השתלת שתיל מדרגית, גמישה וחסכונית

השתלת זריעה בשלב מוקדם היא כלי רב עוצמה לקביעת איתות למרחקים ארוכים בצמחים. אנו מקווים כי שיטה זו תסייע באימוץ מוצלח של השתלת זריעה ללא הכשרה מעשית. התחילו בהכנת צלחת פטרי מרובעת, בגודל 100x100 מילימטרים ליציקת אלסטומר הסיליקון.

קח חוט מד 29 בעניבות פיתול לאחר הסרת ציפוי הנייר החיצוני על החוט עם אצטון. ויישרו את החוט במלואו על ידי גלגולו על משטח קשה ואחיד עם חפץ שטוח וכבד, כמו מתלה צינורות מתכת. לאחר מכן, הניחו ארבע חתיכות של חוטים מיושרים במרחק שווה זה מזה בצלחת הפטרי המרובעת, והבטיחו שהחוטים יהיו שטוחים בתחתית המנה.

יוצקים את תמיסת אלסטומר הסיליקון המעורבת על גבי החוטים בצלחת הפטרי ומניחים את הכיסוי על הצלחת. לאחר שאפשרו לסיליקון להחלים במשך 24 עד 48 שעות בטמפרטורת החדר, הסירו את יריעת הסיליקון מצלחת הפטרי בעזרת מלקחיים נקיים והעבירו אותה למשטח נקי ושטוח. הסירו את החוטים מיריעת הסיליקון.

כדי לוודא שהתעלות פתוחות בצד אחד, השתמשו במלקחיים עדינים כדי לנקות את שכבת הסיליקון הדקה שחוסמת את הצד הפתוח של הערוצים. חותכים את יריעת הסיליקון בניצב לתעלות לרצועות שלושה מילימטר באמצעות מספריים נקיים. מניחים כל רצועה במעטפת רדיד אלומיניום ואוטמים אותה בסרט הדבקה אוטומטי.

יש לבצע אוטוקלאבינג לרצועות בטמפרטורה של 121 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות לפני אחסונן עד לצורך. כדי לעקר ולחרר את הזרעים, יש לקחת מיליליטר אחד של תמיסת אקונומיקה 50% המכילה 0.1% Tween 20 בצינור מיקרוצנטריפוגה של 1.5 מיליליטר ולהשהות בה עד 100 זרעי ערבידופסיס. דוגרים על תרחיף הזרעים בטמפרטורת החדר למשך חמש עד 10 דקות.

לאחר הדגירה, לשאוף או פיפטה החוצה את תמיסת אקונומיקה בתנאים סטריליים. שוטפים את הזרעים במיליליטר אחד של מים מזוקקים מעוקרים. הקפד להפוך את הצינורות כראוי בעת שטיפת הזרעים.

כדי להסיר תמיסת אקונומיקה שנותרה בחלק העליון של הצינור, חזור על השטיפה ארבע פעמים. השאירו כ 250 מיקרוליטר מים עם הזרעים בצינור, ואחסנו את הזרעים בחושך בארבע מעלות צלזיוס במשך שלושה ימים. לאחר מכן, לפני ציפוי הזרעים, הניחו את הרצועות הסטריליות על פני צלחת הטרשת הנפוצה שהוכנה כדי להנחות את יישור הזרעים עם התעלות שעל הרצועות.

לאחר מכן, בעבודה בתנאים סטריליים, להשתמש קצה פיפטה 20 מיקרוליטר כדי לשאוף ולהעביר את המספר המתאים של זרעים מוכנים על הצלחת. לאחר שהזרעים מצופים, מסירים את הרצועות הסטריליות. מכסים את הצלחת.

וחותמים את אחד מצידי הצלחת במקביל לשורות הזרעים עם פרפילם. עטפו סרט נושם על גבי הפרפילם וסביב כל הקצוות האחרים של הצלחת כדי לאפשר חילופי אוויר במהלך הדגירה. כוונו בזהירות שתי צלחות במאונך כשצדדיהן האטומים בפרפילם פונים כלפי מטה.

הפרידו אותם בתחתית על ידי הצבה אופקית של צינור צנטריפוגה של 15 מיליליטר ביניהם, תוך שהם מאבטחים אותם יחד למעלה עם גומייה. ודא שמשטחי הפלטה יוצרים זווית של 100 עד 110 עם משטח הספסל. אחסנו את הצלחות בכיוון זה במשך 72 שעות בחושך מוחלט בטמפרטורה של 21 מעלות צלזיוס כדי לאפשר לשתילים לגדול באורך של כחמישה מילימטרים.

לאחר מכן, הסר את ההתקנה מהחושך ושמור אותה תחת מחזור אור של 16 שעות ושמונה שעות חושך למשך יומיים עד ארבעה ימים באותה טמפרטורה לפני ההשתלה. שתל את השתילים בין חמישה לשבעה ימים לאחר הצלחתם. מניחים רצועת השתלה מעל השתילים, ומתאימים את ההיפוקוטיל שלהם לתעלות.

מקמו בעדינות את השתיל, כך שצומת השורש-היפוקוטיל נשאר בתחתית רצועת הסיליקון כדי להכין את השתיל לחיתוך. עבודה במכסה מנוע סטרילי בעזרת היקף דיסקציה, להכין את scions עבור grafting. בעזרת להב אזמל טרי, יוצרים חתך ישר, נקי, מאונך לרוחב ההיפוקוטי.

הימנעו מללחוץ ולדחוף את השתיל לתוך האגר. לאחר מכן, להסיר את המצנח ולשמור את החלק החתוך של המצנח hydrated על ידי הבטחת מגע עם משטח התקשורת. לחילופין, ניתן להעביר את המצנח לצלחת פטרי מלאה במים מזוקקים סטריליים.

כדי להכין את השורשים, תפסו בזהירות את השורש בתוך החלל שבין המלקחיים הסגורים וסובבו בעדינות כדי למשוך אותו, תוך השארת החלק החתוך של השורשים באמצע הרצועה. לאחר מכן, הרימו בעדינות את המצנח הרצוי באמצעות המלקחיים העדינים והכניסו אותו לחלק העליון של התעלה. חזותית, לאשר את הקשר בין scion ו rootstock כדי לקבל שתל מוצלח.

לאחר שכל השתלים בוצעו, עטפו את הצלחות בפרפילם ובסרט נושם, והציבו את הצלחות באותו אופן כפי שהודגם קודם מבלי להפריע לשתילים או לרצועות הסיליקון. בזהירות להעביר את הלוחות לתא צמיחה להגדיר על 26 מעלות צלזיוס עם מחזור אור 16 שעות ושמונה שעות חושך. לאחר שבעה עד 10 ימים, העריכו את השתילים המושתלים בתנאים סטריליים באמצעות מלקחיים כדי לקלף בזהירות את רצועת הסיליקון מצד אחד ולשחרר את השתילים מהתעלות.

הסר כל שורשים הרפתקניים הצומחים מן הנצר על ידי חיתוך אותם עם להב אזמל טרי או ריסוק אותם עם מלקחיים עדינים. שוב, העריכו ויזואלית אם השורש נקשר היטב לנצר ויצר שתל מוצלח. מעבירים את השתלים המוצלחים לאדמת ריבוי שתילים ומכסים את הקרקע בפלסטיק שקוף למשך מספר ימים בזמן שהשתילים מתבססים.

אפשרו לצמחים לגדול תחת מחזורי האור והחושך שהוזכרו קודם לכן בטמפרטורה של 21 מעלות צלזיוס. ניסויי השתלה לקביעת פרוטוקול ההשתלה האופטימלי גילו שיעור הצלחה כולל של 25% כאשר הזרעים נבטו ישירות על רצועות הסיליקון עם תעלות סגורות. כיוון מחדש של הזרעים כדי לשמור על העוברים והצבעה רדיקלית כלפי מטה במהלך הנביטה הגדילו מעט את יעילות ההשתלה ל -33% עם הסרת סגירת הסיליקון על התעלות כדי לאפשר מגע בין הזרע למדיום הגידול, 85% מהשתילים נבטו בהצלחה.

עם זאת, שיעור הצלחת ההשתלה נותר על 31%, מה שמצביע על כך שלא ניתן להשיג גידול אופטימלי של שתילים באמצעות נביטה ברצועה. באופן מעניין, הפרוטוקול שהודגם שבו שתילים טופחו אנכית על צלחת ההשתלה לפני שהוכנסו לתעלות הפתוחות ברצועות הניב שיעור הצלחה כולל של השתלה ל -48% במהלך שני הניסויים הראשונים. בהתחשב באחוזי ההצלחה הנמוכים יותר של הניסוי השלישי והקטן יחסית, שניתן לייחס לשינויים קלים באתרי ההשתלה, נמצא כי הצלחת ההשתלה הכוללת היא 45%, בדומה לשיטה בה טופחו השתילים על לוחות אופקיים, נחתכו על משטח מוצק והוחדרו לרצועות השתלה.

עם זאת, הפרוטוקול המוכח גוזל פחות זמן באופן יחסי. באמצעות פרוטוקול זה, מעבדות חדשות להשתלת שתילים יכולות ליצור במהירות מספר רב של התקני תמיכה להשתלה תוך יכולת להתאים אישית את המכשיר כך שיתאים לצרכים הספציפיים שלהן בקלות.