母乳微生物群的个体化重构：现实世界中的可行方法

我们正在研究是否有可能通过可在医院实施的方法恢复特定母乳的微生物群，从而保留巴氏杀菌乳汁中的营养结构。我们的目标是为新生儿制定一种新的营养超级战略并评估其可见性。我们相信，通过实验重构母乳微生物群的最大挑战是实现更接近母乳中原始特征的重建，并且要快速完成。

这不仅会增强其效果，还会进一步提高手术的安全性。我们的目标是确定这些新的营养超级策略是否为新生儿提供显着的临床益处。我们相信，如果实际益处得到证实，该策略可以很容易地在所有拥有母乳库的地区实施，从而对整体非成人健康产生积极影响。

获得所需的同意后，让母亲在护士的监督下使用电动吸奶器将乳汁挤入消毒容器中。收集后，在盛放母乳的容器上贴上母亲的信息、收集日期和时间的标签。将母亲自己的乳汁或 MOM 储存在零下 4 摄氏度或更低的温度下长达 12 小时。

解冻生牛奶或巴氏杀菌捐赠母乳或 PDM，储存在带塑料盖的消毒玻璃容器中，置于 40 摄氏度的水浴中。在牛奶温度超过 5 摄氏度之前，将母乳瓶从水浴中取出。接下来，穿上实验服、口罩、帽子和手套。

按照当地机构规程，使用表面清洁液清洁工作台面。将最多 1 毫升 MOM 的等分试样转移到冻存管中，用于随后的 16S 测序和细菌计数。将冻存管储存在零下 80 摄氏度。

使用无菌移液器，将剩余体积的 MOM 转移到食品安全容器中，相当于最终所需体积的 10%。将容器浸入 37 摄氏度的水浴中。接下来，将 1 毫升等分试样的 PDM 转移到不含 DNase/RNase 的冻存管中，用于 16 秒测序和细菌计数。

将冻存管储存在零下 80 摄氏度。使用无菌移液器，将相当于最终所需体积 90% 的 PDM 量转移到装有 MOM 的容器中，形成接种的母乳。用盖子密封容器以防止污染，并将其浸入 37 摄氏度的水浴中 4 小时，让微生物在牛奶中繁殖。

四小时后，从水浴中取出装有发酵接种母乳的容器。将 1 毫升等分试样的复溶牛奶转移到不含 DNase/RNase 的冻存管中，用于 16 秒测序和细菌计数。将冻存管储存在零下 80 摄氏度。

将剩余体积的冲原奶转移到消毒的容器中，以便喂养新生儿。