Estamos investigando se é possível recuperar a microbiota de um leite materno específico, preservando a estrutura nutricional do leite pasteurizado, por meio de metodologia que pode ser implementada em hospitais. Nosso objetivo é desenvolver uma nova super estratégia nutricional para recém-nascidos e avaliar sua visibilidade. Acreditamos que o maior desafio na reconstituição experimental da microbiota do leite humano é conseguir uma reconstrução ainda mais próxima do perfil original presente no leite materno, e fazê-lo rapidamente.
Isso não apenas aumentará seus efeitos, mas também aumentará ainda mais a segurança do procedimento. Nosso objetivo é determinar se essa nova super estratégia nutricional oferece benefícios clínicos significativos para os neonatos. Acreditamos que, se os benefícios práticos forem confirmados, a estratégia poderá ser facilmente implementada em todas as regiões com bancos de leite humano, levando a um impacto positivo na saúde geral de não adultos.
Depois de obter o consentimento necessário, faça com que a mãe extraia leite usando uma bomba tira leite elétrica em um recipiente esterilizado sob a supervisão da enfermeira. Após a coleta, rotule o recipiente contendo o leite com as informações da mãe, a data e o horário da coleta. Armazene o leite materno ou MOM a menos quatro graus Celsius ou menos por até 12 horas.
Descongele o leite cru ou o leite de doador pasteurizado ou PDM, armazenado em recipientes de vidro esterilizados com tampas de plástico em banho-maria a 40 graus Celsius. Remova a mamadeira de leite humano do banho-maria antes que a temperatura do leite exceda cinco graus Celsius. Em seguida, use jaleco, máscara, boné e luvas.
Limpe a superfície de trabalho com uma solução de limpeza de superfícies, seguindo o protocolo institucional local. Transferir a alíquota de até um mililitro do MOM para um criotubo para subsequente sequenciação de 16S e contagem bacteriana. Armazene o criotubo a menos 80 graus Celsius.
Usando uma pipeta estéril, transfira o volume restante de MOM, equivalente a 10% do volume final desejado, para um recipiente seguro para alimentos. Mergulhe o recipiente em banho-maria a 37 graus Celsius. Em seguida, transfira a alíquota de um mililitro do PDM para um criotubo livre de DNase / RNase para sequenciamento 16S e contagem bacteriana.
Armazene o criotubo a menos 80 graus Celsius. Usando uma pipeta estéril, transfira uma quantidade de PDM equivalente a 90% do volume final desejado para o recipiente que contém o MOM, formando o leite materno inoculado. Feche o recipiente com uma tampa para evitar contaminação e mergulhe-o em banho-maria a 37 graus Celsius por quatro horas para permitir que os microrganismos se multipliquem no leite.
Após quatro horas, retire o recipiente com o leite materno inoculado fermentado do banho-maria. Transfira a alíquota de um mililitro do leite reconstituído para um criotubo livre de DNase / RNase para sequenciamento de 16S e contagem bacteriana. Armazene o criotubo a menos 80 graus Celsius.
Transfira o volume restante de leite reconstituído para um recipiente higienizado para alimentar os recém-nascidos.
