Reconstitución individualizada de la microbiota de la leche materna: un enfoque factible en entornos reales

Estamos investigando si es posible recuperar la microbiota de una leche materna concreta preservando la estructura nutricional de la leche pasteurizada mediante una metodología que pueda implementarse en los hospitales. Nuestro objetivo es desarrollar una nueva súper estrategia nutricional para los recién nacidos y evaluar su visibilidad. Creemos que el mayor reto a la hora de reconstituir experimentalmente la microbiota de la leche materna es conseguir una reconstrucción que se acerque aún más al perfil original presente en la leche materna, y hacerlo rápidamente.

Esto no solo mejorará sus efectos, sino que también aumentará aún más la seguridad del procedimiento. Nuestro objetivo es determinar si esta nueva superestrategia nutricional ofrece beneficios clínicos significativos para los neonatos. Creemos que, si se confirman los beneficios prácticos, la estrategia podría implementarse fácilmente en todas las regiones con bancos de leche humana, lo que tendría un impacto positivo en la salud general de los no adultos.

Después de obtener el consentimiento requerido, haga que la madre extraiga la leche con un extractor de leche eléctrico en un recipiente esterilizado bajo la supervisión de la enfermera. Después de la recolección, etiquete el recipiente que contiene la leche con la información de la madre, la fecha y la hora de la recolección. Almacene la leche materna o MOM a menos cuatro grados centígrados o menos durante un máximo de 12 horas.

Descongele la leche cruda o la leche pasteurizada de donante o PDM, almacenada en recipientes de vidrio esterilizados con tapas de plástico en un baño de agua a 40 grados centígrados. Retire el biberón de leche humana del baño de agua antes de que la temperatura de la leche supere los cinco grados centígrados. A continuación, use una bata de laboratorio, mascarilla, gorra y guantes.

Limpie la superficie de trabajo con una solución limpiadora de superficies, siguiendo el protocolo institucional local. Transfiera la alícuota de hasta un mililitro de MOM a un criotubo para la posterior secuenciación de 16S y recuento bacteriano. Guarde el tubo criogénico a menos 80 grados centígrados.

Con una pipeta estéril, transfiera el volumen restante de MOM, equivalente al 10% del volumen final deseado, a un recipiente apto para alimentos. Sumerge el recipiente en un baño de agua a 37 grados centígrados. A continuación, transfiera la alícuota de un mililitro de PDM a un criotubo libre de DNasa/ARNasa para la secuenciación de 16S y el recuento bacteriano.

Guarde el tubo criogénico a menos 80 grados centígrados. Con una pipeta estéril, transfiera una cantidad de PDM equivalente al 90% del volumen final deseado al recipiente que contiene la MOM, formando la leche materna inoculada. Selle el recipiente con una tapa para evitar la contaminación y sumérjalo en un baño de agua a 37 grados centígrados durante cuatro horas para permitir que los microorganismos se multipliquen en la leche.

Pasadas cuatro horas, retira del baño maría el recipiente con la leche materna fermentada inoculada. Transfiera la alícuota de un mililitro de la leche reconstituida a un tubo criogénico libre de DNasa/ARNasa para la secuenciación de 16S y el recuento bacteriano. Guarde el tubo criogénico a menos 80 grados centígrados.

Transfiera el volumen restante de leche reconstituida a un recipiente desinfectado para alimentar a los recién nacidos.