초기 단계 파종 접목은 식물에서 장거리 신호를 설정하는 강력한 도구입니다. 이 방법이 실습 교육없이 파종 접목을 성공적으로 채택하는 데 도움이되기를 바랍니다. 실리콘 엘라스토머를 주조하기 위해 100x100mm 크기의 정사각형 페트리 접시를 준비하는 것으로 시작합니다.
아세톤으로 와이어의 외부 종이 코팅을 제거한 후 트위스트 타이로 29 게이지 와이어를 가져옵니다. 그리고 금속 튜브 랙과 같이 무겁고 평평한 물체로 단단하고 균일한 표면에 와이어를 굴려 와이어를 완전히 곧게 펴십시오. 그런 다음 정사각형 페트리 접시에 서로 같은 거리에 곧게 펴진 전선 4개를 놓고 전선이 접시 바닥에 평평하게 놓이도록 합니다.
혼합 된 실리콘 엘라스토머 용액을 페트리 접시의 전선 위에 붓고 접시에 덮개를 놓습니다. 실리콘이 실온에서 24 내지 48시간 동안 경화되도록 한 후, 깨끗한 집게를 사용하여 페트리 접시로부터 실리콘 시트를 제거하고, 그것을 깨끗하고 평평한 표면으로 옮긴다. 실리콘 시트에서 전선을 제거합니다.
채널이 한쪽에서 열리도록 하려면 미세 집게를 사용하여 채널의 열린 면을 막고 있는 얇은 실리콘 층을 제거합니다. 깨끗한 가위를 사용하여 채널에 수직 인 실리콘 시트를 3mm 스트립으로 자릅니다. 각 스트립을 알루미늄 호일 봉투에 넣고 오토클레이브 테이프로 밀봉합니다.
필요할 때까지 보관하기 전에 스트립을 섭씨 121도에서 최소 30분 동안 오토클레이브합니다. 씨앗을 살균하고 vernalize하려면 1.5 밀리리터 마이크로 원심 분리기 튜브에 0.1 % 트윈 20을 함유 한 50 % 표백제 용액 1 밀리리터를 취하여 최대 100 개의 애기장대 씨앗을 현탁시킵니다. 종자 현탁액을 실온에서 5 내지 10분 동안 인큐베이션한다.
배양 후, 무균 조건에서 표백제 용액을 흡인 또는 피펫팅합니다. 1 밀리리터의 멸균 증류수로 씨앗을 헹굽니다. 씨앗을 헹구는 동안 튜브를 적절하게 뒤집으십시오.
튜브 상단에 남아 있는 표백제를 제거하려면 헹굼을 네 번 반복합니다. 튜브에 씨앗과 함께 약 250 마이크로 리터의 물을 남겨두고 씨앗을 섭씨 4 도의 어두운 곳에서 3 일 동안 보관하십시오. 다음으로, 종자를 도금하기 전에 준비된 MS 플레이트의 표면에 멸균 스트립을 놓아 스트립의 채널과 종자 정렬을 안내합니다.
그런 다음 무균 상태에서 작업하면서 20 마이크로 리터 피펫 팁을 사용하여 적절한 수의 준비된 씨앗을 흡인하고 플레이트에 옮깁니다. 씨앗이 도금되면 멸균 스트립을 제거하십시오. 접시를 덮으십시오.
그리고 판의 측면 중 하나를 파라 필름으로 씨앗 줄과 평행하게 밀봉하십시오. 파라필름 상단과 플레이트의 다른 모든 가장자리에 통기성 테이프를 감아 배양 중에 공기를 교환할 수 있도록 합니다. 파라필름으로 밀봉된 면이 아래를 향하도록 두 개의 판을 수직으로 조심스럽게 향하게 합니다.
15밀리리터 원심분리기 튜브를 수평으로 놓고 고무 밴드로 상단에 고정하여 바닥에서 분리합니다. 플레이트 표면이 벤치탑 표면과 100에서 110 사이의 각도를 이루는지 확인합니다. 묘목 배축이 약 5mm 길이로 자랄 수 있도록 섭씨 21도의 완전한 어둠 속에서 72시간 동안 이 방향으로 플레이트를 보관합니다.
그런 다음 어둠에서 설정을 제거하고 접목하기 전에 같은 온도에서 2-4 일 동안 16 시간의 빛과 8 시간의 어둠주기로 유지하십시오. 도금 후 5 일에서 7 일 사이에 묘목을 접목하십시오. 묘목 위에 접목 스트립을 놓고 배축을 채널에 맞 춥니 다.
묘목을 부드럽게 배치하여 뿌리-배축 접합부가 실리콘 스트립의 바닥에 남아 묘목을 절단할 준비를 합니다. 해부 범위의 도움으로 멸균 된 후드에서 작업하면서 접목을 위해 자제를 준비하십시오. 신선한 메스 칼날을 사용하여 배축을 가로질러 직선적이고 깨끗하며 수직으로 절단합니다.
묘목을 한천에 밀어 넣거나 누르지 마십시오. 다음으로, 슈트를 제거하고 미디어 표면과의 접촉을 보장하여 슈트의 절단 부분을 수화 상태로 유지하십시오. 대안적으로, 슈트는 멸균 증류수로 채워진 페트리 접시로 이동할 수 있습니다.
대목을 준비하려면 닫힌 집게 사이의 공간 내에서 뿌리를 조심스럽게 잡고 부드럽게 돌려 당겨 대목의 절단 부분을 스트립 중앙에 남겨 둡니다. 그런 다음 끝이 가는 집게를 사용하여 원하는 슈트를 부드럽게 집어 채널 상단에 삽입합니다. 육안으로 접순과 대목 사이의 접촉을 확인하여 성공적인 이식편을 얻으십시오.
모든 이식편이 만들어진 후, 파라 필름과 통기성 테이프로 판을 감싸고, 묘목이나 실리콘 스트립을 방해하지 않고 앞에서 설명한 것과 같은 방식으로 판을 설치하십시오. 플레이트를 섭씨 26도로 설정된 성장 챔버로 조심스럽게 옮기고 16시간의 빛과 8시간의 어두운 주기로 합니다. 7 일에서 10 일 후, 집게를 사용하여 한쪽에서 실리콘 스트립을 조심스럽게 떼어 내고 모종을 채널에서 풀어 무균 상태에서 접목 된 묘목을 평가하십시오.
접순에서 자라는 우발적인 뿌리는 신선한 메스 칼날로 자르거나 끝이 가는 집게로 으깨서 제거합니다. 다시 한 번, 대목이 접순에 단단히 부착되어 성공적인 이식편을 형성하는지 시각적으로 평가하십시오. 성공적인 이식편을 묘목 번식 토양으로 옮기고 묘목이 자리를 잡는 동안 며칠 동안 투명 플라스틱으로 토양을 덮습니다.
앞서 언급한 섭씨 21도의 빛과 어둠 주기 하에서 식물이 자랄 수 있도록 합니다. 최적의 접목 프로토콜을 결정하기 위한 접목 시험에서 종자가 밀폐된 채널이 있는 실리콘 스트립에서 직접 발아했을 때 전체 접목 성공률이 25%인 것으로 나타났습니다. 발아 중 배아자엽과 라디칼이 아래쪽을 향하도록 종자의 방향을 바꾸면 접목 효율이 33%로 약간 증가종자와 성장 배지 사이의 접촉을 허용하기 위해 채널의 실리콘 폐쇄를 제거하면 묘목의 85%가 성공적으로 발아했습니다.
그러나 접목 성공률은 31 %로 유지되어 스트립 발아로 최적의 묘목 성장을 달성 할 수 없음을 나타냅니다. 흥미롭게도, 묘목을 스트립의 열린 채널에 삽입하기 전에 접목 플레이트에서 수직으로 재배하는 입증된 프로토콜은 처음 두 번의 시도에서 전체 접목 성공률을 48%로 산출했습니다. 3차 시험의 성공률이 낮고 접목 부위의 약간의 차이에 기인할 수 있는 상대적으로 작은 시험을 고려할 때 전체 접목 성공률은 45%로 나타났으며, 이는 묘목을 수평판에 재배하고 단단한 표면에 절단하여 접목 스트립에 삽입하는 방법과 비슷합니다.
그러나 시연된 프로토콜은 비교적 시간이 덜 걸립니다. 이 프로토콜을 사용하여 묘목 이식을 처음 접하는 실험실은 많은 수의 접목 지원 장치를 신속하게 만들 수 있으며 특정 요구 사항에 맞게 장치를 쉽게 사용자 지정할 수 있습니다.
