳嫁接方案的嫁接试验显示,当种子直接在具有封闭通道的硅胶条上发芽时,总体嫁接成功率为25%。在发芽过程中重新定向种子以保持胚胎的子叶和自由基朝下略微提高了嫁接效率至33%在去除通道上的有机硅闭合以允许种子与生长培养基接触后,85%的幼苗成功发芽。
然而,嫁接成功率保持在31%,表明条上萌发无法实现最佳幼苗生长。有趣的是,在前两项试验中,在将幼苗插入条带的开放通道之前,在嫁接板上垂直培养幼苗的演示方案产生了48%的总体嫁接成功率。考虑到第三次的成功率较低,试验相对较小,这可能是由于嫁接部位的轻微变化,发现总体嫁接成功率为45%,这与将幼苗培养在水平板上,在固体表面上切割并插入嫁接条的方法相当。
然而,所演示的协议相对耗时较少。使用此协议,刚接触幼苗嫁接的实验室可以快速创建大量嫁接支持设备,同时能够定制设备以满足其特定需求。